一种高效的兔眼蓝莓组培快繁方法技术

本发明专利技术属于植物组织培养技术领域，特别涉及一种高效的兔眼蓝莓组培快繁方法。该方法的初代诱导培养基为：改良WPM+Zt?1.0～1.5mg/L，继代增殖培养基为：改良WPM+Zt?0.5～0.8mg/L，生根培养基为：1/2改良WPM+IAA?0.1～0.2mg/L+AC?0.5g/L；将继代增殖的蓝莓无菌苗基部在100～500mg/L?IBA无菌溶液中浸5～15s后接种至蓝莓生根培养基中，生根完成后将生根组培苗培养瓶从培养室移至塑料大棚炼苗4～7d，移栽前开盖锻炼3～5d，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基质内，覆膜保湿5～7d，其间每天通风透气5～15min两次，7d后完全揭除塑料薄膜。本发明专利技术不但高效，而且成本较低，有利于规模化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养
，特别涉及。
技术介绍
蓝莓(Vacciniumspp.)属于杜胃$花科(Ericaceae)越桔属(Vaccinium)多年生落叶或常绿灌木果树。蓝莓果实具有极高的营养保健价值和经济价值，其营养价值远远高于其它水果，常被誉为“世界浆果之王”;蓝莓果实具有防止脑神经衰老、增强心脏功能、明目抗癌等独特功效，被联合国粮农组织(FAO)确定为人类五大健康食品之一。由于蓝莓独特的风味和极高的营养保健价值，其果实及产品风靡世界，供不应求，在国际市场上售价昂贵。虽然目前世界蓝莓种植规模逐年增长，但目前每年的市场缺口依然达到40万吨以上， 发展潜力巨大。近几年我国蓝莓种植面积增长很快，但是根据世界蓝莓发展规律和中国蓝莓产业发展预测，我国的蓝莓适度种植规模应在2万hm2以上，因此，存在着很大的开发空间。由于蓝莓具有极高的营养价值和独特的保健功效，发展势头强劲，常见的繁殖方法如扦插、分根等已难以满足日益增长的蓝莓苗木市场需求。为此，国内外进行了蓝莓的组织培养快速繁殖研究，已有的研究认为蓝莓组织培养以WPM基本培养基为最佳，添加一定浓度的植物生长调节物质玉米素后可获得较高的蓝莓组织培养增殖系数；但与苹果和草莓等植物的组织培养相比，蓝莓在试管内生根较慢，且生根率低。苹果和草莓一般在接种后20 天内可完成生根过程，生根率达95%以上，而蓝莓在1/2WPM添加IBA的培养基中培养20天后生根率还不到10 %，培养40天后生根率也仅30 % 70 %，有些品种在培养基中培养60 天或更长时间后才能在新梢基部生根，或者在培养基的外面长出气生根，难以建立高效的蓝莓组织培养快繁体系，从而无法实现蓝莓大规模工厂化生产。2007年11月14日公开的申请号为200710024502. 8的专利技术创造公开了一种兔眼蓝莓组织培养方法，该方法分为诱导、增殖、生根、炼苗四个阶段。其诱导阶段的培养基组分为WPM+Zt 10mg/L，增殖阶段的培养基组分为WPM+Zt 5mg/L，生根阶段的培养基为常规培养基。该方法提高了兔眼蓝莓茎的诱导和增殖，并提高了成活率。百度文库中公开了一种越橘使用的改良WPM基质组培技术(http://wenku. baidu. com/view/7f801748c850ad02de804126. html)。其诱导阶段的培养基组分为改良 WPM+Zt 2mg/L，增殖阶段的培养基组分为改良WPM+Zt lmg/L，生根阶段的培养基组分为 改良 WPM+IBA O. lmg/L。改良 WPM 即以 Ca(NO3)2 · 4H20、KNO3> C10H13FeN2NaO8 和盐酸硫胺素代替原 WPM 培养基中的 K2SO4, CaCl2, FeSO4 和 Na2_EDTA。王大平教授2009年在安徽农业科学杂志上发表了一篇名为《不同因素对兔眼蓝莓离体培养芽诱导效果的影响》的文章，其得出的结论是兔眼蓝莓离体培养芽诱导的最佳外植体为茎段，最佳培养基为改良WPM+Zt I 4mg/L，茎段在最佳培养基中的萌芽率为46.7%。2008年5月14日公开的申请号为200710157193. I的专利技术创造公开了一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物及其方法，其增殖培养基的组分为WPM+TDZ O. 2 O. 5mg/ L+IBA O. I O. 2mg/L+GA O. lmg/L。