一种适宜脱毒兔眼蓝莓的高效快繁技术，其特征在于，采用外植体材料为当年生幼嫩枝，采用以下步骤获得优质脱毒苗：a、无菌苗的获得，b、丛生芽的诱导与增殖，c、叶片再生体系的建立，d、试管苗生根培养，e、炼苗；优质脱毒苗采用以下方法进行改良：f、丛生芽的诱导与增殖，g、叶片再生体系的优化，h、试管苗的瓶内生根优化，i、炼苗基质的优化。本方法从叶片再生、增殖培养、生根培养到炼苗这一系列环节进行了优化，建立了一种可高效、快速、持续获得优良的脱毒兔眼组培种苗技术。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种脱毒蓝莓高效快繁技术，具体涉及一种适宜脱毒兔眼蓝莓的高效快繁技术。
技术介绍
蓝莓属杜鹃花科越橘属(Vaccinum)，为多年生落叶或者常绿小果类灌木型果树。蓝莓果实富含花青素、不饱和脂肪酸、鞣花酸及钙、钾、锌、铁等元素，B族维生素在蓝浆果中含量尤为突出，具有很高的保健功能，被国际粮农组织列为五大健康食品之一，堪称世界水果之王，是近几年来发展最迅速的集营养与保健于一身的第3代果树品种。 兔眼蓝莓(Vaccinium ashei Reade)是越桔属中经济价值较高的一种，品质佳，口感好，其生态适应性、生长势和抗病虫性较强，无论高地还是低地、粘土或沙土上均能生长，非常适合我国南方栽培。随着引种规模日益扩大，优良种苗需求量急剧增加，种苗生产供不应求。因此，研究一种新型的脱毒适宜兔眼蓝莓高效快繁技术已为亟待解决的技术问题。
技术实现思路
针对现有技术存在的缺陷，本专利技术的目的是提出一种适宜脱毒兔眼蓝莓的高效快繁技术，组织培养凭借其无性繁殖的独特优势，可以迅速去除病毒和更新品种，保留品种的本来特性，变异性小，并且可在较小空间内和较短时间内快速地获得大量无性系脱毒组培苗，成为蓝莓脱毒和快速繁殖的主要途径，本专利技术就兔眼蓝莓建立了一种脱毒高速快繁的有效方法。本专利技术的技术方案是一种适宜脱毒兔眼蓝莓的高效快繁技术，其特征在于，采用外植体材料为当年生幼嫩枝，通过以下步骤获得脱毒试管苗a、嫩枝摘除叶片，清洗嫩枝，嫩枝切段形成单芽茎段，然后放置在培养基中培养，完成无菌苗的获得步骤，b、待单芽茎段叶芽伸长后，切下叶芽转接在改良培养基中，完成丛生芽的诱导与增殖步骤，C、取无菌苗植株上碧绿的叶片，按照不同的叶片切法、不同的培养方式、不同浓度的ZT筛选最合适的叶片，培养在改良培养基中，完成叶片再生体系的建立步骤，d、剪取苗的单芽茎段，在改良培养基中培养，从不同盐浓度、不同活性碳浓度、不同IBA浓度的培养基中筛选出最适宜生根培养基，完成试管苗生根培养步骤，e、在炼苗基质中培养，炼苗时打开培养瓶的瓶盖进行培养环境的过渡，在湿度100%的室内环境下培养，然后过渡到湿度80%、透光度70%的室外条件下，然后再逐步通风换气环境下培养，统计成活率，完成炼苗步骤；幼嫩枝采用以下步骤进行优化改良f、将获得的无菌苗转接到不同的增值培养基上进行比较，丛生芽生长速度慢，从增殖率、丛生芽长势、玉米素成本方面进行综合考虑，得到最佳的改良培养基，以完成丛生芽的诱导与增殖的改良，g、进行叶片不同部位对重生苗诱导的影响测试，按垂直叶片主脉方向将叶片切成二部分，叶片背面朝下接种于培养瓶内，统计重生率，进行不同暗培养时间对叶片重生苗诱导的影响测试，随着暗培养时间的延长，重生苗诱导频率呈增高趋势，不经暗培养直接在光照培养条件下或暗培养条件下的重生率，进行ZT浓度对诱导叶片重生苗的影响测试，测试不同浓度的ZT对