本发明专利技术公开了一种两面针组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基。在H培养基的基础上进行了改良，调整了大量元素用量，增加了七水硫酸亚铁的含量，本发明专利技术更适合不同产地的两面针和两面针单株组织培养。继代周期20～25天，增殖系数4～6，继代苗生长良好，小苗粗壮、整齐，叶色浓绿、无黄化苗，得苗率高。生根苗出根率可达90%、出根快，温度25±2℃时，平均出根时间为10～15天，根系发达，出根量多平均有3～5条根，小苗木质化好，移栽成活率达90%以上，瓶苗出圃时间平均为30天左右。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及组织培养基，尤其涉及一种两面针组织培养培养基。
技术介绍
两面针(Zanthoxylum nitidum),为芸香科植物，因其叶片中脉两面均有小钩刺，故称“两面针”，又名两背针、钉板刺(福州)、入山虎、麻药藤、入地金牛、叶下穿针、红倒钩筋、大叶描爪簕(广东、广西)。两面针喜生长在温热、阳光充足的地方，山地、丘陵、平地的疏林、灌丛中、荒山草坡的有刺灌丛中较常见，主要分布在我国广东、广西、福建、海南、云南、贵州及台湾等地。两面针是我国较常用的一种中药材，根茎、叶、果皮均可入药，有活血、散瘀、镇痛、消肿等功效。现代药用化学研究表明两面针的根茎含有生物碱oxynitidine，N-demethoxycheIerythrone, dihydronitidine， skimmianine,6-ethoxychelerythrin e,a -allocryptopine,nitidine等。局部应用时,对神经末梢有麻醉作用，且麻醉效果稳定，无不良反应，也无肝肾损害等，是一种具有广阔药用前景的中药材，因此开展两面针的基础研究，具有十分重要的意义。目前，国内已有一些两面针组培技术初步研究报道，在培养基的选择上一般采用基本培养基(MS)和生长调节剂的结合，但是两面针种源产地不同，组织培养条件也不同，SP使是同一产地的两面针种源，选用不同单株作外植体，组织培养条件也不同。MS培养基适用于部分产地两面针组织培养，部分产地两面针种源和两面针单株用MS培养基进行继代培养，先叶片变黄、变白，继而茎变黄、变白，芽苗死亡，无法继续进行继代培养。如果不同产地两面针种源、或两面针单株使用一种培养基，生产操作难度大，成本高，不利于规模化生产。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种两面针组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾1250mg/L、硝酸铵1000mg/L、七水硫酸镁370mg/L、二水氯化隹丐166mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、乙二胺四乙酸二钠56. 0mg/L、七水硫酸亚铁41. 7mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰25mg/L、七水硫酸锌10mg/L、硼酸10mg/L、二水钥酸钠0. 25mg/L、碘化钾 0. 083mg/L、五水硫酸铜 0. 025mg/L ；(3)有机物肌醇100. 0mg/L、甘氨酸2. 0mg/L、盐酸硫胺素(VB1) 0. 5mg/L、盐酸批哆醇(VB6) 0. 5mg/L、叶酸 0. 5mg/L、生物素(VH) 0. 05mg/L ；(4)植物生长调节剂6_苄基腺嘌呤0. 4 I. 0mg/L、萘乙酸0. 2 0. 5mg/L ；余量为蒸馏水。每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾1250mg/L、硝酸铵1000mg/L、七水硫酸镁370mg/L、二水氯化隹丐166mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、七水硫酸亚铁33. 4mg/L、乙二胺四乙酸二钠44. 8mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰25mg/L、七水硫酸锌10mg/L、硼酸10mg/L、二水钥酸钠O. 25mg/L、碘化钾 O. 083mg/L、五水硫酸铜 O. 025mg/L ；(3)有机物肌醇100. Omg/L、甘氨酸2. Omg/L、盐酸硫胺素(VB1) O. 5mg/L、盐酸批哆醇(VB6) O. 5mg/L、叶酸 O. 5mg/L、生物素(VH) O. 05mg/L ；(4)植物生长调节剂:生根粉ABT6号O. 4 O. 8mg/L、萘乙酸O. 2 O. 4mg/L ；余量为蒸馏水。本专利技术两面针组织培养培养基中的继代、生根培养基的配制方法为I母液配制I. I为便于取样，宜先配制各种母液，分为大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和各种植物生长调节剂母液。