本发明专利技术公开了一种具有5-氟尿嘧啶耐药性的人胃癌细胞系及其建立方法和应用。所述人胃癌细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：2013154。该人胃癌细胞系性状稳定，可稳定多次传代，成瘤率高，潜伏期短，均一性好，为胃癌研究提供新的更接近于临床肿瘤生物学特性的实验材料。该人胃癌细胞系具有成瘤性，而且产生的肿瘤具有顺铂耐药性，可用来分析体外、体内药物敏感性及耐药性的相关性，进而建立体外、体内两个相关联的药物筛选平台，是人胃癌基础研究和临床前期应用的理想细胞系。
【技术实现步骤摘要】
一种具有5-氟尿嘧啶耐药性的人胃癌细胞系及其建立方 法和应用
本专利技术属于生物
，特别涉及一种具有5-氟尿嘧啶耐药性的人胃癌细胞 系及其建立方法和应用。
技术介绍
恶性肿瘤是目前严重危害人类健康的主要疾病，其中，胃癌是全球发病率最高的 癌症之一，也是世界上第2位癌症死亡原因，仅次于肺癌。据2011年的Global Cancer Statistics报告，目前全球超过70%的胃癌新发病例和死亡都发生在发展中国家，其中东 亚高居榜首，发病率分别达到男性42. 4%和女性18. 3%。而根据中国抗癌协会临床肿瘤 协作中心（CSCO)列举的数据，目前全球每年新发胃癌有九十三万四千例，其中有近四十万 在中国内地，中国的胃癌发病已占全世界的42%。我国每年死于胃癌约30万人，死亡率为 25. 2/10万（男性：32. 8/10万，女性：17. 0/10万），占全部恶性肿瘤死亡的23. 2%。而在 上海，男性胃癌的发病率为47. 1/10万?63. 2/10万，女性为20. 1/10万?24. 8/10万，分 别占恶性肿瘤发病率的第1位和第2位。其中，胃腺癌的发生率占胃恶性肿瘤的95%。 近年来，胃癌的治疗模式已从单一的手术治疗进入综合治疗加规范化手术的新治 疗模式，其中辅助化疗作为综合治疗的方法之一，已得到越来越多的关注。目前胃癌临床化 疗主要存在如下问题：首先，常用的化疗方案缺乏客观指标反应药物的抗癌敏感性；其次， 耐药现象的发生仍然是胃癌化疗中存在的最大问题。鉴于此，建立不同病理类型的胃癌细 胞系，尤其是具有耐药特性的细胞系，对于有效指导临床前研究和临床不同分型的治疗相 关性，具有必不可少的重要作用。同时由于运用临床肿瘤组织直接建立细胞系的成功率较 低，因此，通过运用临床肿瘤标本先建立动物模型，进而通过原代培养建立人源肿瘤细胞更 具有可行性，同时也接近于肿瘤的临床生物学特性，对药物的耐药性及敏感性具有良好的 预测性。 胃癌细胞系在新药开发临床前应用的一个重要方面就是建立小鼠异种移植瘤模 型，用于预测抗癌药物的临床疗效。然而，目前建立的大多数胃癌细胞系受限于成瘤率低或 均一性差等问题，难以应用于大规模药物筛选。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题就是针对现有的人胃癌细胞系生物多样性低，与临床胃 癌的生物学性状相差较大等不足，提供一种新的具有5-氟尿嘧啶耐药性的人胃癌细胞系 及其建立方法和应用。 因此，本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案之一是：一种人胃癌细胞系，其 保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO :2013154。 本专利技术所述人胃癌细胞系较佳地还包括如上所述的人胃癌细胞系的子代细胞。 本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案之二是：如上所述的人胃癌细胞系在 制备使免疫缺陷小鼠产生胃癌的试剂中的用途。 本专利技术所述的使免疫缺陷小鼠产生胃癌的试剂为本领域常规的试剂，该试剂的制 备方法较佳地为将本专利技术所述人胃癌细胞系混悬于各种溶剂中即得。其中所述溶剂为本 领域常规溶剂，较佳地为HBSS缓冲液，所述HBSS缓冲液的配方为：含500U/ml青霉素 G、 500 μ g/ml硫酸链霉素和1. 25 μ g/ml两性霉素 B。 本专利技术所述试剂较佳地用于制备胃癌动物模型。其中所述胃癌动物模型的制备方 法为本领域常规方法，较佳地包括以下步骤：将所述使免疫缺陷小鼠产生胃癌的试剂接种 于免疫缺陷小鼠进行饲养，获得胃癌动物模型。其中所述免疫缺陷小鼠较佳地为裸小鼠或 严重联合免疫缺陷小鼠（SCID小鼠），优选地为严重联合免疫缺陷小鼠（SCID小鼠），其中 所述裸小鼠较佳地为NU/NU品系的裸小鼠。利用本专利技术所述细胞系制备的胃癌动物模型具 有5-氟尿嘧啶耐药性。 其中所述的接种的方式为本领域常规使用的接种方式。所述接种方式较佳地包括 皮下穿刺接种，原位接种或者肾囊膜内接种，优选地为皮下穿刺接种。所述接种的细胞量较 佳地为I. 0?2X IO7个细胞，优选地为5. OX IO6个细胞。 本专利技术所述胃癌动物模型的应用方法较佳地为，利用所得胃癌动物模型检测待测 化合物的抑制胃癌活性，将待测化合物施用于胃癌动物模型，观察和测量动物的体重与肿 瘤生长情况；施用后导致胃癌动物模型胃癌症状改善或治愈的待测化合物具有抑制胃癌活 性。 