一种生物指示剂中嗜热脂肪芽孢杆菌的初始孢子数量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种生物指示剂中嗜热脂肪芽孢杆菌的初始孢子数量测定方法，包括以下步骤：取生物指示剂，加入无菌水得到一次稀释液，分装到多支无菌试管；水浴热击；取出并迅速冷却至室温，对每一支无菌试管进行以下操作：采用10倍递增稀释法逐级稀释至适宜梯度得到二次稀释液，取二次稀释液2份分别注入两个无菌平皿内，再分别注入大豆酪蛋白琼脂培养基，凝固后培养；对所有无菌平皿内嗜热脂肪芽孢杆菌的初始孢子进行计数，再将所有计数结果进行平均计算并再除以上述适宜梯度对应的稀释级，得到初始孢子数量，完成测定。本发明专利技术所述方法经过验证稳定可行，解决了以前生物指示剂中嗜热脂肪芽孢杆菌的初始孢子数量无法测定的问题，便于推广应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种生物指示剂中嗜热脂肪芽孢杆菌的初始孢子数量测定方法，其特征在于：包括以下步骤：(1) 取生物指示剂，加入无菌水并混合均匀后得到一次稀释液，一次稀释液中的生物指示剂与无菌水之间的体积比为1﹕（3‑5），将一次稀释液分别按相同体积装入多个无菌试管，得到供试品，另取1支无菌试管装入同体积的无菌水备用；(2) 将上述供试品和装有无菌水的无菌试管共同进行水浴热击，水浴温度为95‑100℃，水浴时间为10‑20分钟，在此过程中把温度计插入装有无菌水的无菌试管内以测定水浴温度；(3) 水浴热击完成后取出供试品，迅速冷却至室温，对每一支装有一次稀释液的无菌试管进行以下操作：根据生物指示剂标示初始孢子数量采用10倍递增稀释法，逐级稀释至适宜梯度得到二次稀释液，该适宜梯度使其菌落数范围为30～300cfu/ml，在该适宜梯度对应的稀释级下，以无菌操作方法用灭菌吸管吸取二次稀释液两份，每份的体积为A ml，分别注入两个无菌平皿内，再分别向两个无菌平皿内注入体积为（15～20）A ml温度不超过450℃的溶化的大豆酪蛋白琼脂培养基，混合均匀，待其凝固后将两个无菌平皿倒置培养，培养温度为55~60℃，培养时间为40‑60小时；(4) 完成培养后，对所有的无菌平皿内的嗜热脂肪芽孢杆菌的初始孢子进行计数，再将所有计数结果进行平均计算，平均后的结果再除以步骤（3）中所述适宜梯度对应的稀释级，得到最终的初始孢子数量，完成测定。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邓茂林，伍丹，谭鸿波，吴小愚，刘文军，罗成鑫，刘思川，程志鹏，万阳浴，葛均友，
申请(专利权)人：四川科伦药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51