本发明专利技术提供了工程化以表达抑制精子运动性或受精的抗体片段的共生生物，及含有其的组合物等。本发明专利技术提供了工程化的共生生物或含有其的组合物作为雌性的有效避孕方式的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供了工程化以表达抑制精子运动性，受精或其组合的抗体片段的共生生物，及含有所述共生生物的组合物。本专利技术提供了此类工程化共生生物或含有所述共生生物的组合物作为避孕药的用途。
技术介绍
需要开发新的避孕药，以对所有个体提供方便的生育控制，而不受社会，财政或教育的限制。 尽管目前有许多不同的避孕药可用，但没有一种避孕药是没有问题的。到目前为止，最常用的避孕药是口服的雌激素，孕酮，或其组合的制剂，尽管所述制剂是有效的，但已提示所述制剂在某些群体中在长期使用的情况下可能引起肿瘤。屏障方法，如隔膜或子宫内装置，显示出降低的效果，以及不依从性(对于前者)，和更大的盆腔炎性疾病的风险(在使用后者的情况下)。杀精子剂也被用于这方面，但其效果较差，并且，更高的性传播疾病的风险与其使用相关。因此，需要与上面的限制无关的、易于使用的微创(minimally invasive)避孕药。专利技术概述在一个实施方案中，本专利技术提供了基因工程化的细胞，其产生抗精子抗原的抗体片段，并由此可以用作避孕药。在一个实施方案中，本专利技术提供了工程化的雌性生殖道共生细菌，其中所述细菌被工程化以表达抗精子的抗体或其片段，其能有效阻止精子运动性，精子-卵子融合或卵子的精子穿透，或其组合。在某些实施方案中，抗体片段是单链Fv分子(scFv)。在某些实施方案中，对精子抗原特异的抗体片段是来自人的或人源化的。在某些实施方案中，抗体片段与精子上顶体或质膜位置的抗原或其片段特异性相互作用。在某些实施方案中，抗体片段与精子颈部区域位置的抗原或其片段特异性相互作用。在某些实施方案中，抗体片段从工程化细菌中分泌，而在某些实施方案中，抗体片段与细菌细胞壁结合或相连接。在某些实施方案中，工程化细菌是乳杆菌(Lactobacillus)，或在某些实施方案中，是乳球菌(Lactococcus)。在某些实施方案中，工程化细菌是大肠杆菌(Escherichiacoli)Nissle 1917株。在某些实施方案中，工程化细菌是戈登氏链球菌(S. gordonii)。在某些实施方案中，工程化细菌是詹氏乳杆菌(L. jensenii)或卷曲乳杆菌(L. crispatus)。在某些实施方案中，scFv跟与SEQ ID NO :1或2有至少90%同一性的肽特异性相互作用。在某些实施方案中，scFv具有与SEQ ID NO :8有至少90%的同一性的序列。在某些实施方案中，scFv由多核苷酸编码，该多核苷酸具有与SEQ ID NO 7有至少90%同一性的序列。在某些实施方案中，本专利技术提供了包含本文所述的工程化细菌的组合物。在某些实施方案中，组合物是阴道栓剂，乳膏或泡沫的形式。在某些实施方案中，避孕药与阴道环结合或包含于阴道环上。在某些实施方案中，本专利技术提供了避孕的方法，所述方法包括将雌性对象生殖道细胞与在雌性对象中足以抑制或阻止精子运动性，精子-卵子融合或卵子穿透的量的本专利技术所述的工程化细菌相接触的步骤。在某些实施方案中，依据该方面，该方法包括将足以抑制或阻止的量的包含工程化细菌的组合物施用到有此需要的雌性对象的生殖道中。在某些实施方案中，本专利技术提供了降低雌性群体妊娠的发生率的方法，所述方法包括将雌性对象的生殖道细胞与在雌性对象中足以削弱，抑制或阻止精子运动性，精子-卵子融合或卵子穿透的量的本专利技术所述的工程化细菌相接触的步骤，由此降低雌性的妊娠的发生率并由此降低雌性群体中的妊娠的发生率。在某些实施方案中，本专利技术提供了降低雌性群体受精的发生率的方法，所述方法包括将雌性对象生殖道细胞与在雌性对象中足以削弱，抑制或阻止精子运动性，精子-卵子融合或卵子穿透的量的本专利技术所述的工程化细菌相接触的步骤，由此降低雌性中的受精发生率并由此降低雌性群体中的受精的发生率。