器官冷藏组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种移植用的器官冷藏组合物，其包含器官冷藏溶液和心肌营养素-1或其功能等效变体。本发明专利技术还涉及用于制备所述组合物的方法和试剂盒，其用于移植用的器官的冷却保护和/或冷藏（特别用于肾脏、肺和心脏），并且还涉及冷藏方法以及通过这些方法的冷却-保存的离体器官。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种移植用的器官冷藏组合物，及其用途、用于制备其的方法和试剂盒。
技术介绍
器官移植广泛用于以下器官，如心脏、肺、胰脏、肠(结肠)以及，特别地，肾和肝。对器官不断增长的需求和供体不足导致等待队列增加和使用次优的供体的器官的更大需求。·获得的移植用的器官必须储存并从一个医院运输到另一个医院。需要时间来测试在供体和受体之间的组织相容性，并为受体患者做好准备。器官和组织可以在体外保存的时期根据所述器官、供体年龄以及健康状况、保存方法和温度的不同而不同。目前，用于临床实践以延长捐赠器官的生存能力的标准技术是通过特殊的保藏液来冷冻贮存或冷藏。这些溶液用于第一阶段，在分离之前，用于器官的灌注(清洗)以移除并替换供体的血液，同时将器官冷却到4°C。在第二阶段，用冷藏溶液储存和维持分离的器官，同时直到移植，一直维持在低温(大约4°C )下。冷藏的目的在于通过抑制代谢来保存器官，其次防止并使冷却局部缺血可能导致的变化减到最小。Maathuis 等(Transplantation, 2007; 83:1289-1298)提供对于冷藏溶液的最近综述，其公开了一般要求、以及组合物及其多种性能，例如Euro-C011 ins溶液(EC)、Marshall’ s高渗朽1檬酸盐溶液(HOC)、鹿糖磷酸缓冲液、威斯康星大学(University ofWisconsin)溶液(UW)、组氨酸-色氨酸-酮戊二酸(HTK)溶液、Celsior溶液(CEL)、乔治 洛佩兹学院溶液(IGL-1)。该文献还公开了现有这些溶液中的一些对于肾脏(Ahmadet al. Kidney International2006;69:884-893)、心脏(Michel etal. J. Heart LungTransplant 2002;21:1030-1039)> 肝脏(El-Wahsh M. Hepatobiliary Pancreat DisInt2007;6:12-16)和肠(Wei et al. Gastroenterology 2007; 13:3684-3691)的保存的效力的比较研究。最常用的冷藏溶液是UW溶液，特别是用于肝脏和肾脏；Celsior溶液用于心脏保存；并且Euro-Collins或者Perfadex用于肺保存。就灌注机器来说，这些已经改进，例如对于UW-葡糖酸盐(Belzer MPS)。US 4798824公开了一种冷藏溶液，其包含葡糖酸盐和羟乙基淀粉。US 4879283公开了威斯康星大学溶液(UW或者Belzer溶液)，其包含下列不同组分作为非渗透剂以减少细胞膨胀的乳糖醛酸盐和棉子糖；和避免浮肿的羟乙基淀粉。然而，带有现在的保藏液的冷藏存在明显的局限性。由冷藏引起的组织损伤和炎症反应可能提高免疫原性并引发器官的排异反应。因此，例如在具有排斥反应的肾移植的试验模型中，冷却局部缺血促使由肾衰竭和加速的急性排斥反应导致的死亡率增加(Salahudeen AK. Am JPhysiol Renal Physiol. 2004;287:F181-F187 ；Herrero-Fresnedaet al. Transplant Proc.2005;37:3712-3715)。冷却局部缺血与渗透压调节、能量代谢和需氧代谢的改变有关。Na-K-ATP酶活性和ATP水平的下降允许胞内的钠和水的积累，从而引起细胞膨胀。同样地，通过葡萄糖代谢产生的乳酸导致溶酶体不稳定和线粒体功能改变，引起细胞膨胀，激活线粒体细胞凋亡途径并产生自由基。另一方面，一旦已经进行移植，就会增加由器官的再灌注引发的新的损害，其可能由于它已经受到冷却局部缺血而更敏感。该损害过程包括活性氧自由基、炎症反应和细胞溶质钙的增加，以及蛋白水解酶，例如半胱天冬酶的活化。