一种新的多肽--人神经毒素受体结合蛋白29.81和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人神经毒素受体结合蛋白２９．８１，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如神经性疾病、精神性疾病等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人神经毒素受体结合蛋白２９．８１的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人神经毒素受体结合蛋白29.81，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。α-Latrotoxin是黑寡妇蜘蛛毒液的一种成分，它是一种有效的突触前神经毒素。α-Latrotoxin可迅速引起大量神经传递素的释放，它的慢性影响可引起细胞膜破损和接合恶化。α-Latrotoxin结合于位于神经终端突触前浆膜上的具有高度亲和力的受体。从鼠和牛脑中分离出一种与α-Latrotoxin以高度亲和力结合的蛋白复合物显示，它含有一个160-220kDA的大分子蛋白和一个29kDa的小分子蛋白。neurexins是具有细胞膜受体特征的一类膜蛋白。大分子蛋白可剪切不同种类的neurexin Iα，重组neurexin Iα与α-Latrotoxin以高亲和力结合。小分子蛋白命名为neurexophilin，它可与neurexin Iα强有力的结合。neurexin Iα基因在神经元中广泛表达，而neurexophilin基因只在少数抑制性中间神经元中高水平表达。对小鼠两个明显不同的neurexophilin基因进行基因组分析表明，一个与大鼠具有高的同源性，在大鼠和小鼠的脑中广泛表达；另一个与牛具有高同源性，但在啮齿动物中无mRNA与之相对应，证明啮齿动物表达不同的neurexophilin基因。这两种neurexophilin基因并不同时表达，而是在不同细胞中选择性表达。Neurexophilin具有四个结构域N端信号多肽，N端不保守序列，一个有三个潜在的N糖基化位点但不含有半胱氨酸的保守区域，和一个具有六个保守的半胱氨酸残基的C端区域。鼠和牛neurexophilins不保守的N端的80个残基中具有20％的同源性，高度同源的C端序列的169个残基中具有85％的同源性。Neurexophilin中信号序列的存在以及缺乏憎水穿膜区域显示，它是一种分泌蛋白。Neurexophilin可与neurexin Iα紧密结合，在α-Latrotoxin发挥作用过程中具有重要地位。Neurexophilin基因的表达的表达与一些相关的神经疾病有关。(Petrenko，et.al，J.Neurosci.16，4360-4369，1996)本专利技术的人的基因与鼠神经毒素受体结合基因Neurexophilin 1在蛋白水平上有98％的同源性。且两者均含有神经毒素受体结合基因Neurexophilin 1的四个特征结构域。基于以上各点，故认为本专利技术的新基因为神经毒素受体结合蛋白基因，命名为{人神经毒素受体结合蛋白29.81}。并以此推断其与Neurexophilin1相似，同为神经毒素受体结合蛋白家族的成员，并具有相似的生物学功能。由于如上所述人神经毒素受体结合蛋白29.81蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人神经毒素受体结合蛋白29.81蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人神经毒素受体结合蛋白29.81蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人神经毒素受体结合蛋白29.81以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人神经毒素受体结合蛋白29.81的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人神经毒素受体结合蛋白29.81的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人神经毒素受体结合蛋白29.81的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人神经毒素受体结合蛋白29.81的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人神经毒素受体结合蛋白29.81的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人神经毒素受体结合蛋白29.81异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少99％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中21-836位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2063位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人神经毒素受体结合蛋白29.81蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人神经毒素受体结合蛋白29.81蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人神经毒素受体结合蛋白29.81表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人神经毒素受体结合蛋白２９．８１，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]