一种粗皮桉的组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种粗皮桉的组培快繁方法，该方法采用粗皮桉优良家系的优良单株，对其进行伐桩萌芽，利用萌芽作为外殖体，通过带芽茎段离体诱导无菌芽，不经过愈伤组织途径，直接由茎段萌生侧芽或不定芽，经过对无菌芽的继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株。本发明专利技术的粗皮桉的组培快繁方法操作难度低、生产成本低、生根率高（90%以上），生产的组培苗成活率高，易于在大范围内推广使用，使用该方法得到的再生植株，结果稳定，重复性良好，能够大规模推广育苗，遗传性状稳定，苗木能够保持优树的优良遗传性状。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及桉树栽培
，特别是涉及一种粗皮桉的组培快繁方法。
技术介绍
桉树原产澳大利亚，是桃金娘科（Mytaceae)桉树属（Eucalyptus)、杯果木属（Angophora）、伞房属（Corymbia）3个属树种的统称。共有1039个种、亚种和变种，粗皮桉属于桉树的一个种。由于桉树生长速度快，轮伐期短，适应性广而且用途广泛，经济效益高，目前已经成为世界公认的三大人工林树种之一。我国自1890年开始引种，至今以有120多年历史。最初引种主要用于庭院种植，到1973年开始比较系统性的开展种源家系试验。1982年，中澳技术合作——东门桉树示范林项目实施，广西国有东门林场从澳大利亚、印尼等七个国家引进了174个桉树树种/种源。其中有6个树种适合东门以及华南地区生长，并进行了家系试验，粗皮桉列于其中。到1989年项目结束，六个树种引种驯化完成，其中尾叶桉、巨桉、园角桉、赤桉成功进行了人工控制授粉的杂交育种改良，获得大量生长迅速、遗传增益大、抗性强的杂种子代，随后利用无性繁殖方法，大规模推广造林。桉树引种驯化成功并改良推广种植，对中国林业的发展发挥了突出作用。据统计资料显示，到2013年，广西全区速生桉面积已达到200万公顷，广西的商品木材产量占全国商品材产量的31.6%，其中80%为速生桉，也就是说，广西桉树木材产量占全国木材总产量的四分之一。从全国来看，中国桉树人工林面积440万公顷，仅占我国森林面积总面积的2.2%，但却提供了占全国木材总产量25%的木材，桉树为缓解我国木材资源短缺和木材供需矛盾，促进林浆纸产业和人造板工业的发展，维护我国生态安全发挥了突出的作用。但随着速生桉人工林的快速发展，也出现了一些负面情况。主要表现在单纯追求经济效益的超短轮伐期利用上，造林中出现树种单一，全部为短周期工业用材林，林分单纯，全为纯林，林地生物多样性不够丰富，产品用途单一，全部用于纸浆材和人造板，实木利用的树种很少，存在森林生态功能不够强，抵抗病虫害能力弱等问题。2014年，我国已明确将生态安全列入国家安全范畴，为了森林的可持续发展，既要获得生产建设所需要的木材，还要保障生态安全。为解决这一矛盾，需要找到一个生产木材和保障生态安全的最佳结合点，在不断提高速生林效率的同时，还要提高速生林的质量。因此，发展生产周期较长，木材经济价值更高的速生林是最佳选择。粗皮桉生长迅速，木质坚实，轮伐期12-15年，在实木利用方面有尾巨桉等短周期纸浆材无可比拟的优势，由于在前期以开发短轮伐期速生林为主，片面追求木材产量和短期经济效益，粗皮桉没有受到重视，现在，推广粗皮桉正是时候。选育生长量高的家系，选择优良单株，通过无性繁育，扩大栽培面积，建成既有高经济价值，又利于生态安全，环境友好的人工林，具有显著的社会效益、经济效益和生态效益。粗皮桉引种驯化成功，适合东门和华南地区生长，但目前仅仅保存在试验林分中，数量很少，要快速推广这一树种，利用无性繁殖，特别是组培快繁方法是最有效的途径。桉树生长周期长而且遗传性状高度杂合，采用常规实生种子育苗方法,苗木造林后出现分化，而利用无性繁殖，能够保持优良基因型（优树）的遗传性状，利用组培快繁，则可以在短期内获得大量的苗木。我国在20世纪70年代开展桉树组培研究，取得一定进展。到八十年代中期，以“尾巨桉芽器官离体快繁研究”的成功为标志，桉树组织培养技术已进入成熟阶段，解决了长期困扰技术人员的几个关键问题，材料污染，选用的培养材料、培养基和瓶苗移栽等。目前桉树组培的特点之一是很重视优良无性系的外殖体材料来源，同时要求在无菌芽诱导时，不经过脱分化过程，由离体芽器官通过分生侧芽的途径直接产生丛生芽，将丛生芽切割后接种到生根培养基诱导生根小植株，这样的组培苗能够保持优树的优良遗传性状，造林后林相整齐，生长量高。而采用通过愈伤组织途径分化而成的组培苗，因为经过脱分化过程，培养的苗木容易产生变异，造林后林分出现分化，所以不适合大面积推广造林。迄今为止,已有60多种桉树的组织培养获得成功,而对于粗皮桉只有曾富华等利用粗皮桉无菌实生苗下胚轴为外殖体诱导愈伤组织,在经不定芽增值、不定芽伸长、生根及移栽,得到再生植株。目前国内外还未见有用粗皮桉优良家系的优良单株萌芽条作外殖体，不经过愈伤组织途径,直接进行组织培养快速获得大量的、遗传特性稳定的粗皮桉苗木的相关文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种采用粗皮桉优良家系的优良单株萌芽条作外殖体不经过愈伤组织途径,直接进行组织培养而快速获得大量的组培再生植株的粗皮桉的组培快繁方法，使用该方法得到的再生植株，结果稳定，重复性良好，能够大规模推广育苗，遗传性状稳定，苗木能够保持优树的优良遗传性状。