本发明专利技术公开了一种抗人血小板衍生生长因子β受体的抗体及其应用。其包含重链可变区，重链可变区包含CDR1、CDR2和/或CDR3；CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。该抗体能够与人PDGFRβ的胞外区相结合，并高效地抑制或阻断PDGFb与PDGFRβ的结合，从而下调或切断相应的信号通路；其用途包括但不仅限于，抑制PDGFRβ介导的信号通路并制备由PDGFRβ信号通路引发的与之相关的疾病的药物等。
【技术实现步骤摘要】
一种抗人血小板衍生生长因子β受体的抗体及其应用
本专利技术属于生物工程领域，具体涉及一种抗人血小板衍生生长因子β受体的抗体及其应用。
技术介绍
血小板衍生生长因子(Platelet-derivedgrowthfactor，PDGF)是普遍存在的一种由sis原癌基因编码的生长因子，最初从血小板α中分离得到，主要由巨核细胞合成，在组织损伤修复，血管生成和细胞分化过程中起到非常重要的作用。PDGF分子是一个糖蛋白二聚体，可分为-AA，-BB和-AB三种类型。PDGF及其受体(Platelet-derivedgrowthfactorreceptor,PDGFR)在多种人体肿瘤中都有比较高的表达，如胰腺癌、小细胞肺癌、胃癌和乳腺癌等。PDGFR是一种位于细胞表面的受体酪氨酸激酶(Receptortyrosinekinase,RTK)，可分为两个亚型：PDGFRα和PDGFRβ(Matsuietal.1989)。PDGFRβ可以特异性的与PDGF-BB或-AB结合(Herdaranetal.1991)而被激活。被激活后，两个PDGFR之间可以形成二聚体，并通过自身磷酸化激活下游的信号转到通路，以实现其调控细胞分化生长的功能。PDGF信号传递已经在多种人类疾病中涉及，包括与病理学新血管形成相关的疾病、血管和纤维化疾病、肿瘤生长和眼病。因此，已经提出PDGF信号传递的抑制剂用于多种治疗环境。例如，已经提议将PDGFRβ的抑制剂用于治疗多种疾病和病症。(Andrae等人(2008)GenesDev22(10):1276-1312)。PDGFRβ抑制剂包括非特异性小分子酪氨酸激酶抑制剂诸如甲磺酸伊马替尼、苹果酸舒尼替尼和CP-673451，以及抗PDGFRβ抗体(参见，例如美国专利号7,060,271；5,882,644；7,740,850；和美国专利申请公开号2011/0177074)。也已经提出将抗配体适配体(例如抗PDGF-B)用于治疗应用。然而，本领域存在对新的、高特异性和强有力的PDGF信号传递抑制剂的需求。目前的单克隆抗体大多来自于小鼠，因此抗体作为异源蛋白在人体内具有抗原性，极大地限制了它在临床治疗上的使用。为了克服这一缺点，人们提出了很多解决方案，包括人/人或人/鼠杂交瘤技术、嵌合抗体技术、噬菌体展示技术。人/人或人/鼠杂交瘤技术由于其技术难度已退出市场，现在主要是运用体外抗体工程方法制备人源化抗体，但是这类方法得到的抗体往往亲和力不佳，易聚集，而从体内制备人源化或全人源抗体具有高亲和力，良好的水溶性以及不易发生聚集的优点，因此从全人源抗体转基因小鼠制备人全源抗体最具有研发优势，也是今后抗体开发的主流。重链抗体是去除两条轻链的抗体，相比传统抗体，它更容易穿过血管壁和进入实体瘤内部，在研发抗肿瘤单抗药物方面更具优势，另外从重链抗体衍生而来的单域抗体是迄今为止发现的最小抗体分子，在肿瘤影像，治疗和诊断方面可得到广泛应用。基于重链抗体的模块化性质，更进一步的应用是制备同时针对两个不同靶抗原的双特异抗体。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术中现有的抗人血小板衍生生长因子β受体(PDGFRβ)抗体特异性不高、亲和力低以及利用噬菌体展示筛选制备抗体、特别是重链抗体成本高的特点提供了一种抗PDGFRβ的抗体、尤其是单克隆重链抗体及其应用。该抗体能够与人PDGFRβ的胞外区相结合，并能够高效地抑制或阻断PDGFb与PDGFRβ的结合，从而下调或切断相应的信号通路；其用途包括但不仅限于，抑制PDGFRβ介导的信号通路并制备由PDGFRβ信号通路引发的与之相关的疾病的药物等。本专利技术解决上述技术问题的技术方案之一是：一种抗人血小板衍生生长因子β受体的抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含CDR1、CDR2和/或CDR3；所述CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQIDNO.5的第76～99位所示，所述CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQIDNO.5的第151～174位所示，所述CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQIDNO.5的第289～312位所示。较佳地，所述重链可变区包含CDR1、CDR2和CDR3；更佳地，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；进一步更佳地，编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。本专利技术的所述抗体还可包括重链恒定区，所述的重链恒定区为本领域常规，优选为人源或者小鼠源的，更优选为人源抗体重链恒定区；所述重链可变区为本领域常规，优选为人源的。