一种桉树良种尾赤桉DH191‑4的组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种桉树良种尾赤桉DH191‑4的组培快繁方法，该方法采用DH191‑4无性系的优良单株，对其进行伐桩环割促萌，以萌芽条带潜伏芽的茎段作为外殖体，离体诱导无菌芽，不经过愈伤组织，而是直接由外植体茎段萌生侧芽或不定芽，对无菌芽进行继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株。本发明专利技术以桉树良种无性系DH191‑4为繁殖对象，以芽器官离体诱导无菌芽方式直接成苗，再生植株能完整保持优树的优良遗传性状，不易发生变异，该方法操作难度低，生产成本低，苗木出根率高，移栽成活率高，获得的再生植株大田种植后能健壮生长，造林成活率95%以上,并能保持优树的优良遗传性状，可以大规模工厂化育苗。

【技术实现步骤摘要】
一种桉树良种尾赤桉DH191-4的组培快繁方法
本专利技术涉及桉树栽培
，特别是涉及一种桉树良种尾赤桉DH191-4的组培快繁方法。
技术介绍
桉树原产澳大利亚，是桃金娘科（Mytaceae)桉树属（Eucalyptus)、杯果木属（Angophora）、伞房属（Corymbia）3个属树种的统称。共有1039个种、亚种和变种，其中桉树属树种多达945种，地理分布跨度大，表现差异也大。在世界上100多个国家引种栽培，均表现出适应性强、生长快、产量高、轮伐期短等优良性状。因其具有速生、丰产、抗性好、耐瘠薄、干形好和用途广泛而被世界各国广泛种植,是世界公认的三大人工林树种之一。中国引种桉树已经有100多年历史，到上世纪八十年代中澳技术合作东门桉树示范林项目开展以后，开始大面积发展桉树人工林，中澳技术合作——东门桉树示范林项目实施，是广西国有东门林场从澳大利亚、印度尼西亚等七个国家，引进了174个桉树树种/种源，经过科学的引种栽培试验、测定、分析后，确定尾叶桉、巨桉、赤桉、园角桉、粗皮桉、大花序桉这6个树种适合中国华南地区生长。随后，对引种成功的尾叶桉、巨桉、赤桉、园角桉进行人工控制授粉，通过杂交育种对遗传基础进行改良，并获得大量遗传增益高、抗逆性强、生长量突出的杂交子代，并建成亚洲最大的桉树种质资源基因库。现在东门林场是国家桉树良种基地、广西桉树良种培育中心、全国特色种苗基地。现主要产区为广西、广东和海南等省区，有“中国桉树看广西，广西桉树出东门”之说。由于桉树是异花授粉的多年生木本植物，容易天然杂交，产生的子代繁育后，性状发生严重的分离，用有性繁殖方法难以保持其优良特性，采用传统的扦插、嫁接等无性繁殖方法繁育苗木，常常因为优树材料来源不足，繁殖季节和育苗环境受到限制，育苗成本高等因素，制约了推广应用的速度。采用组培快繁技术繁育桉树良种，既能保持优树的遗传特性，又能达到快速繁殖的目的，是生产桉树优良无性系广泛采用的方法。1989年，尾叶桉×巨桉杂交子代经组培繁育成功，并规模推广造林。桉树引种成功并经杂交改良后推广种植，对中国林业的发展起到了突出的作用。据统计，到2013年，中国桉树人工林面积440万公顷，仅占我国森林总面积的2.2%，但提供的木材占全国木材产量的25%，因为桉树人工林生产木材的能力是天然杂木林的4-10倍，所以，有了桉树人工林，也就大大减少了对天然林砍伐的压力，因此，桉树为缓解我国木材资源的短缺和供需矛盾，为维护我国生态安全方面发挥了突出的作用。由于现在推广种植的尾巨桉，耐寒性有限，适生范围较小，造林地面积的扩大受到制约，为了获得更多生产建设所需要的木材，有两个途径，一是培育抗寒桉树品种，促成桉树向北发展，以扩大造林面积，二是培育高产品种，提高速丰林单位面积的木材产量，以达到在有限的土地上产生更多的木材。东门林场选育的尾赤桉良种无性系DH191-4，兼具速生丰产性和耐寒性两个优良品质，它是由尾叶桉和赤桉通过人工控制授粉杂交的子代，从F1代选优获得优树，经无性繁育成的无性系。