牦牛细管冻精制作方法技术

本发明专利技术属于动物的冻精制作领域，特别是涉及牦牛细管冻精的制作方法。本发明专利技术所要解决的技术问题是提供一种牦牛细管冻精制作方法。该方法包括以下步骤：a、配制稀释液；b、采精和检查c、稀释；d、灌装；e、冷冻；f、抽检；g、冷冻贮藏：抽检合格批次的细管冻精移入液氮中贮藏。在本领域采用本发明专利技术方法制作牦牛细管冻精，在原精液质量满足要求的情况下，解冻后活率能达0.6以上，用此精液进行人工授精配怀率会更高，可提高所产牦牛质量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及牦牛的冻精制作方法，特别是涉及牦牛细管冻精的制作方法。
技术介绍
耗牛是生活在我国闻海拔、闻寒牧区的闻原偶蹄目牛科特有物种，耐闻寒、闻海拔缺氧气候。牦牛的生存能力极强，但生产性能较低，周期长，繁殖技术落后，种公畜利用年限短，加之牦牛性情粗野，活畜引种困难，一直阻碍着牦牛生产的发展。近三十年来人工授精技术已成为家畜繁殖和品种保护的一门先进技术，但是牦牛人工授精技术的关键节点之一牦牛精液的冷冻保存至今仍是一个难题。成年牦种公牛的射精量、精液密度、精子活力、耐 冻性都与黄牛、奶牛的有较大区别，难以使用这些牛类的现有方法。如能开发出合适高效的细管冻精制作方法，将会极大地促进牦牛产业的发展。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种。本专利技术解决上述技术问题的技术方案为提供一种。该方法包括以下步骤a、配制稀释液；b、采精和检查采取种公牛的精液，并对精液进行常规检查，合格者用于制作细管冻精；C、稀释在25 30°C条件下，在待冷冻的精液中加入稀释液并搅拌；d、灌装灌装进冻精细管后，放到冷冻架上，控制温度在O 5°C，持续I 2小时进行平衡；e、冷冻的细管冻精先使冷冻柜启动后至4°C，停留5分钟；待温度恒定在4°C后将冻精细管移入冷冻箱；从41降至-10°C后停留时间为5分钟，此为精液移入冷冻箱后的过渡平衡期；然后冷冻箱从-10 °C至-100°C后设定冷冻时间为40分钟；从-100°C至-140°C后设定冷冻时间为20分钟；细管结束冷冻进入液氮中保存备用，其液氮中的温度在_140°C至-193。。；f、镜检冷冻结束后，抽检精液活率，解冻抽检活率达到O. 6以上移入液氮贮藏罐中冷冻贮藏备用。其中，上述方法中的，其特征在于所述步骤C的稀释方法为，镜检合格的原精，在25-30°C条件按照1:1的比例加入25-30°C的A液进行稀释，稀释液沿盛原精容器壁缓慢加入，轻轻搅拌；检测精液浓度，再按每细管中的目标精子数和吸管容积，计算出需添加的B液量，并加入盛原精容器，稀释好后用于后继的灌装细管步骤；所述稀释液A液的配方为每IOOmL蒸馏水+2. 97g柠檬酸钠，然后再每100毫升中加入IOmL卵黄得稀释液A液；所述稀释液B液的配方为每41. 75mL A液+7mL甘油+2. 5g果糖。其中，上述方法中所述稀释液中加入青毒素至1000单位/毫升，加入链毒素至1000微克/晕升。其中，上述方法步骤b要求采集的精液直观检测合格无异状，在35_38°C条件下镜检精子活力达O. 7以上者，以及每毫升精液精子数达8亿以上者和畸形率为15%以下才可用于后继步骤。其中，上述方法步骤C的稀释步骤一般要求按每细管容纳2000万个左右的精子数的要求进行稀释。检测精子浓度一般常用分光光度法。本专利技术的有益效果是在本领域采用本专利技术制作出来的牦牛细管冻精，在原精液质量满足要求的情况下，解冻后活率能达O. 6以上，远好于颗粒冻精等方法，好于现有的其他技术。用此精液进行人工授精配怀率高，能有效提高牦牛质量，克服活畜引种在生态方面的不适应和饲养管理方面的困难，也为本领域提供了一种新的选择，这对牦牛的资源利用来说具有尤其重要的意义。具体实施例方式以下通过具体实施方式的描述对本专利技术进行详细的说明。结合上面的检测方法，本专利技术方法包括以下步骤a、配制稀释液。b、采精和检查按常规方法采取种公牛的精液，并对精液进行常规检查，要求直观检查无异状，在35-38°C条件下镜检精子活力达O. 7以上者，以及每毫升精液精子数达8亿以上者和畸形率为15%以下者方可用于制作细管冻精。C、稀释在25 30°C条件下，在待冷冻的精液中加入稀释液并搅拌。d、灌装灌装进冻精细管后，即放到冷冻架上，控制温度在O 5°C，持续I 2小时进行平衡。