本发明专利技术提出了一种用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂及其制备方法，每100mL抗冻剂中包括下列组分：酪蛋白1.0～3.0g、葡萄糖2.0～3.0g、乳糖1.0～2.0g、HEPES?BUFFER?3.0～6.0g、甘油2.0～3.0mL、卵黄2～4mL、青霉素45～55万IU、庆大霉素4.5～5.5g、两性霉素B?20～30mg，余量为HANK溶液，解决了现有技术中母畜繁殖周期长、人工授精受胎率低，驴的冷冻精液生产操作程度复杂，难度大的问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，特别是指。
技术介绍
精液冷冻保存与人工授精技术相结合，在现代畜牧业生产中发挥着巨大的作用。同时精液保存利用技术也是挖掘优秀种公驴繁殖潜能的重要手段；采用冷冻精液可提高种公驴利用效率，降低种公驴的饲养头数；而且由于选优淘劣，投入冻精生产的种公驴生产性能和遗传品质优良，加快了驴遗传改良速度；人工授精技术还可减少生殖道疾病的发生与传播，间接提高了母驴的受胎率；冷冻精液运输方便，可使与配母驴不受地域限制，等于延长了种公驴的利用年限和使用地域。此外，目前世界多数国家，都已建立濒危或珍稀动物精液基因库，以冷冻精液的形式长期大量保存，以便将来随时取用。2006年6月2日农业部第662号发文公告，宣布德州驴等138个畜禽品种为国家级畜禽遗传资源保护品种。但由于驴为季节性发情动物、母畜繁殖周期长、人工授精受胎率低等原因，国内外对驴精液保存与冷冻技术一直未开展系统性的研究，也未取得显著性的突破。现阶段，驴繁殖主要采用本交方式，个别技术好的畜牧改良员有时也将采出的精液(鲜精)不稀释或低倍稀释(I 2 4)，立即给发情母驴输精，它适用于母驴季节性发情较明显，而且数量较多的地区。与本交相比，效率可提高5 — 10倍。但由于我国驴品种较多，养殖区分布较广，多在山区或交通不便区域，且饲养方式多以散户居多，母驴分布不集中，鲜精或低倍稀释的精液人工授精技术推广面积较少。此外，由于驴鲜精体外保存时间极短，几小时后活力近乎丧失殆尽，这使得驴的鲜精人工授精技术受到时间、地点的极大限制。因此，驴繁殖生产中迫切需要保存时间更长、携带更为方便的优质公驴精液来改良全社会的驴生产群体。精液保存分为 常温(15 °C 25 °C)保存、低温保存(0°C 5°C)和冷冻(一79°C 一 196°C)保存三种方法。常温保存技术研究开展的最早，相对比较成熟，但在常温下，一方面微生物生长迅速会影响精液质量，另一方面常温保存时精子活力下降较快。低温保存技术相对冷冻保存而言操作简单方便，成本低，但低温保存技术需要既能提供营养又能保护精子的非渗透性低温保护剂及稀释液。冷冻保存是指将精液经过特殊处理后置于液氮或干冰中，可保存该物种种质资源数年甚至数十年，切实发挥良种公畜的遗传资源。但由于不同公畜精子的生物学特性不同，其冷冻保存效果也存在很大的差别。如牛精液的冷冻保存技术比较成熟，尤其牛精液细管法程序生产已经普及；但羊精子冻后普遍存在情期受胎率不稳定、受胎率低、重复率低等诸多问题；而猪的精子因含脂量较高，脱水比较困难，冷冻-解冻后精子存在超微结构受到损伤(如精子膜、顶体和精子核泡化、损伤或破裂)、在雌性生殖道内寿命缩短和受精率低等问题，因而猪精液冷冻保存还一直处于试验阶段。目前国内外关于驴精液冷冻保存的研究很少，主要原因是一方面是驴的繁殖率低，妊娠期长；第二，由于不同的驴个体间其精液品质有明显的差异，且驴精子本身对低温打击特别敏感，在冷冻解冻过程中极易损伤，因而冷藏和冷冻后的精液极大地降低了受胎率；第三，由于驴发情时间长，人工授精的时机掌握不准确造成其妊娠率低；最后，公驴每次平均射精量多达70ml，密度较稀，且精清中的电解质成分会促进精子早衰。因而，驴的冷冻精液生产操作程度复杂，难度大，严重制约着冷冻精液的应用。驴为马属动物，分布甚广，遍及亚、非、拉各大洲。德州驴，是中国五大优良驴种之一，体格高大，结构匀称，外形美观，体型方正，头颈躯干结合良好。是改良小型驴种及作为种间杂交的一个理想品种。因此生产中亟需进行德州驴精液的冷冻保存研究。抗冻剂在精液冷冻过程中是必不可少的成分。在冷冻过程中，抗冻剂的作用主要表现在以下几个方面1.补充精子营养；2.减少精液粘稠度；3.降低异物对精子影响；4.缓和代谢产物对精子的危害作用；5.在冷冻过程中，保护精子，增强精子对低温的抵抗力和抗氧化能力，减少精子的冷冻损伤。目前，在冷冻精液的制作过程中，常常选择能够抑制精子活动，减少能量损耗，延长精子寿命的抗冻剂。牛、羊、马、猪精液冷冻保存的抗冻剂多用鸡的卵黄，均取得了不错的冷冻保存效果。一方面卵黄可降低精子在向4°C降温过程中遭受冷休克的受损程度；另一方面卵黄价格便宜，取材方便。但是，并非卵黄中所有成分均对精子有益，如卵黄中高密度脂蛋白可抑制精子呼吸，降低精子活率；第二，卵黄属于动物源性物质，其中可能携带多种病原微生物，会引发生物安全问题。如通过人工授精可引发受体母驴生殖道感染，影响受胎率，病原微生物还会影响精液的活率及保存时间；另一方面来源于不同时间、不同的生理状态、不同个体的卵黄，卵黄的大小、含量多少等质量标准很难统一，用于冻精生产不仅影响冻精产品的质量，而且很难实现标准化、规范化。
