促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法技术

本发明专利技术公开了一种促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法，包括如下步骤：在罗汉果组培过程中和罗汉果栽培过程中，施加浓度50‑400μmol/L的茉莉酸甲酯，以促进罗汉果UGT71V1基因的表达。本发明专利技术通过在罗汉果组培苗和栽培罗汉果施加茉莉酸甲酯，短期内快速诱导罗汉果甜苷V生物合成途径中关键酶基因UGT71V1的高表达，为促进罗汉果甜苷V含量的积累打下坚实基础；本发明专利技术操作简便，成本低，对环境友好，适于规模化生产，具有较强的实用性和推广价值。

Method for promoting the expression of UGT71V1 gene in grosvenor momordica fruit

The invention discloses a method for promoting the expression of Mogroside UGT71V1 gene, which comprises the following steps: in siraitiagrosvenorii and Mangosteen cultivation process, MeJA applied 50 concentration 400 mol/L, promote the expression of UGT71V1 gene in Siraitia grosvenorii. The present invention by applying methyl jasmonate in siraitiagrosvenorii seedling and cultivation of Momordica grosvenori, high expression of key enzymes in the short term rapid induction of Mogroside V biosynthesis gene UGT71V1, a solid foundation for the promotion of Mogroside V accumulation lay; the invention has the advantages of simple operation, low cost, environmentally friendly, and is suitable for large-scale production and has strong practicability and popularization value.

【技术实现步骤摘要】
促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法
本专利技术属于植物生物
，涉及一种促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法。
技术介绍
罗汉果甜苷V属于葫芦烷型四环三萜类物质，申请人前期根据罗汉果转录组数据，已推导出甜苷V可能的生物合成途径。罗汉果甜苷V生物合成的前体物质是异戊烯二磷酸(IPP)和3,3-二甲基烯内基焦磷酸(DMAPP)，二者是通过甲羟戊酸(MVA)和甲基赤藓糖醇磷酸化(MEP)两条途径形成，MVA途径发生在胞质中，MEP途径发生在质体中。来源于上述两途径的IPP或DMAPP经牻牛儿基焦磷酸合酶(GPS)催化形成牻牛儿基焦磷酸(GPP)，IPP与GPP在法呢基焦磷酸合酶(FPS)的催化作用下进而形成法呢基焦磷酸(FPP)，然后经角鲨烯合酶(SS)、角鲨烯环氧化酶(SE)的催化形成2,3-氧化角鲨烯，葫芦二烯醇合酶(CS)进一步催化形成葫芦二烯醇，最后在CYP450酶和葡萄糖基转移酶(UGT)的作用下，形成罗汉果甜苷V。异戊二烯类物质的产生受到限速酶活性的严格调控，一直被认为在其生物合成途径中起着重要的调控作用。作为异戊二烯途径中的限速酶，UGT基因的表达对罗汉果甜苷V的生物合成起着决定性作用。过表达UGT基因，可以促进罗汉果甜苷V的积累；相反，如果抑制UGT基因的表达，罗汉果甜苷V的产量将显著降低。然，UGT基因是个超基因家族，申请人前期研究发现，UGT71V1可能参与罗汉果甜苷V的合成途径。现有技术中未见有促进罗汉果UGT71V1基因表达的报道。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法。为此，本专利技术提供的技术方案为：一种促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法，包括如下步骤：在罗汉果组培过程中和罗汉果栽培过程中，施加浓度50-400μmol/L的茉莉酸甲酯，以促进罗汉果UGT71V1基因的表达。优选的是，所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法中，所述罗汉果组培过程中，将所述茉莉酸甲酯添加到所述罗汉果组培过程中的固体培养基中。优选的是，所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法中，所述罗汉果栽培过程中，于罗汉果授粉后20～30天后，向罗汉果表面喷洒所述浓度50-400μmol/L的茉莉酸甲酯至其表面滴水为止，每天于早上、中午和晚上各喷洒一次，连续喷施5天。优选的是，所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法中，所述罗汉果组培过程中所述固体培养基包含：MS，1.5mg/L6-BA，0.3mg/LIBA，3.5g/L琼脂，30g/l蔗糖和1.0g/L活性炭。优选的是，所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法中，所述罗汉果组培过程中的培养条件为：于相对湿度60-66％，光照强度1400lux，光照时间8h/d和温度21～25℃条件下培养30d。优选的是，所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法，还包括：茉莉酸母液配制：用2％(v/v)的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯，配制成10000μmol/L的母液，并用0.22μm的微孔滤膜灭菌，得到灭菌后的茉莉酸甲酯母液；将该茉莉酸甲酯母液添加到罗汉果组培过程中的固体培养基中，至茉莉酸甲酯的终浓度为50-400μmol/L；用乙醇助溶，将茉莉酸甲酯母液配成50-400μmol/L的溶液，施加于所述罗汉果栽培过程中。优选的是，所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法中，还包括如下步骤：qRT-PCR检测UGT71V1基因的表达：1)采集罗汉果果实，切成2-4mm小块并分别用锡箔纸包好，立即置于液氮中速冻，保存于-80℃备用；2)采用Trizol法提取罗汉果果实总RNA；3)将RNA反转录为cDNA；4)采用ABI7500实时荧光定量PCR仪检测UGT71V1基因的表达量，其中，扩增UGT71V1的引物序列为：上游引物CCGGAATTCCACCACCACCACCACCACATGAAGAAGTTTGAGCTAGTTTCA，下游引物CGGAATTCTTACTCTCCTCCTTCTGGCCCG，内参基因用UBQ5基因，扩增引物序列为：上游引物ATAAAAGACCCAGCACCACATTC，下游引物CCCTTGCCGACTACAACATCC。优选的是，所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法中，还包括：所述罗汉果栽培过程中，向罗汉果表面喷洒的茉莉酸甲酯的温度为8～12℃，同时，还采用注射的方式将茉莉酸甲酯注射入罗汉果植株的主茎中，注射量为6～15ml，注射的速率为3～5ml/h。本专利技术至少包括以下有益效果：(1)本专利技术通过在罗汉果组培苗和栽培罗汉果施加茉莉酸甲酯，短期内快速诱导罗汉果甜苷V生物合成途径中关键酶基因UGT71V1的高表达，为促进罗汉果甜苷V含量的积累打下坚实基础；(2)本专利技术操作简便，成本低，对环境友好，适于规模化生产，具有较强的实用性和推广价值。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。本专利技术提供一种促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法，包括如下步骤：在罗汉果组培过程中和罗汉果栽培过程中，施加浓度50-400μmol/L的茉莉酸甲酯，以促进罗汉果UGT71V1基因的表达。在本专利技术的其中一个实施例中，作为优选，所述罗汉果组培过程中，将所述茉莉酸甲酯添加到所述罗汉果组培过程中的固体培养基中。在上述方案中，作为优选，所述罗汉果组培过程中所述固体培养基包含：MS，1.5mg/L6-BA，0.3mg/LIBA，3.5g/L琼脂，30g/l蔗糖和1.0g/L活性炭。在本专利技术的其中一个实施例中，作为优选，所述罗汉果栽培过程中，于罗汉果授粉后20～30天后，向罗汉果表面喷洒所述浓度50-400μmol/L的茉莉酸甲酯至其表面滴水为止，每天于早上、中午和晚上各喷洒一次，连续喷施5天。在本专利技术的其中一个实施例中，作为优选，所述罗汉果组培过程中的培养条件为：于相对湿度60-66％，光照强度1400lux，光照时间8h/d和温度21～25℃条件下培养30d。在本专利技术的其中一个实施例中，作为优选，还包括：茉莉酸母液配制：用2％(v/v)的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯，配制成10000μmol/L的母液，并用0.22μm的微孔滤膜灭菌，得到灭菌后的茉莉酸甲酯母液；将该茉莉酸甲酯母液添加到罗汉果组培过程中的固体培养基中，至茉莉酸甲酯的终浓度为50-400μmol/L；用乙醇助溶，将茉莉酸甲酯母液配成50-400μmol/L的溶液，施加于所述罗汉果栽培过程中。在本专利技术的其中一个实施例中，作为优选，还包括如下步骤：qRT-PCR检测UGT71V1基因的表达：1)采集罗汉果果实，切成2-4mm小块并分别用锡箔纸包好，立即置于液氮中速冻，保存于-80℃备用；2)采用Trizol法提取罗汉果果实总RNA；3)将RNA反转录为cDNA；4)采用ABI7500实时荧光定量PCR仪检测U本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法，其特征在于，包括如下步骤：在罗汉果组培过程中和罗汉果栽培过程中，施加浓度50‑400μmol/L的茉莉酸甲酯，以促进罗汉果UGT71V1基因的表达。