其中所述的待测化合物施用的方法为本领域常规的施用方法，较佳地包括：尾静 脉注射、腹腔注射、灌胃、口服和肿瘤局部用药中的一种或几种方式施用于胃癌的荷瘤动 物。所述实验中的对照例较佳地为：同时使用不含待测化合物的溶剂施用于胃癌的荷瘤动 物作为对照实验组。 本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案之三是：一种待测化合物抑制胃癌细 胞活性的体外检测方法，该体外检测方法包括以下步骤：将待测化合物施用于细胞模型中， 施用后抑制细胞增殖或导致细胞凋亡的待测化合物为具有抑制胃癌细胞活性的化合物，其 中所述的细胞模型是如上所述的人胃癌细胞系。 本专利技术所述体外检测方法为本领域常规使用的方法，该体外检测方法较佳地包括 以下步骤： (1)将本专利技术所述人胃癌细胞系或其子代细胞接种于96孔细胞培养板孔中，培养 24小时； (2)将待测化合物稀释成不同浓度施用于细胞，化合物作用72小时后通过测定细 胞的活力，计算不同浓度的化合物对细胞的增殖抑制能力，计算化合物半数抑制浓度，用以 判断待测化合物的抗胃癌细胞的能力。 其中步骤（1)所述人胃癌细胞系或其子代细胞的接种量较佳地为5000/孔。其中 步骤（2)所述半数抑制浓度检测方法较佳地包括ATP生物发光法或MTT法，本专利技术所述检 测方法优选地为ATP生物发光法。所述的ATP生物发光法是通过对细胞中的ATP进行定量 测定来检测培养物中活细胞数目的一种均质检测方法，其中所述的ATP是活细胞新陈代谢 的一个重要指标，所述ATP生物发光法可以利用市售检测试剂盒进行。 本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案之四是：一种如上所述人胃癌细胞系 的建立方法，该建立方法包括以下步骤： (1)获得新鲜的临床人胃癌手术切除标本，剪切成小块，皮下穿刺接种免疫缺陷小 鼠； (2)穿刺接种70?90天后，将荷瘤动物处死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培 养和传代培养。 其中步骤（1)所述的新鲜的临床人胃癌手术切除标本剪切而成的小块的质量较 佳地为20?50mg。其中所述的免疫缺陷小鼠较佳地为严重联合免疫缺陷小鼠（SCID小鼠） 或裸小鼠。其中所述的新鲜的临床人胃癌切除标本更佳的处理方式为：用新鲜的HBSS缓冲 液（所述HBSS缓冲液较佳地包含500U/ml青霉素 G、500 μ g/ml硫酸链霉素和1. 25 μ g/ml 两性霉素 B)漂洗。 其中步骤（2)所述的原代培养方法是常规的哺乳动物细胞的原代培养方法；所述 的原代培养方法较佳地包括以下步骤： 将肿瘤组织剪切成小块，置入培养瓶中，于37°C孵箱5% CO2条件下培养；次日，将 培养瓶慢慢翻转平放，向瓶内加入RPMI-1640培养液（含5%胎牛血清，lOOU/ml青霉素 G、 100 μ g/ml硫酸链霉素和0. 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人胃癌细胞系，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：2013154。
【技术特征摘要】
1. 一种人胃癌细胞系，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为 CCTCC NO :2013154。2. 如权利要求1所述人胃癌细胞系的子代细胞。3. 如权利要求1所述的人胃癌细胞系在制备使免疫缺陷小鼠产生胃癌的试剂中的用 途。4. 如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的使免疫缺陷小鼠为SCID小鼠或裸小 鼠。5. -种待测化合物抑制胃癌细胞活性的体外检测方法，其特征在于，该体外检测方法 包括以下步骤：将待测化合物施用于细胞模型中，施用后抑制细胞增殖或导致细胞凋亡的 待测化合物为具有抑制胃癌活性的化合物，其中所述的细胞模型是权利要求1所述的人胃 癌细胞系。6. -种如权利要求1所述人胃癌细胞系的建立方法，其特征在于，该建立方法包括以 下步骤： (1) 获得新鲜的临床人胃癌手术切除标本，剪切成小块，皮下穿刺接种免疫缺陷小鼠； (2) 穿刺接种70?90天后，将荷瘤动物处死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培养和 传代培养。7. 如权利要求6所述的建立方法，其特征在于，步骤（1)所述的小块的质量为20? 50mg〇8. 如权利要求6...
【专利技术属性】
技术研发人员：强福林，胡刚，汤旭蓁，张一心，方后顺，汪宗宇，秦宵然，
申请(专利权)人：上海睿智化学研究有限公司，南通市肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。