特异结合GLP-1受体的药物融合体制造技术

本发明专利技术公开了一类特异性结合GLP-1受体的药物融合体，还公开了该类药物融合体的制备方法以及利用该药物融合体制备糖尿病药物的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，涉及一类能与GLP-I受体特异性结合的激动剂及其应用。本专利技术主要涉及通过基因工程手段将具有活性的、能与GLP-I受体有效结合的多肽片段(幻 通过连接链与由(X)n镜像氨基酸序列组成的多肽片段(X’)n连接在一起，在连接链处有聚合物、脂肪酸和糖修饰中的任何一种修饰。由此所形成的药物融合体包含2段反向重复的多肽片段序列(X)n与(X’)n。本专利技术还涵盖了该药物融合体及其修饰产物在治疗糖尿病中的应用。
技术介绍
研究发现，在2型糖尿病患者体内内源性类胰高糖素肽-I (Glucagon-likepeptide-1, GLP-1)分泌不足，因此补充足够的GLP-I成为2型糖尿病治疗的新手段(Estall et al. , Current Pharmaceutical Designs, 2006, V12:1731-1750. )。GLP-1受体激动剂可结合并激活GLP-I受体，作用机理与内源性GLP-I相似，主要用于二甲双胍、磺脲类等降糖药不能有效控制血糖的2型糖尿病患者。GLP-I受体激动剂可平稳的控制血糖，改善β细胞功能，减轻患者体重，并给予心血管额外的保护(Meier et al.，DiabetesMetabolism Research and Reviews, 2005, V21:91-117.)。目前基于该机理开发的用于糖尿病治疗的多肽主要有2大类基于内源性GLP-I(胰高糖素样肽-I)改造的多肽以及提取自美国巨晰唾液的exenatide (艾塞那肽)及其衍生物。这两类多肽由于分子量比较小，且在体内易被二肽基肽酶IV酶切，因此或者不能应用于临床(如GLP-I )，或者患者治疗的依从性不佳(如exenatide)。为降低二肽基肽酶对上述多肽的酶切，一般将GLP-I与exenatide的N端第二位的丙氨酸突变为甘氨酸。为延长该类小肽的半衰期，一般通用的做法是将该类活性多肽进行聚合物的化学修饰、微球包埋或蛋白融合(包括Fe融合和人血白蛋白融合)。其中基于GLP-I开发，已探索了化学修饰(Lilaglutide,棕榈酸修饰；GLP1_PEG, PEG修饰)、Fe融合(Dulaglutide)、人血白蛋白融合(albiglutide)、氨基酸替代(Taspoglutide)几种方案,大部分产品已经进入III期临床评价。基于exenatide的长效化制剂开发,主要从微球包埋(Bydureon)、氨基酸替代(Lixisenatide)、化学修饰(PC-DAC-Exendin_4)及蛋白融合(VRS-859,Xten 技术)着手，其中微球包埋的Bydureon已于2011年7月经FDA批准上市。但上述的几种解决手段存在下述潜在问题=(I)PEG修饰的长效化制剂(GLP1-PEG，由Eli Lilly开发，在II期临床时暂停)，其聚合物直接修饰在GLP-I的尾部。由于聚合物和GLP-I相比分子体积较大，存在的空间位阻效应会影响GLP-I与其受体(GLP-IR)的有效结合，造成体内生物学活性显著下降；(2) Fe融合多肽后其半衰期的延长并不如所预期的那样显著(美国专利No. 6，756，480，其引入本文作为参考);(3)其它形式，如人血白蛋白融合或微球包埋在患者体内有引发免疫原性、降低治疗效果的风险。尽管已经做出了上述努力，在糖尿病领域中，仍存在进一步改良GLP-I受体激动剂的极大的、迫切的需要，以在临床上发挥更佳的促胰岛素分泌的效果，用于糖尿病的治疗。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术提供了具有下式的化合物权利要求1.具有下式的能与GLP-I受体特异性结合的药物融合体 其中， X 是能结合胰高糖素样肽-I 受体(Glucagon-like peptide-1 receptor, GLP-1R)的多肽片段； Y是连接链； V是X的镜像多肽片段； Z是聚合物、脂肪酸或糖类中的一种； a、b不存在，或者为各自独立地、包括1-20个氨基酸残基的多肽片段；2.