因此，现有技术中需要提供合适的器官冷藏组合物，以使减少与冷却局部缺血和冷却保存的器官的移植后再灌注有关的损害成为可能。专利技术简述本专利技术的第一方面涉及一种器官冷藏组合物，其共同地或者独立地包含， (i)心肌营养素-1 (CT-1)或者其功能等效变体，和(ii)器官冷藏溶液。本专利技术的另一方面涉及一种器官冷藏组合物的制备方法，其包含将心肌营养素-1或者其功能等效变体添加到器官冷藏溶液中。本专利技术的另一方面涉及心肌营养素-1或者其功能等效变体用于制备移植用的器官的冷却保护和/或保存组合物的用途。本专利技术的又一方面涉及根据本专利技术的用于移植用的器官的冷却保护和/或保存的组合物的用途。本专利技术的另一方面涉及根据本专利技术的用于移植用的器官的冷却保护和/或保存的器官冷藏组合物。本专利技术的另一方面还涉及一种用于器官冷藏的方法，其包含使所述器官与根据本专利技术的组合物相接触。本专利技术的另一方面涉及一种通过本专利技术的方法获得的冷却保存的离体器官。本专利技术的最终方面涉及一种设计用于制备器官冷藏组合物的试剂盒，其包含(i)心肌营养素-1或者其功能等效变体；和(ii)器官冷藏溶液或者，可选择地，用于制备所述溶液的介质和添加剂。附图说明图1. Euro-Collins 溶液(EC)和含有 0. lmg/L 的 CT-1 (EC[C Tl])的 Euro-Collins溶液对威斯塔大鼠的肾脏在用小时表示的不同的时期(t)的冷藏效果(4°C)的比较研究。还包括模拟的大鼠组(Sim)。n=每组5只动物。A)超氧阴离子自由基(SOA)的肾水平，以nmol/mg蛋白质/分钟表示。B)肿瘤坏死因子a (TNF a )的肾水平，以pg/mL表示。C)可诱导的一氧化氮合酶(iNOS)的肾水平，以任意单位表示。D)由肾的IkB (IkB)的水平检测的NFk B转录因子的活化，以任意单位表示。图2.威斯康星大学溶液(UW)和具有0. lmg/L的CT_1 (Uff[CTl])的威斯康星大学溶液对威斯塔大鼠的肾脏在用小时表示的不同的时期(t)的冷藏效果(4°C)的比较研究。还包括模拟的大鼠组(Sim)。n=每组5只动物。A)超氧阴离子自由基(SOA)的肾水平，以nmol/mg蛋白质/分钟表示。B)肿瘤坏死因子a (TNF a )的肾水平，以pg/mL表示。C)可诱导的一氧化氮合酶(iNOS)的肾水平，以任意单位表示。D)由肾的IkB (IkB)的水平检测的NFk B转录因子的活化，以任意单位表示。图3.威斯康星大学溶液(UW)和具有0. 2mg/L的CT_1 (Uff[CTl])的威斯康星大学溶液对威斯塔大鼠的肾脏在不同保存时期(t) 30分钟(30’)、6小时、24小时和48小时的冷藏效果(4°C)的比较研究。还包括模拟的鼠组(Sim)。n=每组5只动物。A)超氧阴离子(SOA)的肾水平，以nmol/mg蛋白质/分钟表示。B)肿瘤坏死因子a (TNFa )的肾水平，以pg/mL表示。C)可诱导的一氧化氮合酶(iNOS)的肾水平，以任意单位表示。D)转录因子的活化。P65蛋白质或肾NFk B (NF k B)的水平，以任意单位表示。E) Ser311-磷酸化P65蛋白质(pNFk B)的肾水平。F) VCAM-1血管的粘着分子(VCAM-1)的肾水平。图4.使用包含0. lmg/L的CT-1的UW溶液(UW[CT1])，并以威斯康星大学溶液(Uff)作为对照本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.05.24 ES P2010307821.器官冷藏组合物，所述组合物共同地或单独地包含 (i)心肌营养素-1或其功能等效变体和 (ii)器官冷藏溶液。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述器官冷藏溶液包含 (a)至少一种缓冲剂 (b)至少一种非渗透剂，和 (C)至少一种电解质。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述缓冲剂是选自由磷酸盐、碳酸氢盐、硫酸盐、组氨酸、组氨酸-HC1、HEPES、柠檬酸盐及其组合所形成的组；所述非渗透剂选自由组氨酸、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、海藻糖、葡糖酸盐、柠檬酸盐、乳糖醛酸盐、棉子糖及其组合所形成的组；和/或所述电解质选自由钠、钾、镁、钙、氯化物及其组合所形成的组。