一种猪增生性肠炎胞内劳森氏菌的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法技术

本发明专利技术涉及一种猪增生性肠炎胞内劳森氏菌的SYBRGreenI荧光定量PCR检测方法，本发明专利技术方法步骤包括猪胞内劳森氏菌DNA的提取﹑引物设计﹑PCR扩增PPE的aspA基因片段﹑猪增生性肠炎的aspA基因的克隆与鉴定﹑标准质粒模板的制备﹑荧光定量PCR的扩增并获得扩增动力学曲线和标准曲线﹑特异性试验﹑敏感性试验﹑重复性和稳定性试验及临床病料样品检测。本发明专利技术方法具有良好的特异性﹑敏感性﹑重复性和稳定性，能够简便﹑快速﹑特异﹑敏感的对临床疑似PPE感染或发病猪进行准确的鉴别诊断和早期感染的检测监控。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细菌检测
，具体涉及一种猪增生性肠炎胞内劳森氏菌的SYBRGreen I荧光定量PCR检测方法。
技术介绍
猪增生性肠炎(porcine proliferative enteritis, PPE)是由猪胞内劳森氏菌(Lawsonia intracellularis,LI)引起的猪的接触性传染病。胞内劳森氏菌是一种弯曲的专性胞内寄生菌，主要寄生在猪以及其他动物的回肠、结肠、盲肠部位，造成未成熟的肠道上皮细胞腺瘤样增生。目前，该病已呈全球性流行，隐性感染猪较多，损失易被忽视，亚洲地区的中国、日本、韩国及台湾地区近年来多次发生猪增生性肠炎，猪感染率后，导致顽固性·腹泻，造成猪只生长发育迟缓，严重降低饲料报酬率。另外该病经常存在混合感染其它病毒和细菌性疾病，致使临床症状表现更加复杂化，很难做出准确判断，特别是不易与仔猪副伤寒、猪传染性胃肠炎(TGEV)、猪流行性腹泻(PEDV)腹泻性疾病相区别等。因此，建立有效的鉴别诊断方法和检测系统成为进行其他研究的前提条件。荧光染料定量PCR技术是在反应管中加入荧光染料，这种染料可嵌入双链DNA，并且只有在嵌入到DNA后才能被激发产本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪增生性肠炎胞内劳森氏菌的SYBR?Green?I荧光定量PCR检测方法，其特征在于其检测方法的具体步骤如下:（1）提取猪胞内劳森氏菌的DNA，制备检测液；（2）根据GenBank中的LI?aspA基因（AY280626），设计一对特异性引物，引物序列如下：PPE?1?F：5??TAT，GGC，TGT，CAA，ACA，CTC，CG??3PPE?1?R：5??TGA，AGG，TAT，TGG，TAT，TCT，CC??3其中PPE?1?F／R预期扩增片段为227bp；（3）加入PCR?Mix?12.5?μL，10?pM上、下游引物各1?μL，Rnase?Free?water?8.5?μL，DNA...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭显坡，陈申秒，蔡培军，
申请(专利权)人：山东滨州沃华生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：