为实现本专利技术的目的，采取如下技术方案：一种粗皮桉的组培快繁方法，是采用粗皮桉优良家系的优良单株，对其进行伐桩萌芽，利用萌芽作为外殖体，通过带芽茎段离体诱导无菌芽，经过对无菌芽的继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株。该方法的步骤如下：（1）在澳大利亚引种的家系试验林中，经测试对比，选择出适合本地生长的粗皮桉优良家系；（2）在粗皮桉优良家系中，通过测量胸径、树高、蓄积、连年生长量、木材材性以及干形指标，综合对比后选择出优良单株；（3）将优良单株在离地面15-20cm高度处伐倒，促萌芽，当萌芽条长到12-18cm时，剪取萌芽条，用水浸泡基部带回实验室备用；（4）萌芽条修剪去叶片、叶柄，用自来水流水冲洗3-5min,再用饱和洗衣粉溶液洗涤10min，用纯净水清洗干净；（5）在超净工作台上，将萌芽条剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木质化茎段，切成长2-3cm，保留有1-2个潜伏芽的切段做消毒材料；（6）将待消毒材料置于高压灭菌处理过的无菌瓶中，用75%酒精溶液浸泡15-17s，无菌水清洗3-5次，洗去残留酒精，再用0.1%HgCL2溶液浸泡并适当搅拌，7-9min后倒去HgCL2溶液至专用收集罐中，用无菌水清洗材料5-6次；（7）用镊子夹取清洗好的茎段，放置在灭菌的接种碟上，用灭菌过的滤纸吸干表面水分，切去叶柄和茎段的两端，接种到无菌芽诱导培养基上，全暗培养8-12天后，在温度26±2℃，光照12h/d,光照强度1500-2000lux条件下培养15-25天；（8）外殖体萌芽后，侧芽和不定芽不断生长，萌芽15-20天后，选取没有污染的无菌芽，切割后转入继代增殖培养基上，在温度26±2℃，光照强度2000-2500lux条件下，培养18-23天，以促进丛芽增殖和生长，在增殖培养基上反复继代培养，无菌芽苗数量不断增多；（9）当继代培养的芽苗长到2-3cm，并有3-4对叶片时，切取芽苗转入生根培养基上培养，温度28-30℃，光照强度1200-1500lux，培养6-10天，当切口冒出短根或根点，出根率达到60-70%时，移瓶至温度28-35℃，光照强度3000-5000lux的自然光下培养15-20天；（10）生根齐全，苗高3-4cm的生根瓶苗，洗去琼脂，移栽至用KMn本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种粗皮桉的组培快繁方法，其特征在于：采用粗皮桉优良家系的优良单株，对其进行伐桩萌芽，利用萌芽作为外殖体，通过带芽茎段离体诱导无菌芽，经过对无菌芽的继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株。

【技术特征摘要】
1.一种粗皮桉的组培快繁方法，其特征在于：采用粗皮桉优良家系的优良单株，对其进行伐桩萌芽，利用萌芽作为外殖体，通过带芽茎段离体诱导无菌芽，经过对无菌芽的继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株。
2.根据权利要求1所述的粗皮桉的组培快繁方法，其特征在于，该方法步骤如下：
（1）在澳大利亚引种的家系试验林中，经测试对比，选择出适合本地生长的粗皮桉优良家系；
（2）在粗皮桉优良家系中，通过测量胸径、树高、蓄积、连年生长量、木材材性以及干形指标，综合对比后选择出优良单株；
（3）将优良单株在离地面15-20cm高度处伐倒，促萌芽，当萌芽条长到12-18cm时，剪取萌芽条，用水浸泡基部带回实验室备用；
（4）萌芽条修剪去叶片、叶柄，用自来水流水冲洗3-5min,再用饱和洗衣粉溶液洗涤10min，用纯净水清洗干净；
（5）在超净工作台上，将萌芽条剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木质化茎段，切成长2-3cm，保留有1-2个潜伏芽的切段做消毒材料；
（6）将待消毒材料置于高压灭菌处理过的无菌瓶中，用75%酒精溶液浸泡15-17s，无菌水清洗3-5次，洗去残留酒精，再用0.1%HgCL2溶液浸泡并适当搅拌，7-9min后倒去HgCL2溶液至专用收集罐中，用无菌水清洗材料5-6次；
（7）用镊子夹取清洗好的茎段，放置在灭菌的接种碟上，用灭菌过的滤纸吸干表面水分，切去叶柄和茎段的两端，接种到无菌芽诱导培养基上，全暗培养8-12天后，在温度26±2℃，光照12h/d,光照强度1500-2000lux条件下培养15-25天；
（8）外殖体萌芽后，侧芽和不定芽不断生长，萌芽15-20天后，选取没有污染的无菌芽，切割后转入继代增殖培养基上，在温度26±2℃，光照强度2000-2500lux条件下，培养18-23天，以促进丛芽增殖和生长，...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐再生，苏勇，莫继有，李丽芳，石前，梁庭辉，黎怀玲，熊涛，张磊，王建忠，陈东林，梁秀莉，兰俊，
申请(专利权)人：广西壮族自治区国有东门林场，
类型：发明
国别省市：广西;45