一种高密度检测拷贝数变异的方法技术

本发明专利技术涉及一种快速高密度多重竞争性PCR法检测拷贝数变异的方法，包括下列步骤：（1）提供多重竞争性PCR引物，由至少一对通用荧光引物、至少一对位于待测区段和至少一对位于参照区段的嵌合特异引物组成；（2）用限制性内切酶消化样本获得独立的结构相似的样本模板小片段，使得该检测片段能被高密度PCR所检测，且对于高GC序列不敏感；（3）利用PCR法直接制备内对照模板；（4）多重竞争性PCR反应；和（5）数据分析。本发明专利技术的方法能在一天内快速简便地建立起中通量的适于5～28个基因/反应的拷贝数变异的检测方案，结果准确，适用性广。本发明专利技术还提供相应的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及用荧光通用引物、限制性内切酶消化样本和PCR法制备内对照模板的多重竞争性PCR检测拷贝数变异的方法，应用于生物科学研究与临床分子诊断。
技术介绍
拷贝数变异(copy number variations, CNVs)是近年来发现的基因组多样性的新形式，它是指与参考序列相比，基因组中lkb 3Mb的DNA片段的结构变异现象。CNVs广泛存于基因组中，与一些遗传性疾病的发生相关，对人类抗病性和易感性表型等变异有重要影响。这就要求建立一种快速、准确和低成本的CNVs分型检测技术。随着生物技术的发展，不同的研究小组相继开发了许多的检测方法，主要包括 以杂交为基础和以PCR为基础的检测技术。前者可以在全基因组水平上对CNVs进行检测，代表技术有微阵列比较基因杂交(SolinasToldo, Lampel et al Genes ChromosomesCancer. 1997Dec; 20 (4) : 399-407)、全基因组 SNP 芯片(Irving, Bloodworth et al. CancerRes. 2005Aprl5; 65 (8) :30本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多重竞争性PCR检测拷贝数变异的方法，包括以下步骤：（1）提供多重竞争性PCR引物，由至少一对通用荧光引物、至少一对位于待测区段和至少一对位于参照区段的嵌合特异引物组成；所述通用荧光引物长度范围为10~25bp，5’端用荧光标记，TM值≤57℃值，且对待测基因组具有特异性；所述嵌合特异引物针对待测区段和参照区段设计，TM值≥62℃，长度范围为28~50bp，3’端为18~25bp的特异引物序列，5’端为所述通用引物序列，所述3’端和5’端的两个序列之间插入两个碱基的固定组合；所有嵌合特异引物之间的TM值的差异不超过3℃；当有两对或两对以上时，所述参照引物设计在不同的参照区段上，且与待测基因...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陆炯，陈轶群，肖君华，
申请(专利权)人：上海翼和应用生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：