一株产莽草酸的大肠杆菌重组菌及其构建方法及应用技术

一株产莽草酸的大肠杆菌重组菌及其构建方法及应用，属于微生物基因工程技术领域。本发明专利技术首先利用分子生物学技术删除了大肠杆菌CICIMB0013的莽草酸激酶I基因（aroK）、莽草酸激酶II基因（aroL），以及葡萄糖磷酸转移酶系统的关键蛋白EIIBCGlc的基因（ptsG）和圭尼酸/莽草酸脱氢酶基因（ydiB），获得了大肠杆菌突变株CICIMB0013·SA4（△aroK,△aroL,△ptsG,△ydiB）。本发明专利技术还构建了含有莽草酸代谢途径中关键基因aroG*，ppsA，tktA的重组表达质粒pTHGAA，然后将重组表达质粒pTHGAA电转入重组菌CICIMB0013·SA4中，获得高效生产莽草酸的重组菌大肠杆菌B0013（SA4/pTHGAA）。本发明专利技术的大肠杆菌重组菌能够实现发酵过程中莽草酸的高效累积。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株产莽草酸的大肠杆菌重组菌及其构建方法及应用，通过研究和改进莽草酸生产途径的相关基因和节点的影响，实现大肠杆菌细胞过量合成和积累莽草酸。 属于微生物基因工程

技术介绍
莽草酸(Shikimic acid)是一种芳香族化合物，含有三个羟基、一个羧基和一个双键，具有手性异构体结构。不仅是手性药物(如抗病毒药)的原料，同时也是许多生物碱、芳香族氨基酸与吲哚衍生物的合成原料。更重要的是，它是神经氨酸酶抑制剂GS4104 (达菲)的关键原材料，可用于合成预防与治疗禽流感和甲型流感的药物。其理化性质如表I 所示。表I莽草酸的理化性质权利要求1.一株产莽草酸的大肠杆菌重组菌株，其分类命名为大肠杆菌coin BOO13 (SA4/pTHGAA),该重组菌株染色体DNA中有4个基因被删除，同时有3个基因过量表达；删除的基因为莽草酸激酶I基因arot莽草酸激酶II基因aroZ，葡萄糖磷酸转移酶系统的关键蛋白EIIBCele基因和圭尼酸/莽草酸脱氢酶基因；过量表达的基因是3_脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶基因eiroGt转酮酶A基因认 儿磷酸烯醇式丙酮酸合成酶A基因中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株产莽草酸的大肠杆菌重组菌株，其分类命名为大肠杆菌（Escherichia?coli）B0013（SA4/pTHGAA），该重组菌株染色体DNA中有4个基因被删除，同时有1~3个基因过量表达；删除的基因为：莽草酸激酶I基因aroK，莽草酸激酶II基因aroL，葡萄糖磷酸转移酶系统的关键蛋白EIIBCGlc基因ptsG和圭尼酸/莽草酸脱氢酶基因ydiB；过量表达的基因是：3?脱氧?D?阿拉伯庚酮糖?7?磷酸合成酶基因aroG*，转酮酶A基因tktA，磷酸烯醇式丙酮酸合成酶A基因ppsA中的1~3个。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈献忠，李明明，王正祥，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：