脂肪组织复合制剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及脂肪组织复合制剂及其制备方法与应用。所述脂肪组织复合制剂，包含PDGF、脐带间充质干细胞、脂肪干细胞和脂肪组织。将脂肪干细胞、血小板衍生生长因子和脐带间充质干细胞分别用生理盐水配制成悬液，再将脂肪组织、脂肪干细胞悬液、血小板衍生生长因子和脐带间充质干细胞悬液混匀。上述脂肪组织复合制剂在整形或美容中作为填充制剂的应用。本发明专利技术复合生物制剂，注射后易于再血管化、成活率提高的优点，安全可靠，移植2‑3个月后，脂肪组织颜色淡黄，柔软，有光泽，仅少许纤维包裹；移植脂肪中心部位的微血管密度正常，血管再造化明显。

Adipose tissue composite preparation and preparation method and application thereof

The invention relates to a fat tissue composite preparation and a preparation method and application thereof. The adipose tissue composite preparation comprises PDGF, umbilical cord mesenchymal stem cells, adipose derived stem cells and adipose tissue. Fat stem cells, platelet derived growth factor and umbilical cord mesenchymal stem cells were treated with physiological saline into suspension, then the adipose tissue, adipose derived stem cell suspension, platelet-derived growth factor and umbilical cord mesenchymal stem cell suspension mixing. Application of the above composite preparation of adipose tissue in plastic or cosmetic as filling agent. The composite biological agents, revascularization and survival advantages, increase the rate of easy injection after transplantation is safe and reliable, 2 after 3 months, adipose tissue color yellow, soft, shiny, only a few fibers wrapped; microvessel density of transplanted fat at the center of the normal blood vessels, obvious nature.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学复合性生物制剂领域，尤其涉及一种脂肪组织复合制剂及其制备方法与应用。
技术介绍
自体脂肪移植是临床经常使用的一种脂肪移植方案，这种方法的优点是生物相容性好，组织来源丰富，易于塑形，不会产生免疫排斥等不良反应；缺点是注射入面部或乳房部位的脂肪颗粒不能很好的建立起血液供应系统。当大量脂肪堆积到一起时，会因供血不足导致脂肪细胞液化坏死、溶解、吸收，极易引发感染、变形、疼痛等后遗症，常需要再次注射来维持形状。单纯颗粒脂肪组织注射移植后，脂肪组织只能靠周围组织液的浸润和渗透来维持营养供应，而这种供应的距离只有150～200μm，超过该距离就需要生成新的血管来提供营养。然而，新生血管生长缓慢，每天只生长十几微米，致使移植脂肪外周部血供重建缓慢，血供延迟，移植脂肪中心长期处于缺血状态。移植脂肪中心部分的脂肪组织由于长时间缺血、缺氧，发生了坏死、液化，继而被巨噬细胞清除，发生纤维囊性变，微囊的出现预示着移植体最终纤维化和被吸收。越来越多的研究逐渐达成了共识，移植早期建立充分和及时的血供，移植物及时地再血管化是影响其成活体积的关键，也是减少其纤维囊性变的关键。
技术实现思路
有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种脂肪组织复合制剂及其制备方法与应用。为了实现上述的目的，本专利技术通过以下技术方案实现：脂肪组织复合制剂，包含血小板衍生生长因子(Platelet derived growth factor，PDGF)、脐带间充质干细胞(Mesnchymal Stem Cells，MSCs)及脂肪干细胞。优选地，所述脂肪组织复合制剂包含血小板衍生生长因子、脐带间充质干细胞、脂肪干细胞和脂肪组织。优选地，所述脂肪组织复合制剂含有下述体积份的下述组分：进一步优选地，所述脂肪组织复合制剂含有下述体积份的下述组分：一种脂肪组织复合制剂的制备方法，包括以下步骤：将脂肪干细胞、血小板衍生生长因子和脐带间充质干细胞分别用生理盐水配制成悬液，再将脂肪组织、脂肪干细胞悬液、血小板衍生生长因子悬液和脐带间充质干细胞悬液按照比例混匀。优选地，所述脂肪组织复合制剂的制备方法，包括以下步骤：将脂肪组织加入脂肪干细胞悬液，搅拌均匀后转移至一注射器中，并连接至三通管；把血小板衍生生长因子悬液与脐带间充质干细胞悬液搅拌均匀后转移至另一注射器中，并连接至上述三通管上；抽拉一注射器活塞的同时推挤另一注射器活塞，直至各组分充分混匀。上述脂肪组织复合制剂在整形或美容中作为填充制剂的应用。