【技术特征摘要】
1.一种促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法，其特征在于，包括如下步骤：在罗汉果组培过程中和罗汉果栽培过程中，施加浓度50-400μmol/L的茉莉酸甲酯，以促进罗汉果UGT71V1基因的表达。2.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法，其特征在于，所述罗汉果组培过程中，将所述茉莉酸甲酯添加到所述罗汉果组培过程中的固体培养基中。3.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法，其特征在于，所述罗汉果栽培过程中，于罗汉果授粉后20～30天后，向罗汉果表面喷洒所述浓度50-400μmol/L的茉莉酸甲酯至其表面滴水为止，每天于早上、中午和晚上各喷洒一次，连续喷施5天。4.如权利要求2所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法，其特征在于，所述罗汉果组培过程中所述固体培养基包含：MS，1.5mg/L6-BA，0.3mg/LIBA，3.5g/L琼脂，30g/l蔗糖和1.0g/L活性炭。5.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法，其特征在于，所述罗汉果组培过程中的培养条件为：于相对湿度60-66％，光照强度1400lux，光照时间8h/d和温度21～25℃条件下培养30d。6.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT71V1基因表达的方法，其特征在于，还包括：茉莉酸母液配制：用2％(v/v)的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯，配制成10000μmol/L的母液，并用0.22μm的微孔滤膜灭菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦荣昌，黄小华，
申请(专利权)人：韦荣昌，
类型：发明
国别省市：广西,45