(平衡温度优选4°C)e、冷冻先使冷冻柜启动后至4°C，停留5分钟；待温度恒定在4°C后将细管精液移入冷冻箱；从41降至-10°C后停留时间为5分钟，此为精液移入冷冻箱后的过渡平衡期；然后冷冻箱从-10°C至-100°C后设定冷冻时间为40分钟；-100°C至-140°C后设定冷冻时间为20分钟；细管结束冷冻进入液氮中保存备用，其液氮中的温度在_140°C至-193°C。f、镜检冷冻结束后，抽检精液活率，解冻抽检活率达到O. 6以上合格，才能移入液氮贮藏罐中冷冻贮藏备用。g、冷冻贮藏合格细管冻精移入液氮中贮藏。其中，上述方法中的，其特征在于所述步骤C的稀释方法为，镜检合格的原精，在25-30°C条件按照1:1的比例加入25-30°C的A液进行稀释，稀释液沿盛原精容器壁缓慢加入，轻轻搅拌；用分光光度法检测精液浓度，再按每细管中的目标精子数和吸管容积，计算出需添加的B液量，并加入盛原精容器，稀释好后用于后继的灌装细管步骤；所述稀释液A液的配方为每IOOmL蒸馏水+2. 97g柠檬酸钠制成解冻液，然后每100毫升+IOmL卵黄得稀释液A液；所述稀释液B液的配方为每41. 75mL A液+7mL甘油+2. 5g果糖。其中，上述方法中所述稀释液中加入青毒素至1000单位/毫升，加入链毒素至1000微克/晕升。其中，上述方法步骤C的稀释步骤一般要求按每细管容纳2000万个左右的精子数的要求进行稀释。在进行本专利技术的细管冻精方法之前，需要获取适用的牦牛精液。一般的要求是选取健壮适龄公牦牛，使用常规方法取精。获取的精液一般要求，直观检查无异状，在35-38°C条件下镜检精子活力达O. 7以上者，以及每毫升精液精子数达8亿以上者和畸形率为15%以下者作为合格精液，用于制作细管冻精。精子数过少或畸形率过高会影响受胎率。牦牛精液的获取和检测一般会涉及如下操作采精制冻用种公牛要求特级或一级以上种公牛，按常规方法采集种公牛精液。对 精液进行常规检查有如下方法可以选用(一 ) 一般直观检查1、色泽正常的精液为乳白色或略带黄色，凡是淡黄色、褐色或黄绿色均不能使用。2、气味正常的精液无味或略呈牦牛精液固有的青草腥味。3、镜下状态良好的精液用肉眼观察时，可看到精液有“云雾”或“旋风”式的活动状态。(二)精子活力测定1、测定精子活力取滴精液于载坡片上，加上盖坡片，置于显微镜下检查精子运动状况(在37-38°C )，并估计前进运动的精子占整个视野内精子的百分数。如全部精子呈直线运动为1. O级，如其中90%的精子呈直线运动，则评为O. 9级，以下依此类推。如牦牛精子密度较大，可稀释后评定。2、精子活率计算计算非前进运动的精子数将盖玻片推盖在计数板上，使其互相粘连呈密合状态，先用低倍镜找到计算室(方格)，用红血球稀释管收取公牛精液到刻度O. 5处，擦去管端附着的精液，而后吸至膨大部，吸入O. 9% Nacl溶液到刻度101处(即将原精液稀释成200倍)，以拇指和中指紧按两端，充分摆动混匀。弃掉稀释管内最初两滴，然后将管中已稀释妥的精液滴一滴，至盖玻与计算板之间的空隙边缘，使液体弥散至计算室中，放大200-400倍进行观察，计算一定方格内死亡、颤动、圆圈运动的精子数，即非前进运动的精子数。计算精子总数将上述精子非前进运动精子数后，再加热(放于恒温干燥箱内100°C，2分钟)使精子全部死亡，计算精子总数。精子活率=(总精子数-非前进运动精子数)/总精子数(三)精子密度检查(I本文档来自技高网...

【技术保护点】
牦牛细管冻精制作方法，其特征在于：其制作步骤包括：a、配制稀释液；b、采精和检查：采取种公牛的精液，并对精液进行常规检查，合格者用于制作细管冻精；c、稀释：在25～30℃条件下，在待冷冻的精液中加入稀释液并搅拌；d、灌装：将精液灌装进冻精细管后，放到冷冻架上，控制温度在0～5℃，持续1～2小时进行平衡；e、冷冻的细管冻精：先使冷冻柜启动后至4℃，停留5分钟；待温度恒定在4℃后将冻精细管移入冷冻箱；从4℃降至?10℃后停留时间为5分钟，此为精液移入冷冻箱后的过渡平衡期；然后冷冻箱从?10℃至?100℃后设定冷冻时间为40分钟；从?100℃至?140℃后设定冷冻时间为20分钟；细管结束冷冻进入液氮中保存备用，其液氮中的温度在?140℃至?193℃；f、镜检：冷冻结束后，抽检精液活率，解冻抽检活率达到0.6以上移入液氮贮藏罐中冷冻贮藏备用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张洪波，毛进彬，张永成，马树荣，阿龙呷，刘成烈，孙文平，王鹏，代舜尧，方世界，杨鹏波，邵发亮，
申请(专利权)人：甘孜藏族自治州畜牧站，
类型：发明
国别省市：