叶片重生苗的诱导作用，以完成叶片再生体系的建立的改良，h、进行盐浓度对生根的影响测试，进行单个芽苗在不同盐浓度的生根培养基中的生根诱导率存在差异比对，进行活性碳和生长素对生根的影响测试，活性碳对组培苗瓶内生根具有重要影响，当培养基中无活性碳时，插入培养基中的茎基部均先长愈伤组织然后生根，由于茎根之间维管束不通，不久茎即停止生长，叶色发红脱落，苗长势差，活性碳对杰兔生根具有促进作用，以完成试管苗的瓶内生根改良，i、剪取2cm左右长的无菌苗新梢在生根培养基中生长，约45d左右苗高长至5-6cm时，生根率达95%，对生根苗移栽在5种不同基质上，统计成活率，以完成炼苗基质的优化。优选方法，步骤无菌苗的获得是以田间生长的当年生嫩枝为初始外植体，摘除叶片，用洗衣粉水溶液洗净灰尘等污物后，经自来水冲洗，转到超净工作台上，先后用75%酒精和0.1 %升汞对外植体分别进行50s与10min的表面灭菌，接着用无菌水冲洗4次，每次约2min，最后用无菌滤纸吸去外植体表面水分，将枝条切成l_2cm长的单芽茎段，WPM培养基具体改良方法以Ca (NO3) 2 · 4H20、KNO3代替原WPM培养基中的K2S04、CaCl2,在无菌条件下将单芽茎段接种于改良WPM、1. 0mg/LZT、20g/L蔗糖和9g/L日产琼脂粉的培养基(pH =5. 2)上诱导侧芽萌发，培养条件为温度25±2°C、光强2500Lx、经过光周期16h光照和8h黑暗的光周期，30d后茎段叶芽伸长约4-6cm，叶片数量达7-9枚。优选方法，步骤丛生芽的诱导与增殖是待茎段叶芽伸长后，切下转接于以改良WPM为基本培养基，加蔗糖20g/L，日产琼脂粉8. 8g/L，附加不同浓度的ZT和/或6_BA，pH值为5. 2的增殖培养基中，培养条件为温度25±2°C、光强2500Lx、经过光周期16h光照和8h黑暗的光周期。6-节氨基腺嘌呤(6-BA,英文通用名6-Benzylaminopurine)细胞分裂素，可抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解；保绿防老将氨基酸、生长素、无机盐等向处理部位调运。优选方法，步骤叶片再生体系的建立是以改良WPS、1. 0mg/LZT、20g/L蔗糖和9g/L琼脂粉pH = 5. 2为培养基，取无菌苗植株上碧绿的叶片，按不同的叶片切法、不同培养方式、不同浓度的ZT，筛选最合适的叶片再生体系，背面朝下，叶尖与叶柄分开放置，接种于培养瓶内，每瓶10片左右，每个处理组重复8-10瓶，叶片切法包括4种不同的叶片切法，4种不同的叶片切法为垂直叶片主脉切取叶片的1/2、1/3、2/3以及全叶；培养方式为暗培养时间分别为0d、7d、20d和30d，每个处理重复15-20次，暗培养温度为25 ±2°C，几种浓度ZT为0. 5,0. 8、I. I、I. 4、I. 7或2. 0，30d后观察记录叶片的出芽率与生长状况，计算诱导重生苗率=诱导重生苗形成的叶片数/接种叶片数，从而获得最佳的叶片再生体系，培养条件为温度25±2°C、光强2500Lx、经过光周期16h光照和8h黑暗的光周期。优选方法，步骤试管苗生根培养为剪取苗高约2. Ocm左右的单芽茎段，改良WPS为基本培养基，另添加蔗糖20g/L，琼脂9g/L，pH值5. 3左右，从不同盐浓度(WPS、1/2WPS、1/4WPS、1/8WPS)、不同活性炭浓度(0%,0. 05%,O. 10%,O. 15%、0. 