4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述器官冷藏溶液为Euro-Collins溶液(EC)。5.根据权利要求1到4中任一项所述的组合物，其中所述器官冷藏溶液还包含至少一种胶体试剂、至少一种代谢剂、至少一种氨基酸、至少一种抗氧化剂、至少一种维生素和/或至少一种抗生素。6.根据权利要求2、3或5所述的组合物，其中所述非渗透剂选自由乳糖醛酸盐、棉子糖及两者的组合所形成的组。7.根据权利要求5或6中任一项所述的组合物，其中所述胶体试剂选自由羟乙基淀粉(HES)、聚乙二醇或两者的组合所形成的组。8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述器官冷藏溶液为威斯康星大学溶液(UW)。9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中心肌营养素-1是人源的。10.根据权利要求9所述的组合物，其中人源的心肌营养素-1为具有SEQID N0:1。11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述心肌营养素-1的浓度在0.01 mg/L 至 0. 50 mg/L 之间。12.器官冷藏组合物的制备方法，所述方法包含将心肌营养素-1或者其功能等效变体添加到器官冷藏溶液中。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述器官冷藏溶液包含 (a)至少一种缓冲剂； (b)至少一种非渗透剂；和 (C)至少一种电解质。14.根据权利要求12或13中任一项所述的方法，其中所述缓冲剂选自由磷酸盐、碳酸氢盐、硫酸盐、组氨酸、组氨酸-HC1、HEPES、柠檬酸盐及其组合所形成的组；所述非渗透剂选自由组氨酸、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、海藻糖、葡糖酸盐、柠檬酸盐、乳糖醛酸盐、棉子糖及其组合所形成的组；和/或所述电解质选自由钠、钾、镁、钙、氯化物及其组合所形成的组。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述器官冷藏溶液为Euro-Collins溶液(EC)。16.根据权利要求12到14中任一项所述的方法，其中所述器官冷藏溶液还包含至少一种胶体试剂、至少一种代谢剂、至少一种氨基酸、至少一种抗氧化剂、至少一种维生素和/或至少一种抗生素。17.根据权利要求13、14或16中任一项所述的方法，其中所述非渗透剂选自由乳糖醛酸盐、棉子糖及两者的组合所形成的组。18.根据权利要求16或17中任一项所述的方法，其中所述胶体试剂选自由羟乙基淀粉(HES)、聚乙二醇及两者的组合所形成的组。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述器官冷藏溶液为威斯康星大学溶液(UW)。20.根据权利要求12到19中任一项所述的方法，其中心肌营养素-1是人源的。21.根据权利要求20所述的方法，其中人源的心肌营养素-1为具有SEQID NO:l。22.根据权利要求12到21中任一项所述的方法，其中所述心肌营养素-1的浓度在.0.01 mg/L 和 0. 50 mg/L 之间。23.心肌营养素-1或者其功能等效变体在制备组合物中的用途，所述组合物用于移植用的器官的冷却保护和/或冷藏。24.根据权利要求1到11中任一项所述的组合物的用途，用于移植用的器官的冷却保护和/或冷藏。25.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：华绍CY·常，维克托·费尔南德斯·加利西亚，玛丽亚·伊尼格斯·马丁内兹，何塞·米格尔·洛佩斯·诺沃亚，赫苏斯·玛丽亚·普列托·巴尔图埃纳，胡安·鲁伊斯·埃切维里亚，
申请(专利权)人：迪格纳生物技术公司，西马生物医学计划公司，
类型：
国别省市：