同样 2008年 5 月 14 日公开的申请号为 200710157194. 6 的专利技术创造公开了一种适宜蓝莓试管苗生根的培养基组合物及其方法，其生根培养基的组分为:1/2 改良 WPM+IBA O. 03 O. lmg/L。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。本专利技术解决所述技术问题的方案是，包括如下几个步骤步骤一从健壮兔眼蓝莓植株上获取带腋芽的蓝莓茎段外植体，外植体经常规消毒后接种于初代诱导培养基上，所述初代诱导培养基为改良WPM+Zt I. O I. 5mg/L ；步骤二 将初代诱导得到的蓝莓无菌苗的茎段或茎尖无菌接种于继代增殖培养基上进行培养，所述继代增殖培养基为改良WPM+ZtO. 5 O. 8mg/L ；步骤三将继代增殖的蓝莓无菌苗基部在100 500mg/L IBA无菌溶液中浸5 15s,随后接种至蓝莓生根培养基中，所述生根培养基为1/2改良WPM+IAA O. I O. 2mg/ L+AC O.5g/L ；步骤四将生根组培苗培养瓶从培养室移至塑料大棚炼苗4 7d，移栽前开盖锻炼3 5d，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基质内，覆膜保湿5 7d，其间每天通风透气5 15min两次，7d后完全揭除塑料薄膜，此后进行正常的栽培管理。科研人员在不断探索着蓝莓的组培快繁方法，正如
技术介绍
提到的，科研人员的研究方向集中在培养基的配方研究上，通过改变组培流程中各培养基的配方以期摸索出一种高效的蓝莓组培快繁方法。本专利技术使用改良WPM培养基比传统的WPM基本培养基更有利于蓝莓无菌苗的诱导、增殖和生长。而且玉米素(Zt)的浓度较小，由于Zt价格昂贵，较小浓度的Zt能够节约成本。经申请人反复试验发现将继代增殖的蓝莓无菌苗基部在100 500mg/L IBA无菌溶液中浸5 15s后再接种至蓝莓生根培养基中，有利于提高蓝莓无菌苗的生根率，根数较多，根系生长正常，效果优于单纯在生根培养基中直接添加IBA或IAA。添加活性炭(AC)可能模拟了植物根系的自然环境生长条件，有利于根系的发育。生根组培苗移至塑料大棚的工艺步骤和参数，也是申请人反复摸索而得。与常规蓝莓组培方法相比，使用该方法可以使兔眼蓝莓试管苗的增殖系数提高60%，试管苗的瓶内生根时间由90天缩短为30天，生根率由50 %提高到95 %，移栽成活率由40 %上升到95 %，有利于建立快速高效的兔眼蓝莓组培快繁技术体系。作为进一步的技术方案，所述步骤一、步骤二、步骤三的培养温度均为25±2°C，光照强度均为1500 2500Lx，光暗周期比均为12h 12h。稳定的环境条件，更有利于组培苗的生长。作为进一步的技术方案，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基质前，蓝莓幼苗根部用 O. I %多菌灵处理IOs ;揭除塑料薄膜后立即喷施750倍液的普力克。喷施两种不同的药剂，有利于提闻移栽成活率。作为进一步的技术方案，所述栽培基质由草炭蛭石按体积比2 I配制而成。实验证明草炭与蛭石的组合基质有利于兔眼蓝莓组培苗的生长，效果优于草炭与石英砂的组合或草炭与珍珠岩的组合。综上所述，本专利技术不但高效，而且成本较低，有利于规模化生产。具体实施例方式实施例I，共分4个步骤。步骤一从健壮兔眼蓝莓植株上获取带腋芽的蓝莓茎段外植体，外植体经常规消毒后接种于初代诱导培养基上，所述初代诱导培养基为改良WPM+Zt 1.0mg/L，培养温度为25±2°C，光照强度为1500 2500Lx，光暗周期比为12h 12h;改良WPM即以 Ca (NO3) 2 MH2CKKNO^CiciH13FeN2NaO8 和盐酸硫胺素代替原 WPM 培养基中的 K2SO4, CaCl2, FeSO4 和Na2-EDTA,其中白糖20g/L,琼脂5 8g/L，ρΗ5· 2。培养30d后，芽诱导率为90%。步骤二 将初代诱导得到的蓝莓无菌苗的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈建中，孙庆俊，张海洋，
申请(专利权)人：湖州师范学院，
类型：发明
国别省市：