技术实现思路
本专利技术提出一种用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂，解决了现有技术中母畜繁殖周期长、人工授精受胎率低，驴的冷冻精液生产操作程度复杂，难度大的问题。 本专利技术的技术方案是这样实现的一种用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂，每IOOmL抗冻剂中包括下列组分酪蛋白1. O 3. 0g、葡萄糖 2. O 3. 0g、乳糖1. O 2. 0g、HEPES BUFFER3. O 6. 0g、甘油2. O 3. OmL、卵黄2 4mL、青霉素45 55万IU、庆大霉素4. 5 5. 5g、两性霉素B 20 30mg，余量为HANK溶液。作为优选的技术方案，一种用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂，每IOOmL抗冻剂中包括下列组分酪蛋白2. 0g、葡萄糖 2. 5g、乳糖1. 5g、HEPES BUFFER 5. 0g、甘油 2. 5mL、卵黄 3mL、青霉素50万IU、庆大霉素5g、两性霉素B 25mg，余量为HANK溶液。本专利技术提出又一种制备用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂的方法，其包括步骤I)按照每IOOmL抗冻剂中包含酪蛋白1. O 3. 0g、葡萄糖2. O 3. 0g、乳糖1. O 2.0g,HEPES BUFFER 3. O 6. 0g、甘油 2. O 3. OmL、卵黄 2 4mL、青霉素 45 55 万 IU、庆大霉素4. 5 5. 5g、两性霉素B 20 30mg，余量为HANK溶液称取各组分，备用；2)将上述称取的酪蛋白、葡萄糖、乳糖、HEPES BUFFER用HANK溶液配置成基础液；3)向上述配置成的基础液中添加步骤I)中称取的青霉素、庆大霉素、两性霉素B配置成I液；4)将所述I液整pH为7.1 7. 8，然后进行过滤灭菌，放入3 5°C冰箱中备用5)使用前取所述I液，向其中加入步骤I)中称取的卵黄，配置成II液，即得所述用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂。作为优选的技术方案,按照每IOOmL抗冻剂中包含酪蛋白2. 0g、葡萄糖2. 5g、乳糖1.5g、HEPES BUFFER 5. 0g、甘油2. 5mL、卵黄3mL、青霉素50万IU、庆大霉素5g、两性霉素B25mg，余量为HANK溶液称取备用。由于采用了上述技术方案，，每IOOmL抗冻剂中包括下列组分酪蛋白1. O 3. 0g、葡萄糖2. O 3. 0g、乳糖1. O 2.0g,HEPES BUFFER 3. O 6. 0g、甘油 2. O 3. OmL、卵黄 2 4mL、青霉素 45 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂，其特征在于，每100mL抗冻剂中包括下列组分：酪蛋白1.0～3.0g、葡萄糖2.0～3.0g、乳糖1.0～2.0g、HEPES?BUFFER3.0～6.0g、甘油2.0～3.0mL、卵黄2～4mL、青霉素45～55万IU、庆大霉素4.5～5.5g、两性霉素B?20～30mg，余量为HANK溶液。
【技术特征摘要】
1.一种用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂，其特征在于，每IOOmL抗冻剂中包括下列组分酪蛋白1. 0 3. 0g、葡萄糖 2. 0 3. 0g、乳糖1. 0 2. 0g,HEPES BUFFER3. 0 6. 0g、甘油2. 0 3. OmL、卵黄2 4mL、青霉素45 55万IU、庆大霉素4. 5 5. 5g、两性霉素B20 30mg，余量为HANK溶液。2.如权利要求1所述的一种用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂，其特征在于，每IOOmL抗冻剂中包括下列组分 酪蛋白2. 0g、葡萄糖2. 5g、乳糖1. 5g、HEPES BUFFER 5. 0g、甘油2. 5mL、卵黄3mL、青霉素50万IU、庆大霉素5g、两性霉素B 25mg，余量为HANK溶液。3.一种制备如权利要求1所述的用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂的方法，其特征在于，包括步骤 1)按照每IOOmL抗冻剂中包含酪蛋白1.0 3. 0g、葡萄糖2. 0 3. 0g、乳糖1. 0 2.0g,HEPES BUFFE...
【专利技术属性】
技术研发人员：张燕，王长法，张瑞涛，朱涛涛，王玲玲，鞠志花，黄金明，齐超，高运东，仲跻峰，侯明海，王银朝，闫金华，
申请(专利权)人：山东天龙牧业科技有限公司，山东省农业科学院奶牛研究中心，
类型：发明
国别省市：
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