一种高产乙酰氨基葡萄糖重组枯草芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种高产乙酰氨基葡萄糖重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于遗传工程领域。本发明专利技术是以枯草芽孢杆菌（Bacillus?subtilis168）作为出发菌株，通过同源重组敲除乙酰氨基葡萄糖转运蛋白编码基因（nagP），阻断了宿主菌从胞外转运乙酰氨基葡萄糖至胞内途径。在已敲除nagP的宿主菌内，过量表达来源于酿酒酵母（Saccharomyces?cerevisiae?S288C）的氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因（GNA1），加强乙酰氨基葡萄糖合成途径，提高了重组枯草芽孢杆菌中乙酰氨基葡萄糖的产量，达到415mg/L，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种高产乙酰氨基葡萄糖重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于遗传工程领域。
技术介绍
乙酰氨基葡萄糖是生物体内的一种单糖，广泛存在于细菌、酵母、霉菌、植物以及动物体内。在人体中，乙酰氨基葡萄糖是糖胺聚糖二糖单元的合成前体，其对修复和维持软骨及关节组织功能具有重要作用。因此，乙酰氨基葡萄糖被广泛作为药物和营养膳食添加来治疗和修复关节损伤。此外，乙酰氨基葡萄糖在化妆品和制药领域也具有诸多应用。目前，乙酰氨基葡萄糖主要采用酸解虾壳或蟹壳中甲壳素生产，此方法产生的废液对环境污染较为严重，而且得到的产品易引起过敏反应，不适宜海鲜过敏的人群服用。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种被广泛用作食品酶制剂及重要营养化学品的生产宿主，其产品被FDA认证为“generally regarded as safe” (GRAS)安全级别。因此，运用代谢工程手段构建重组枯草芽孢杆菌是生产食品安全级乙酰氨基葡萄糖的有效途径。然而，乙酰氨基葡萄糖是一种枯草芽孢杆菌优先利用的碳源物质，当培养基中葡萄糖耗尽后，胞外乙酰氨基葡萄糖被转运到胞内并且被分解利用，导致胞外乙酰氨基葡萄糖浓度迅速降低本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高产乙酰氨基葡萄糖重组枯草芽孢杆菌，其特征在于是将酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）S288C中氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因GNA1克隆到枯草芽孢杆菌，同时敲除该枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖转运蛋白编码基因nagP构建而成的重组枯草芽孢杆菌。

【技术特征摘要】
1.一种高产乙酰氨基葡萄糖重组枯草芽孢杆菌，其特征在于是将酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)S288C中氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因GNAl克隆到枯草芽孢杆菌，同时敲除该枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖转运蛋白编码基因nagP构建而成的重组枯草芽孢杆菌。2.根据权利要求I所述重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因如NCBI-Gene ID:850529所示，乙酰氨基葡萄糖转运蛋白编码基因如NCBI-GeneID :938807 所示。3.根据权利要求I所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，将氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因连接到表达载体PP43NMK上。4.根据权利要求1-3任一所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于所述枯草芽孢杆菌为Baci IIussubti Iisl68ο5.权利要求I所述重组枯草芽孢杆菌的构建方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，堵国成，刘龙，李江华，刘延峰，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：