The present invention belongs to the field of genetic diagnosis and human assisted reproduction, and more particularly relates to preimplantation diagnostic technology (PGD). According to the method of the invention, the balanced chromosomal translocation (including reciprocal translocation and translocation Robertson) patients and their spouses, after in vitro fertilization embryo and translocation chromosomes were relatives of haplotype linkage analysis of pedigrees, rapid, simple and accurate in the embryonic chromosomal translocation of embryonic and normal chromosome, and at the same time of embryonic chromosomal copy number variation screening, improve the clinical pregnancy rate in embryo, in time to block the transfer of genetic balance translocation of next generation. To some extent, it has promoted the development and progress of human assisted reproductive technology.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因诊断和人类辅助生殖领域,具体而言,涉及胚胎植入前诊断技术(PGD),是一种能够鉴别胚胎是否携带亲本平衡易位染色体遗传信息的单体型连锁分析方法。
技术介绍
染色体平衡易位是一种常见的染色体结构变异,是由于不同染色体的断裂部分发生错误拼接而造成的染色体异常。正常人群中大概有0.19%的发生率,在反复流产或者反复IVF种植失败的患者中发生的概率约为5%。尽管平衡易位携带者一般情况无异常表型,但是其原始生殖细胞减数分裂产生的配子中有高达19%-77%为不平衡型的配子,这与染色体易位的断裂点和发生易位的具体染色体有关。染色体的四价体结构,通常发生在细胞减数分裂I期,由易位的两条染色体和与其对应的两条正常的同源染色体配对产生。这种四价结构通常的形式有2:2,3:1或者4:0三种分离模式。只有在2:2的模式下,对位分离模式能产生正常或者平衡的配子,其他的分离模式均产生非平衡类型的配子。非平衡的配子会导致不孕,反复流产,或者生育智力障碍或其他先天异常的后代。PGD即“胚胎移植入诊断技术”最早由HandysideAH首先成功应用于临床,最初的PGD技术使用PCR或FISH方法检测性别,帮助有风险生育血友病A、进行性肌营养不良等X连锁遗传病后代的夫妇妊娠分娩出正常女婴;2006年来,有研究者通过选择与致病基因在染色体的位置上紧密连锁的STR标记位点来诊断胚胎是否遗传了致病基因,进行单基因疾病的胚胎植入前诊断,该方法又被称为植入前遗传学单倍型分析(preimplantationgenetichaplotyping,PGH)。PGD技术由于可以在染色体平衡易位 ...
【技术保护点】
