一种表达嗜热木聚糖酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法技术

一种表达嗜热木聚糖酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，涉及一种微生物重组菌的构建方法。首先根据波曲热多孢菌的内切-1,4-β-木聚糖酶基因设计了引物，PCR扩增成功后进行酶切消化，连接载体质粒pHT43，经大肠杆菌DH5α扩增后，挑选阳性克隆，经菌体PCR及测序验证后，将基因序列测序正确的质粒大量抽提，经过转化导入枯草芽孢杆菌WB800N宿主，培养并经过1mMIPTG诱导表达后，发酵液上清经SDS-PAGE电泳证明嗜热内切-1,4-β-木聚糖酶的重组蛋白成功获得表达。所述重组蛋白的相对分子量为27KD，最适反应温度为80℃，最适反应pH为6.0。所述嗜热内切-1,4-β-木聚糖酶在造纸业和食品加工业中有广泛应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种表达嗜热木聚糖酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于包括以下步骤：以波曲热多孢菌基因组为模板，采用Phusion高保真DNA聚合酶进行PCR扩增，引物：P1: 5′‑ CAACACTCTAGAATGGATACAACAATCACACA‑3′P2: 5′‑ ATCATTCCCGGGTCAAAGTGTAGCAACGC‑3′反应条件为：98 ℃预变性30 s；（98 ℃变性10 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，30个循环）；最后72 ℃延伸5 min，4 ℃保存;使用1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物；2）将上述PCR扩增产物与枯草表达载体pHT43分别使用Xba I和Sma I...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，刘珺，原素英，郑春阳，
申请(专利权)人：天津强微特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12