所述整形或美容包括充填颜面部的凹陷畸形、隆乳、丰颞和隆鼻。血小板衍生生长因子是一种重要的促有丝分裂因子，具有刺激特定细胞群分裂增殖的能力，可促进纤维母细胞的生成，而且可以促进皮下毛细血管形成，修复皮下血液微循环系统。脐带间充质干细胞分离自脐带组织，其来源广泛，增殖能力强，免疫原性弱，并且取材方便，异体移植不发生免疫排斥，而且具有免疫调节作用，能提高细胞或组织移植的成功率。此外，脐带间充质干细胞在回注后可分化形成新的组织，分泌的多种活性因子，可促进血管形成和组织修复。脂肪干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞，研究发现脂肪干细胞能够在体外稳定增殖且衰亡率低，同时它具有取材容易、少量组织即可获取大量干细胞，适宜大规模培养，对机体损伤小等优点，而且其来源广泛，体内储备量大，适宜自体移植。本专利技术通过将脂肪干细胞注入体内自体分化成脂肪细胞的方法，来获取大量的脂肪细胞。本专利技术复合制剂中输注的异体脐带间充质干细胞，细胞量较大，增殖能力强，可诱导分化为脂肪组织，回注后可分化形成新的组织，并且分泌的多种活性因子，具有免疫调节作用，促进血管形成和组织修复。加入的血小板衍生生长因子及间充质干细胞分泌的多种细胞因子，形成良好的微环境，可以使脂肪干细胞及间充质干细胞分化为成熟脂肪细胞，发挥组织替代作用。同时间充质干细胞可以抑制炎症反应，促进皮下新生毛细血管形成，使移植后的脂肪组织迅速重建血供，提高移植脂肪的存活率，避免组织液化坏死。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术提供一种含脂肪干细胞、脐带间充质干细胞及血小板衍生生长因子辅助脂肪移植用于组织填充的复合生物制剂。此复合制剂具有注射后易于再血管化、成活率提高的优点，安全可靠，适用于软组织填充、修复软组织缺损造成的凹陷畸形、面部及身体美容塑形，如可以用于充填颜面部的凹陷畸形等，也用于隆乳、丰颞和隆鼻等，在美容充填中可促进外形恢复、防止液化坏死。(2)本专利技术复合制剂在人体内存活率高。通过实验观察，移植后具有大量正常脂肪细胞，脂肪细胞清晰，仅有少量坏色、炎性反应现象和纤维间隙；移植2-3个月后，脂肪组织颜色淡黄，柔软，有光泽，仅少许纤维包裹；本专利技术脂肪组织制剂回注填充后，移植脂肪中心部位的微血管密度正常，血管再造化明显。本专利技术脂肪组织制剂的制作方法简单，可以大量制备。附图说明图1为实施例1流式检测中对照组FSC-SSC图。图2为实施例1流式检测中对照组CD73、CD45的流式检测结果图。图3为实施例1流式检测中对照组CD19、CD11b的流式检测结果图。图4为实施例1流式检测中对照组CD34、CD90的流式检测结果图。图5为实施例1流式检测中对照组CD105、HLA-DR的流式检测结果图。图6为实施例1流式检测中实验组FSC-SSC图。图7为实施例1流式检测中实验组CD73、CD45的流式检测结果图。图8为实施例1流式检测中实验组CD19、CD11b的流式检测结果图。图9为实施例1流式检测中实验组CD34、CD90的流式检测结果图。图10为实施例1流式检测中实验组CD105、HLA-DR的流式检测结果图。图11为实施例1中脐带间充质干细胞成脂诱导分化中对照组染色图片。其中，图11A、图11B和图11C分别是在100×、200×、400×下观察的图片。图12为实施例1中脐带间充质干细胞成脂诱导分化中实验组染色图片。其中，图12A、图12B和图12C分别是在100×、200×、400×下观察的图片。图13为实施例1中脂肪干细胞在倒置显微镜下观察诱导分化结果图。图14为实施例1中脂肪干细胞油红O染色结果图。具体实施方式为了更好的说明本专利技术，下面结合附图和具体实施方式做进一步说明。本专利技术中所用试剂或仪器均可由市场购得，使用的检测方法等都是本领域所熟知的，在此不再赘述。实施例1、脂肪组织复合制剂本实施例中复合制剂由脂肪组织、脐带间充质干细胞、脂肪干细胞和PDGF组成。使用生理盐水将脐带间充质干细胞、脂肪干细胞和PDGF分别配制成悬液。其中，脐带间充质干细胞悬液的密度为5.5×105个/ml，PDGF悬液的浓度为5ng/ml，脂肪干细胞悬液的密度为1×106个/ml。将0.4ml脂肪组织加入0.1ml脂肪干细胞悬液中，搅拌均匀后转移至一注射器中，并连接至三通管；把0.15ml血小板衍生生长因子悬液与0.35ml脐带间充质干细胞悬液搅拌均匀后转移至另一注射器中，并连接至上述三通管上；抽拉一注射器活塞的同时推挤另一注射器活塞，直至各组分充分混匀即得本专利技术复合制剂。将复合制剂转移至体积较大的注射器中，回注前低温(4℃)保存。采用此种方法直接在注射器内混匀制备复合制剂，制成的复合制剂也存储在注射器中，可以减少操作步本文档来自技高网...

【技术保护点】
脂肪组织复合制剂，其特征在于：包含血小板衍生生长因子、脐带间充质干细胞及脂肪干细胞。

【技术特征摘要】
1.脂肪组织复合制剂，其特征在于：包含血小板衍生生长因子、脐带间充质干细胞及脂肪干细胞。2.根据权利要求1所述的脂肪组织复合制剂，其特征在于：还含有脂肪组织。3.根据权利要求1所述的脂肪组织复合制剂，其特征在于：所述脂肪组织复合制剂含有下述体积份的下述组分：4.根据权利要求1所述的脂肪组织复合制剂，其特征在于：所述脂肪组织复合制剂含有下述体积份的下述组分：5.权利要求3或4所述脂肪组织复合制剂的制备方法，包括以下步骤：将脂肪干细胞、血小板衍生生长因子和脐带间充质干细胞分别用生理盐水配制成悬液，再将脂肪组织、脂肪干细胞悬液...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海佳，葛啸虎，王一飞，李嘉炜，王小燕，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44