根据权利要求I所述的药物融合体，其特征在于所述药物融合体中包含2段反向重复的多肽序列(互为镜像的(幻 与(X’)n)，所述的2段重复序列((X)n与(X’)n)通过连接链Y连接在一起；在连接链的部位有聚合物、脂肪酸或糖修饰中的任何一种修饰；(X)n与Y间和(X’)n与Y间不存在或有1-20个氨基酸残基间隔。3.根据权利要求I或2所述的药物融合体，其特征在于η等于2。4.根据权利要求I或2所述的药物融合体，其特征在于连接链Y包含一个可发生化学修饰的氨基酸位点。5.根据权利要求I或2所述的药物融合体，其特征在于X片段的序列选自SEQIDNo: I、SEQ ID Νο:2 或 SEQ ID No:3 给出的序列；或 SEQ ID No: I、SEQ ID Νο:2 或 SEQ IDNo:3其中一个或多个位置的氨基酸被丝氨酸替换的氨基酸序列。6.根据权利要求1-4任意一项所述的药物融合体，其特征在于连接链Y的长度为3-20个氨基酸，所述连接链的序列包括但不限于SEQ ID NO:4, SEQ ID Ν0:5或SEQ ID Ν0:6给出的氨基酸序列。7.根据权利要求4所述的药物融合体，其特征在于可发生化学修饰的氨基酸位点为半胱氨酸。8.根据上述权利要求1-7任意一项所述的药物融合体，其特征在于连接链部位的化学修饰包括但不限于脂肪酸修饰、聚乙二醇修饰、包含乙氧基重复结构的嵌段共聚物修饰和糖修饰中的任何一种。9.根据权利要求8所述的药物融合体，其特征在于化学修饰是通过Z末端的化学反应基团和连接链Y上游离的半胱氨酸反应进行修饰，从而制备得到药物融合体。10.根据权利要求8所述的药物融合体，其特征在于通过修饰制备的药物融合体中，Z为脂肪酸，所述脂肪酸的碳链长度为5-30个碳。11.根据权利要求8所述的药物融合体，其特征在于通过修饰制备的药物融合体中，Z为聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量范围在5000-40000道尔顿之间。12.根据权利要求8所述的药物融合体，其特征在于通过修饰制备的药物融合体中，Z为包含乙氧基重复结构的嵌段共聚物，所述包含乙氧基重复结构的嵌段共聚物的分子量范围在5000-40000道尔顿之间。13.根据权利要求11所述的药物融合体，其特征在于所述聚乙二醇包括线性聚乙二醇和分枝型聚乙二醇。14.根据上述权利要求1-8任意一项所述的药物融合体，其特征在于X片段选自GLP-I(7-37), GLP-I (7-36)酰胺或其类似物。15.根据上述权利要求1-8任意一项所述的药物融合体，其特征在于X片段选自exenatide或其类似物。16.—种编码权利要求1-8或权利要求14-15任一所述的多肽的核苷酸序列。·17.—种包含权利要求16的表达载体的宿主细胞。18.根据权利要求17所述的宿主细胞，其特征在于宿主细胞为真核细胞。19.根据权利要求17所述的宿主细胞，其特征在于宿主细胞为原核细胞。20.权利要求1-15任意一项所述的药物融合体在制备糖尿病药物中的应用。全文摘要本专利技术公开了一类特异性结合GLP-1受体的药物融合体，还公开了该类药物融合体的制备方法以及利用该药物融合体制备糖尿病药物的应用。文档编号C12N1/19GK102本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有下式的能与GLP?1受体特异性结合的药物融合体：，其中，X是能结合胰高糖素样肽?1受体（Glucagon?like?peptide?1?receptor,?GLP?1R）的多肽片段；Y是连接链；X’是X的镜像多肽片段；Z是聚合物、脂肪酸或糖类中的一种；a、b不存在，或者为各自独立地、包括1?20个氨基酸残基的多肽片段；n=1?8。84480dest_path_image001.jpg

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：于鹏展，
申请(专利权)人：西藏海思科药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：