20% )、不同 IBA 浓度(O. Img/L、0. 2mg/L、0. 4mg/L、0. 6mg/L、0. 8mg/L)的培养基中筛选出最适宜的生根培养基，培养条件为温度25±2°C、光强2500Lx、光周期16h光照/8h黑暗，炼苗时，提前3d打开瓶盖进行过渡，移栽后在组培室条件下保持湿度100%的塑料棚中培养20d，然后在湿度80 %、透光度70 %的室外条件下过渡7d再逐步通风换气，15d后，完全揭去棚膜，2周后统计成活率，炼苗时，每套基质的栽植量不少于50株,各试验的重复次数不少于3次。几种炼苗基质为草炭河沙=I : I ;草炭田土 = I : I ;草炭石英砂=2 3 : I ;草炭珍珠岩=I 2 : I ;全部采用水苔藓。卩引哚丁酸(IBA, Indole-3-Butytric acid)促进植物主根生长，提高发芽率，成活率。用本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种适宜脱毒兔眼蓝莓的高效快繁技术，其特征在于，采用外植体材料为当年生幼嫩枝，通过以下步骤获得优质脱毒苗：a、嫩枝摘除叶片，清洗嫩枝，嫩枝切段形成单芽茎段，然后放置在培养基中培养，完成无菌苗的获得步骤；b、待单芽茎段叶芽伸长后，切下叶芽转接在改良培养基中，完成丛生芽的诱导与增殖步骤，将获得的无菌苗转接到不同的增值培养基上进行比较，丛生芽生长速度慢，从增殖率、丛生芽长势、玉米素成本方面进行综合考虑，得到最佳的改良培养基，以完成丛生芽的诱导与增殖的改良；c、取无菌苗植株上碧绿的叶片，按照不同的叶片切法、不同的培养方式、不同浓度的ZT筛选最合适的叶片，培养在改良培养基中，完成叶片再生体系的建立步骤，进行叶片不同部位对重生苗诱导的影响测试，按垂直叶片主脉方向将叶片切成二部分，叶片背面朝下接种于培养瓶内，统计重生率，进行不同暗培养时间对叶片重生苗诱导的影响测试，随着暗培养时间的延长，重生苗诱导频率呈增高趋势，不经暗培养直接在光照培养条件下或暗培养条件下的重生率，进行ZT浓度对诱导叶片重生苗的影响测试，测试不同浓度的ZT对叶片重生苗的诱导作用，以完成叶片再生体系的建立的改良；d、剪取苗的单芽茎段，在改良培养基中培养，从不同盐浓度、不同活性炭浓度、不同IBA浓度的培养基中筛选出最适宜生根培养基，完成试管苗生根培养步骤，进行盐浓度对生根的影响测试，进行单个芽苗在不同盐浓度的生根培养基中的生根诱导率存在差异比对，进行活性碳和生长素对生根的影响测试，活性碳对组培苗瓶内生根具有重要影响，当培养基中无活性碳时，插入培养基中的茎基部均先长愈伤组织然后生根，由于茎根之间维管束不通，不久茎即停止生长，叶色发红脱落，苗长势差，活性炭对生根具有促进作用，以完成试管苗的瓶内生根改良；e、在炼苗基质中培养，炼苗时打开培养瓶的瓶盖进行培养环境的过渡，在湿度100％的室内环境下培养，然后过渡到湿度80％、透光度70％的室外条件下，然后再逐步通风换气环境下培养，统计成活率，完成炼苗步骤，剪取2cm左右长的无菌苗新梢在生根培养基中生长，约45d左右苗高长至5？6cm时，生根率达95％，对生根苗移栽在5种不同基质上，统计成活率，以完成炼苗基质的优化。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘如石，邱义兰，
申请(专利权)人：刘如石，
类型：发明
国别省市：
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