定量检测大肠杆菌RNA的方法及其专用标准品和应用技术

本发明专利技术公开了一种定量检测大肠杆菌RNA的方法及其专用标准品和应用。本发明专利技术提供的方法包括如下步骤：（1）按照如下方法制作标准曲线；将RNA标准品配制成各个浓度的标准品稀释液，然后将各个标准品稀释液反转录为cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR，以实时荧光定量PCR体系中的cDNA对应的RNA拷贝数（也可对拷贝数进行数据处理，如拷贝数以10为底的对数）和Ct值制作标准曲线方程；（2）提取大肠杆菌的总RNA并反转录为cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR，将Ct值代入所述标准曲线方程，得到大肠杆菌的RNA含量。本发明专利技术的方法可用于快速检测环境中少量的大肠杆菌，为快速检测活性大肠杆菌提供技术支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种定量检测大肠杆菌RNA的方法及其专用标准品和应用。
技术介绍
大肠杆菌(Escherichia coli)是一种食源性致病菌,会引起腹湾、恶心、出血性结肠炎等症状。近年来，由大肠杆菌引发的感染性疾病在许多国家都相继报道，已经成为世界性的环境安全性问题。目前，大肠杆菌的传统检测方法是培养法。然而，近年的研究发现，细菌在环境压力(如高温)下可以进入“具有活性但不可培养(viable but nonculturable, VBNC)”的状态，无法用常规培养法检出，但仍然保持代谢活性和致病性，能够在环境压力解除的条件下恢复其可培养性，引发严重的微生物安全风险。已经有研究表明，大多数革兰氏阴性菌(包括大肠杆菌)也可以进入这样的状态。因此，传统培养法无法检测到处于VBNC状态的大肠杆菌而得到假阴性的结果。PCR技术可以快速、灵敏的检测到目标菌。然而有研究表明，经过热处理后，尽管细菌已经丧失细胞活性，但作为PCR扩增模板的DNA仍可以存在数天，因此常规PCR技术无法区分活性菌与非活性菌。与DNA相比，大多数mRNA较不稳定，其半衰期较短(仅几分钟)，可以更好的作为活性菌存在的分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种定量检测大肠杆菌RNA的方法，包括如下步骤：（1）按照如下方法制作标准曲线；将RNA标准品配制成各个浓度的标准品稀释液，然后将各个标准品稀释液反转录为cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR，以实时荧光定量PCR体系中的cDNA对应的RNA拷贝数和Ct值制作标准曲线方程；（2）提取大肠杆菌的总RNA并反转录为cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR，将Ct值代入所述标准曲线方程，得到大肠杆菌的RNA含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何苗，林怡雯，李丹，吴舒旭，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：