母本U48是东门林场从印度尼西亚，海拔515m的弗洛雷斯岛引进的尾叶桉纯种U48，通过在广西东门林场的驯化选优，获得的稳定尾叶桉纯种，具有干形通直、速生、冠幅大、抗病力强、配合力高等优点。尾叶桉原产印度尼西亚，具有较好的速生丰产性，生长快，产量高，但是耐寒性较差，父本CM是广西国有东门林场用系谱法定向多代自交纯化选育而成的稳定自交系赤桉纯种优良个体，具有干形通直、速生、抗寒、抗病力强、配合力高等优点。所以，以尾叶桉为母本，赤桉为父本，杂交选育的尾赤桉DH191-4，丰产性和抗寒性都比较突出。在区域性造林推广试验中，在广西高海拔山地，4.1年生DH191-4林分平均胸径13.4cm，平均树高17.9m，保存率达92%，蓄积生长量194.9m3/hm2，年均蓄积生长量47.5m3/hm2，高于对照品种DH32-26(广西主要使用的桉树生产品种)，达极显著水平；在广东沿海地区，4.1年生DH191-4林分平均胸径10.5cm，平均树高15.6m，保存率达89%，蓄积生长量161.0m3/hm2，年均蓄积生长量39.3m3/hm2，是对照品种LH1(广东主要使用的桉树生产品种)的1.3倍（29.9m3/hm2），达极显著水平。另外，DH191-4干形通直，出材率高，木材材质好，纹理直。因为上述优良特性，广西林木品种审定委员会在2013年，经专家鉴定后，授予广西林木良种，良种编号：桂S-SC-EUC-011-2013。要实现快速成规模推广DH191-4这一桉树良种，利用组培快繁技术是最有效的途径。东门林场在1992年建立组培厂，至今已成功繁育一百多个桉树优良无性系，培育组培苗近十亿株。因为采用芽器官离体诱导无菌芽的方式，非愈伤组织成苗途径，所以组培苗能够完整保持优树的优良特性，不易发生变异，造林后林相整齐，生长量高，采用同样的方法研究DH191-4的组培快繁技术，取得了成功。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对以上技术的不足，提供一种快速获得大量遗传性状一致，能完整保持母树优良性状的再生植株，使用该方法得到的再生植株，结果稳定，重复性良好的尾赤桉DH191-4的组培再生方法。本专利技术的技术方案是这样实现的：一种桉树良种尾赤桉DH191-4的组培快繁方法，是采用尾赤桉DH191-4原株繁育的扦插苗无性系林分中的优良单株，对其进行伐桩或环割促萌，利用近根茎处的萌芽条，不经过愈伤组织途径,直接由芽器官离体诱导无菌芽进行组织培养，经过对无菌芽的继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，快速获得大量的再生植株的组培快繁方法，使用该方法得到的无菌繁殖体系，生长稳定，重复性良好，可反复多代规模扩繁，用无菌芽作生根培养，总的生根率达到95%以上，已具备推广价值，生根小苗移植后成活率高达80%，苗木生长正常，再生植株大田种植后，生长健壮整齐，能保持优树的优良遗传性状。该方法的步骤如下：（1）在尾赤桉良种DH191-4无性系试验林中，通过测量胸径、树高、蓄积、连年生长量、木材材性以及干形指标，综合对比后选择出优良单株。（2）将DH191-4优树原株在离地面10-15cm高度处伐倒，促萌芽，当萌芽条长至10-15cm时，剪取萌芽条，用水浸泡基部，带回实验室备用。（3）萌芽条修剪去叶片，用自来水流水冲洗3-5min，再用饱和洗衣粉溶液洗涤10min，再用纯净水清洗干净。（4）在超净工作台上，将萌芽条剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木质化茎段，切成长2-3cm，保留有1-2个潜伏芽的切段做待灭活材料。