在某些实施方案中，本专利技术提供了本专利技术描述的工程化细菌或组合物在制备用于 降低雌性群体妊娠的发生率的药物中的用途。在某些实施方案中，本专利技术提供了本专利技术描述的工程化细菌或组合物在制备用于降低雌性群体受精的发生率的药物中的用途。附图简述图I以图形方式描述了通过ELISA测定法确定的，分离并克隆的噬菌体展示的scFv对精子肽的相对亲和力。1-3列显示了三种scFv与源于精子FA-I的肽的结合,而4_6列显示了三种scFv与源于精子YLP(12)的肽的结合。BSA用作阴性结合对照。图2描述了分离并克隆的一些噬菌体展示的scFv对用作探针的(probed)精子肽的相对亲和力。当与肽相关的OD值更高(与BSA对照或未与肽温育的样品相比)时，克隆被认为具有高亲和力。特别地，克隆102，103，105和106显示出对于肽相对高的亲和力，并且进一步描述了克隆102的体外和体内特征。图3以图形方式描述了鉴定一系列非结合scFv的ELISA结合测定的结果，这些非结合scFv随后被用作对照与克隆102进行比较，如图2所示，发现克隆102对用作探针的肽具有良好的亲和力。在该情况下，通常使用一个这样的scFv克隆，J112。也测试了对照A和B，其分别为不含有scFv噬菌体或不含有肽和scFv的样品。通过测量样品中的OD (用抗噬菌体HRP标记的抗体(抗PVIII的抗体)进行探测)来检测结合。图4A是pSLPlll. I载体的质粒图谱。图4B是描绘质粒的NcoI和NotI消化产物的照片。使用NcoI-和NotI在37°C剪切质粒三小时。在几个代表性克隆中清楚地显示了质粒插入物。图5A分别描述了 J102的核酸和氨基酸序列(SEQ ID NO :7_8)。图5B描述了 J102scFv中的各个结构域。图6描述了表达J102的乳杆菌与鼠精子在体外的特异性结合。图6A是显示表达scFv的乳杆菌与小鼠精子的显著结合的光显微照片，几乎每个进行评价的精子细胞都显示显著的染色。图6B是表达J112的乳杆菌(用作对照)的光显微照片，其中没有明显可见的与鼠精子的结合。图7以图形方式描述了表达J102的乳杆菌的功效的体内证实。图7A绘制了，在两个试验中被施以表达抗精子scFv J102的詹氏乳杆菌或表达不结合精子的scFv(J112)的对照乳杆菌的雌性小鼠的妊娠率；在每个试验中，相对于J112处理的小鼠，J102处理的小鼠中显示出了有效的避孕。图7B绘制了，如图7A所述进行的两个试验的每一个试验中的幼崽总数和每笼幼崽数目；与对照相比，在表达J102的詹氏乳杆菌的情况下，幼崽总数和每笼幼崽数目都被减少。专利技术详述在一个实施方案中，本专利技术提供了重组的细胞(在一个实施方案中，其包括微生物在内)，以及使用其以产生杀精子化合物的方法。在一个实施方案中，所述方法和细胞提供了有效的避孕方法。在一个实施方案中，重组的细胞是雌性生殖道共生生物。在一个实施方案中，共生生物是细菌。在一个实施方案中，重组的细胞是非哺乳动物细胞，其存留在雌性生殖道粘膜中 足以表达干扰精子运动性，精子_卵子融合或卵子的精子穿透的化合物的一段时间。在某些实施方案中，当在被处理对象的雌性生殖道中由定殖于此的共生生物表达时，化合物在所述对象中导致降低的繁殖力。在某些实施方案中，当在被处理对象的雌性生殖道中表达时，化合物在施以这样的共生生物的群体中导致降低的妊娠率。在一个实施方案中，本专利技术提供了表达杀精子化合物的工程化共生生物本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·泰伊泰尔波姆，
申请(专利权)人：赫尔瓦那有限公司，
类型：
国别省市：
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