蔗糖、琼脂不宜配成母液，需要时直接称样；·I. 2大量元素母液和有机物母液的各组分浓度应与培养基的组分浓度成10 100的倍数关系，微量元素母液成200 500的倍数关系，而植物生长调节试剂母液的浓度宜配成 lmg/ml ；I. 3母液选用无菌的蒸馏水、去离子水或超纯水配制，大量生产时用煮沸过的水；I. 4配制大量元素母液时，每个组分应单独溶解，后按氮、钙、镁、磷的顺序逐个混合，否则容易引起沉淀；I. 5微量元素母液含有见光易分解的碘化钾和易氧化的硫酸亚铁，应用棕色瓶保存；I. 6植物生长调节剂母液和有机物母液应置于冰箱中保存；I. 7母液配制后应及时使用，贮存时间不宜超过I个月；I. 8发现母液有沉淀，或有微生物生长，或有藻类生长，应废弃不用。2培养基配制2. I依照培养基配方，按比例量取母液，加水定容后转至不锈钢锅等容器内；2. 2加入适量凝固剂和糖，并搅拌使凝固剂充分分散，糖充分溶解；2. 3加热至刚沸腾，使凝固剂完全溶解。若采用边分装边搅拌的自动化仪器配制培养基时，可省去加热使凝固剂溶解的过程；2. 4用I. ON盐酸或I. ON氢氧化钠调整至适当的酸碱度；2. 5尽快将培养基分装到培养器皿内，以免培养基凝固或变稠而难以分装；2. 6分装培养基时应避免培养基粘到瓶口，一旦粘上，应擦除干净，否则容易引起污染。3培养基消毒3. I将分装好的培养基放入高压消毒锅内消毒；3. 2加热初期，当消毒锅消毒室的气压达O. 05Mpa时，打开冷凝阀，排尽消毒室内冷空气；3. 3当消毒室内气压达到O. llMpa、温度达121°C时，开始计时，保持温度与压力消毒15 20分钟；3. 4关闭加热电源开关，按慢排气方式排放热气，待消毒室内的气压降至大气压时打开消毒锅盖或门，取出培养基；3. 5培养基应置于空气少流动和少灰尘的干净环境冷却，否则在降温进气过程中导致霉菌孢子进入培养器皿，产生霉菌污染。或用高压高温消毒过的厚布包裹冷却。 4培养基储藏 4. I培养基应尽量现配现用。4. 2可在空气干净且不流动的环境短时间储藏培养基，但储藏超过I个月的培养基应废弃不用。本专利技术两面针组织培养的方法为I.芽的诱导于晴天选取生长健壮的、无病虫害的两面针植株，剪取半木质化的幼嫩枝条作为外植体，剪去叶片(留叶柄)，用加有少许洗洁精的水清洗I 2次，再用流水冲洗干净，然后在超净工作台上用O. 1%的氯化汞消毒6-7分钟并摇动数次，最后用无菌水清洗4 5次， 将已经消毒好的材料剪切成约2cm长段，每段留I 2个腋芽，然后斜插或垂直插在诱导芽的培养基中。外植体初次培养时，需全暗培养10 15天腋芽即可开始萌动，然后再移至见光的地方培养。2.芽的增殖培养当腋芽萌动长至Icm左右时，切取腋芽诱导分化丛生芽即可进行芽的继代增殖，一般一个月继代一次，继代材料均放在室内培养，培养室温度为(26±2) °C，光照12h.tr1，光照度2000 30001x。3.生根的诱导当丛生芽长至3cm左右时，可选取较健壮的芽转移到生根培养基中，进行生根诱导，其余芽丛可转移到新配的继代培养基中让其继续增殖。芽条转入生根培养基中后，先在室内弱光条件下培养15天左右，发根率到50%时(冬季气温低室内培养20天左右，发根率达70%以上)搬到室外炼苗大棚在自然散射光照培养10 20天(秋冬时间本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种两面针组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其特征在于：每升（L）继代培养基的组分及各组分的含量如下：（1）大量元素：硝酸钾1250mg/L、硝酸铵1000mg/L、七水硫酸镁370mg/L、二水氯化钙166mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、乙二胺四乙酸二钠56.0mg/L、七水硫酸亚铁41.7mg/L；（2）微量元素：四水硫酸锰25mg/L、七水硫酸锌10mg/L、硼酸10mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.083mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L；（3）有机物：肌醇100.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、叶酸0.5mg/L、生物素0.05mg/L；（4）植物生长调节剂：6？苄基腺嘌呤0.4？1.0mg/L、萘乙酸0.2？0.5mg/L；余量为蒸馏水。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：时群，陈丽文，吴红英，陈乃明，何贵整，邓月梅，梁小娟，谭冬晓，蔡林，梁刚，谢云，
申请(专利权)人：钦州市林业科学研究所，
类型：发明
国别省市：
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