（5）将待灭活材料置于高压灭菌处理过的无菌瓶中，用体积分数为75%的酒精溶液浸泡15-17s，无菌水清洗3-5次，洗去残留酒精，再用质量分数为0.1%HgCL2溶液浸泡，并适当搅拌，7-9min后倒去HgCL2溶液至专用收集罐中，用无菌水清洗材料5-6次，洗去残留在材料表面的HgCL2溶液。（6）用灭菌后的镊子夹取清洗好的茎段，放置在灭菌的接种碟上，用无菌滤纸吸干附着在材料表面水分后，切去叶柄和茎段的两端，接种到无菌芽诱导培养基上，每瓶接种一支外植体，全暗培养8-12d，温度26±2℃，腋芽开始萌动并不断生长，转入光照条件下培养15-20d，光照时间12h/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种桉树良种尾赤桉DH191‑4的组培快繁方法，其特征在于：采用广西壮族自治区林木品种审定委员会审定的桉树良种尾赤桉DH191‑4无性系原株，伐倒或环割促萌后，以萌芽条带潜伏芽的茎段作为外殖体，通过带芽茎段离体诱导无菌芽，经过对无菌芽的继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株。

【技术特征摘要】
1.一种桉树良种尾赤桉DH191-4的组培快繁方法，其特征在于：采用广西壮族自治区林木品种审定委员会审定的桉树良种尾赤桉DH191-4无性系原株，伐倒或环割促萌后，以萌芽条带潜伏芽的茎段作为外殖体，通过带芽茎段离体诱导无菌芽，经过对无菌芽的继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株。2.根据权利要求1所述的桉树良种尾赤桉DH191-4的组培快繁方法，其特征在于：所述方法具体步骤如下：（1）在桉树良种尾赤桉DH191-4无性系试验林中，选出优树原株；（2）将DH191-4优树原株在离地面10-15cm高度处伐倒或环割，促萌芽，当萌芽条长至10-15cm时，剪取萌芽条，用水浸泡基部，带回实验室备用；（3）萌芽条修剪去叶片，用自来水流水冲洗30min，再用饱和洗衣粉溶液洗涤10min，用纯净水清洗干净；（4）在超净工作台上，将萌芽条剪去嫩梢段和基部老化部分，切取长2-3cm，保留有1-2个潜伏芽的切段做表面灭活材料；（5）将待灭活材料置于高压灭菌处理过的无菌瓶中，用体积分数为75%的酒精溶液浸泡15-17s，无菌水清洗3-5次，洗去残留酒精，再用质量分数为0.1%HgCL2溶液浸泡，并适当搅拌，7-9min后倒去HgCL2溶液至专用收集罐中，用无菌水清洗材料5-6次，洗去残留在材料表面的HgCL2溶液；（6）用灭菌后的镊子夹取清洗好的茎段，放置在灭菌的接种碟上，用无菌滤纸吸干附着在材料表面水分后，切去叶柄和茎段的两端，接种到无菌芽诱导培养基上，每瓶接种一支外植体，全暗培养8-12d，温度26±2℃，腋芽开始萌动并不断生长，转入光照条件下培养15-20d，光照时间12h/d，光照强度1500-2000lux，培养温度26±2℃；（7）外殖体萌芽后，侧芽和不定芽大量生长，选取没有污染的无菌芽，切割后转入继代增殖培养基上培养18-23天；培养条件：温度26±2℃，光照强度2000-2500lux；（8）选取芽苗长2-3cm，并有3-4个节的继代芽苗，切成长1.5-1.8cm的单芽，插入生根培养基上培养，每瓶接种25株，培养条件：温度28-30℃，光照强度1200-1500lux；培养6-10天后，待切口冒出短根或根点，出根率达到60%时，移瓶至温度28-35℃，光照强度3000-5000lux的自然光下继续培养15-20天；待生根瓶苗高达3.0-4.5cm，叶...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐再生，李丽芳，张磊，王建忠，熊涛，邱炳发，陈德文，莫继有，兰俊，黎怀玲，陈东林，陈远龙，沈云，吴兵，庞贞武，黄全东，梁秀莉，韦炳俭，吴满芬，俸荣娣，
申请(专利权)人：广西壮族自治区国有东门林场，
类型：发明
国别省市：广西,45