根据本专利技术，所述抗体是指本领域常规的抗体，较佳地为单克隆抗体、抗体全长蛋白、抗原抗体结合域蛋白质片段、双特异性抗体、多特异性抗体、单链抗体(singlechainantibodyfragment，scFv)、单域抗体(single-domainantibody，sdAb)或单区抗体(Signle-domainantibody)；所述单克隆抗体可以由多种途径和技术进行研制，包括杂交瘤技术、噬菌体展示技术、单淋巴细胞基因克隆技术等，主流是通过杂交瘤技术从野生型或转基因小鼠制备单克隆抗体。抗体全长蛋白为本领域常规的抗体全长蛋白，其包括重链可变区、轻链可变区、重链恒定区和轻链恒定区。优选地，抗体的重链可变区和轻链可变区与小鼠源重链恒定区和小鼠源轻链恒定区构成抗体全长蛋白。或者，更优选地，抗体的重链可变区和轻链可变区与人源重链恒定区和人源轻链恒定区构成全人源抗体全长蛋白。最优选地，抗体全长蛋白为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。单链抗体为本领域常规的单链抗体，其包括重链可变区、轻链可变区和15～20个氨基酸的短肽。抗原抗体结合域蛋白质片段为本领域常规的抗原抗体结合域蛋白质片段，其包括轻链可变区、轻链恒定区和重链恒定区的Fd段。优选地，抗原抗体结合域蛋白质片段为Fab和F(ab’)2。单域抗体为本领域常规的单域抗体，其包括重链可变区和重链恒定区。单区抗体为本领域常规的单区抗体，其仅包括重链可变区。目前的抗体为两条重链两条轻链的普通抗体形式，而重链抗体是一种缺失轻链的新型抗体形式，目前制备重链抗体的方法有免疫骆驼通过噬菌体展示筛选得到抗体，成本较高，后期仍需进行人源化才能得到全人源的重链抗体，目前国内没有全人源血小板衍生生长因子受体的重链抗体。PDGFRβ重链抗体开发的另一个难点在于由于转基因小鼠与正常小鼠有区别，传统的单克隆抗体研制技术，在原封不动的运用到转基因小鼠的时候，不能达到应有的效果。因此，需要针对转基因小鼠特别优化，即多次免疫以得到高血清滴度，建立起配套的高效免疫、融合的单克隆抗体研制技术和灵敏快速的筛选、分析技术与平台。在本专利技术一较佳实施例中，所述抗体为包括人源重链可变区和小鼠源重链恒定区的重链抗体。其中，抗体的制备方法为本领域常规的制备方法。制备方法优选地为：从重组表达血管内皮生长因子抗体的表达转化体中分离获得或者通过人工合成蛋白质序列获得。从重组表达该抗体的表达转化体中分离获得优选如下方法：将编码所述蛋白质并且带有点突变的核酸分子克隆到重组载体中，将所得重组载体转化到转化体中，得到重组表达转化本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗人血小板衍生生长因子β受体的抗体，其包含重链可变区，其特征在于，所述重链可变区包含CDR1、CDR2和/或CDR3；所述CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.5的第76～99位所示，所述CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.5的第151～174位所示，所述CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.5的第289～312位所示。
【技术特征摘要】
1.一种抗人血小板衍生生长因子β受体的抗体，其包含重链可变区，其特征在于，所述重链可变区包含CDR1、CDR2和/或CDR3；所述CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQIDNO.5的第76～99位所示，所述CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQIDNO.5的第151～174位所示，所述CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQIDNO.5的第289～312位所示。2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述重链可变区包含CDR1、CDR2和CDR3；较佳地，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；更佳地，编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。3.如权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体还包括重链恒定区；较佳地，所述重链恒定区为人源或者小鼠源的；和/或，所述重链可变区为人源的。4.如权利要求1～3任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体、抗体全长蛋白、抗原抗体结合域蛋白质片段、双特异性抗体、多特异性抗体、单链抗体、单域抗体或单区抗体；较佳地为重链抗体。5.一种核酸，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：何姗，段清，邓长静，金磊，刘礼乐，孙志武，邵晓慧，张洁，胡少平，徐辉，杨欣秀，张瑜，
申请(专利权)人：上海睿智化学研究有限公司，凯惠睿智生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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