一种用于鉴别染色体平衡易位携带胚胎和染色体完全正常胚胎的家系单体型构建方法,其特征在于,包含以下步骤:1)样本基因分型:将染色体平衡易位携带者夫妇双方、至少一名携带者亲属和染色体平衡易位携带者夫妇体外受精胚胎进行大规模SNP基因型检测;携带者亲属可为与携带者具有相同平衡易位的亲属,也可为染色体正常的亲属;2)确定信息SNPs位点:信息SNPs的选择标准为:在染色体平衡易位携带者中为杂合型,在其配偶中为纯合型,并且在携带者亲属中也是纯合型的SNP位点;选择覆盖染色体易位断裂点、易位染色体和与其相对应的正常的同源染色体上的信息SNPs,染色体每Mb范围内至少选择1个信息SNP;在覆盖断裂点区域,信息SNPs从断裂点上下游1‐5Mb范围内选择;3)构建家系单体型:集合步骤2)确定的信息SNPs位点通过家系连锁分析得到覆盖两处断裂区域、易位染色体整条染色体及其同源染色体的整条染色体的单体型,不同染色体单体型的集合称为家系单体型。
【技术特征摘要】
1.一种用于鉴别染色体平衡易位携带胚胎和染色体完全正常胚胎的家系单体型构建方法,其特征在于,包含以下步骤:1)样本基因分型:将染色体平衡易位携带者夫妇双方、至少一名携带者亲属和染色体平衡易位携带者夫妇体外受精胚胎进行大规模SNP基因型检测;携带者亲属可为与携带者具有相同平衡易位的亲属,也可为染色体正常的亲属;2)确定信息SNPs位点:信息SNPs的选择标准为:在染色体平衡易位携带者中为杂合型,在其配偶中为纯合型,并且在携带者亲属中也是纯合型的SNP位点;选择覆盖染色体易位断裂点、易位染色体和与其相对应的正常的同源染色体上的信息SNPs,染色体每Mb范围内至少选择1个信息SNP;在覆盖断裂点区域,信息SNPs从断裂点上下游1‐5Mb范围内选择;3)构建家系单体型:集合步骤2)确定的信息SNPs位点通过家系连锁分析得到覆盖两处断裂区域、易位染色体整条染色体及其同源染色体的整条染色体的单体型,不同染色体单体型的集合称为家系单体型。2.一种鉴别染色体平衡易位携带胚胎和染色体完全正常胚胎的PGH方法,其特征在于,包含以下步骤:1)样本基因分型将染色体平衡易位携带者夫妇双方、至少一名携带者亲属和携带者夫妇体外受精胚胎进行大规模SNP基因型检测;携带者亲属可为与携带者具有相同平衡易位的亲属,也可为染色体正常的亲属;将染色体平衡易位携带者夫妇双方、携带者亲属称为参照样本,携带者夫妇体外受精胚胎称为待定样本;2)确定信息SNPs位点信息SNPs的选择标准为:在染色体平衡易位携带者中为杂合型,在其配偶中为纯合型,并且在携带者亲属中也是纯合型的SNP位点;选择覆盖染色体易位断裂点、易位染色体和与其相对应的正常的同源染色体上的信息SNPs,染色体每Mb范围内至少选择1个信息SNP;在覆盖染色体易位断裂点区域,信息SNPs从染色体易位断裂点上下游1‐5Mb范围内选择;3)构建家系单体型集合步骤2)确定的信息SNPs位点通过家系连锁分析得到覆盖两处断裂区域、易位染色体整条染色体及其同源染色体的整条染色体的单体型,不同染色体单体型的集合称为家系单体型;4)数据收集和分析将待定样本中染色体易位断裂点区域的单体型信息和参照样本的单体型信息进行比对,通过整条染色体的单体型判断染色体易位断裂点区域是否发生了同源重组:i)当以与携带者具有相同平衡易位的亲属为参照时:a.若待定样本染色体易位断裂点区域没有发生重组,当待定样本断裂点区域单体型信息和参照样本中染色体平衡易位携带者以及与携带者具有相同平衡易位的亲属的单体型信息一致时,则为平衡易位携带胚胎;当待定样本断裂点区域单体型信息与参照样本中染色体平衡易位携带者单体型信息一致,但与携带相同平衡易位的携带者亲属的单体型信息不一致时,则为染色体完全正常的胚胎;b.若待定样本染色体易位断裂点区域发生了同源重组,则平衡易位携带或染色体完全正常胚胎的判断标准与a相反;ii)当以染色体正常的亲属为参照时:a.若待定样本染色体易位断裂点区域没有发生重组,当待定样本断裂点区域单体型信息和参照样本中染色体平衡易位携带者以及与携带者的染色体正常的亲属的单体型信息一致时,则为染色体完全正常的胚胎;当待定样本断裂点区域单体型信息与参照样本中染色体平衡易位携带者单体型信息一致,但与携带者的染色体正常的亲属的单体型信息不一致时,则为平衡易位携带胚胎;b.若待定样本染色体易位断裂点区域发生了同源重组,则平衡易位携带或染色体完全正常胚胎的判断标准与a相反。3.如权利要求1或2所述方法,其特征在于,步骤1)所述大规模SNP基因型检测覆盖23对染色体;大规模SNP基...
【专利技术属性】
技术研发人员:张硕,张月萍,卢大儒,
申请(专利权)人:上海集爱遗传与不育诊疗中心,复旦大学,
类型:发明
国别省市:上海;31
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