【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】优先权 本申请要求2010年6月8日提交的美国临时专利申请号61/397,186的优先权，其全部内容以其整体通过引用并入本文。 专利
本专利技术涉及检测在纯化生物分子的方法中使用的聚合物的残余量的方法，所述生物分子例如蛋白质、多肽、抗体、疫苗等。
技术介绍
生物分子(例如包括抗体在内的治疗性蛋白质)的高效和经济的大规模纯化对于生物技术和医药工业是日益重要的问题。一般而言，纯化方法相当复杂和昂贵并包括许多不同的步骤。例如，典型地以蛋白质为例，蛋白质使用细胞培养方法产生，例如使用工程化的哺乳动物或细菌细胞系通过插入含有编码该蛋白质的基因的质粒来产生目标蛋白。一般而言，在靶蛋白表达后，将其与一或多种不期望的组分(如宿主细胞蛋白、培养基副产物和DNA)分开是一个巨大的挑战。当治疗性蛋白质旨在用于人而必须获得食品和药物管理局(FDA)的批准时，这样的分开尤其重要。 一般而言，目前用于蛋白质分离和/或纯化的方法包括至少以下步骤：裂解细胞以回收胞内蛋白或如果是分泌蛋白则从培养基回收蛋白；使用差异离心或过滤去除细胞和细胞碎片以获得含有目标蛋白的净化的样品；和在多步骤方法中使用多种层析介质将目标蛋白与样品中的多种杂质分开。 已经证明某些聚合物在生物分子从样品中的一或多种杂质的纯化中特别有用。例如，已经很好地确立了聚电解质聚合物在絮凝中纯化蛋白质的用途(见例如国际PCT专利申请号WO2008/091740)。这可以用广范围的聚合物实现，仅仅所需的一般特性为所述聚合物必须和目标物质(例如靶分子或杂质)具有某些水平的相互作...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.08 US 61/397,1861.检测包含目标生物分子的样品中的聚合物残余量的方法，其中所述
聚合物用于将所述目标生物分子与一或多种杂质分开，所述方法包括以下
步骤：(1)使所述样品与所述聚合物接触，其中所述聚合物与标签相连；和
(2)检测所述标签，
其中所检测的标签的量代表所述包含目标生物分子的溶液中的残余聚
合物的量。
2.权利要求1的方法，其中所述聚合物与寡核苷酸标签相连。
3.权利要求2的方法，其中使用扩增反应检测所述寡核苷酸标签。
4.权利要求3的方法，其中所述扩增反应包括添加能够与所述寡核苷
酸标签5′和3′末端杂交的一套引物。
5.权利要求2的方法，其中所述寡核苷酸标签与半抗原分子、荧光分
子或放射性分子相连。
6.权利要求2的方法，其中所述检测步骤包括非扩增反应。
7.权利要求6的方法，其中所述非扩增反应包括使用标记的探针。
8.权利要求7的方法，其中所述标记的探针包含可检测染料。
9.权利要求1的方法，其中所述聚合物使用共价连接与所述寡核苷酸
标签相连。
10.权利要求3的方法，其中所述扩增反应包括聚合酶链反应。
11.权利要求2的方法，其中所述寡核苷酸标签包含选自10个核苷酸、
15个核苷酸、20个核苷酸、25个核苷酸、30个核苷酸、35个核苷酸、40
个核苷酸、45个核苷酸、50个核苷酸、55个核苷酸和60个核苷酸的长度。
12.权利要求2的方法，其中所述寡核苷酸标签包含60个核苷酸或少
于60个核苷酸的长度。
13.权利要求11的方法，其中所述寡核苷酸标签包含位于所述标签3′
末端的反应性基团。
14.权利要求12的方法，其中所述寡核苷酸标签包含位于所述标签3′
末端的反应性基团。
15.权利要求13的方法，其中所述反应性基团选自卤素基团、环氧基、
羟基、氨基、巯基和羧基。
16.权利要求14的方法，其中所述反应性基团选自卤素基团、环氧基、
羟基、氨基、巯基和羧基。
17.权利要求15的方法，其中所述反应性基团被进一步修饰。
18.权利要求16的方法，其中所述反应性基团被进一步修饰。
19.权利要求1的方法，其中所述聚合物包含反应性基团。
20.权利要求1的方法，其中所述寡核苷酸标签包含第一反应性基团而
所述聚合物包含第二反应性基团，且其中所述第一和第二反应性基团彼此
共价地相连。
21.权利要求1的方法，其中通过纯化去除不与所述聚合物相连的寡核
苷酸标签。
22.权利要求1的方法，其中所述生物分子选自蛋白质、抗体和疫苗。
23.权利要求22的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
24.权利要求1的方法，其中所述寡核苷酸标签包含SEQ ID NO:1所
示的序列。
25.权利要求1的方法，其中所述寡核苷酸标签包含预测为无二级结构
的核苷酸序列。
26.权利要求1的方法，其中所述寡核苷酸标签包括不含长度为4个或
更多碱基的同聚物的核苷酸序列。
27.权...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·齐尔曼，J·贾比尔，J·哈姆日克，
申请(专利权)人：EMD密理博公司，
类型：
国别省市：
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