促进罗汉果UGT6基因表达的方法技术

本发明专利技术提供了一种促进罗汉果UGT6基因表达的方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L的培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、在栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗过程中，施加茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L的乙醇溶液。本发明专利技术通过在将罗汉果组培苗置于含有茉莉酸甲酯的培养基中培养和栽培罗汉果过程中施加茉莉酸甲酯，短期内快速诱导罗汉果甜苷V生物合成途径中关键酶基因UGT6的高表达，从而促进罗汉果甜苷V的生物合成。

【技术实现步骤摘要】
促进罗汉果UGT6基因表达的方法
本专利技术涉及植物生物
，更具体地说涉及一种促进罗汉果UGT6基因表达的方法。
技术介绍
罗汉果甜苷V属于葫芦烷型四环三萜类物质，本课题组前期根据罗汉果转录组数据，已推导出甜苷V可能的生物合成途径。罗汉果甜苷V生物合成的前体物质是异戊烯二磷酸(IPP)和3,3-二甲基烯内基焦磷酸(DMAPP)，二者是通过甲羟戊酸(MVA)和甲基赤藓糖醇磷酸化(MEP)量条途径形成，MVA途径发生在胞质中，MEP途径发生在质体中。来源于上述量途径的IPP或DMAPP经牻牛儿基焦磷酸合酶(GPS)催化形成牻牛儿基焦磷酸(GPP)，IPP与GPP在法呢基焦磷酸合酶(FPS)的催化作用下进而形成法呢基焦磷酸(FPP)，然后经角鲨烯合酶(SS)、角鲨烯环氧化酶(SE)的催化形成2,3-氧化角鲨烯，葫芦二烯醇合酶(CS)进一步催化形成葫芦二烯醇，最后在CYP450酶和葡萄糖基转移酶(UGT)的作用下，形成罗汉果甜苷V。异戊二烯类物质的产生受到限速酶活性的严格调控，一直被认为在其生物合成途径中起着重要的调控作用。作为异戊二烯途径中的限速酶，UGT基因的表达对罗汉果甜苷V的生物合成起着决定性作用。过表达UGT基因，可以促进罗汉果甜苷V的积累；相反，如果抑制UGT基因的表达，罗汉果甜苷V的产量将显著降低。然而，UGT基因是个超基因家族，本课题组前期研究发现，UGT6可能参与罗汉果甜苷V的合成途径。现有技术中未见有促进罗汉果UGT6基因表达的报道。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种促进罗汉果UGT6基因的表达方法，其通过含有茉莉酸甲酯的培养基培养，并在栽培过程中喷洒含有茉莉酸甲酯的乙醇溶液，可促进罗汉果中UGT6基因的表达，从而促进罗汉果甜苷V的生物合成，提高其产量。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种促进罗汉果UGT6基因表达的方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L的培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、在栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗过程中，施加茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L的乙醇溶液。优选的是，所述的促进罗汉果UGT6基因表达的方法，步骤一中培养基还包括：MS、1～2mg/L的6-BA、0.2～0.5mg/L的IBA、3～4g/L的琼脂、20～40g/L的蔗糖、0.5～2g/L的活性炭。优选的是，所述的促进罗汉果UGT6基因表达的方法，步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为60～66％，光照强度为1200～1500lux，光照时间为8h/d，温度为23±2℃条件下培养30d。优选的是，所述的促进罗汉果UGT6基因表达的方法，步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后20～30d后，每天喷洒三次茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L的乙醇溶液，每株每次喷洒200～300g，连续喷洒5d。优选的是，所述的促进罗汉果UGT6基因表达的方法，步骤一中罗汉果置于培养基中培养时同时喷洒温度为40～50℃的杀菌液，得到罗汉果幼苗；所述杀菌液由以下重量份原料组成：蛇床子素0.1～0.5份、秦皮乙素0.1～0.5份、武夷菌素0.05～0.1份、春雷霉素0.05～0.1份、井冈霉素0.01～0.05份、木醋液20～30份、聚六亚甲基胍0.1～0.5份、水50～100份、黄连素0.01～0.05份、苯甲酸钠0.1～0.5份、甲磺酸1～2份、辛菌胺0.1～0.5份、溶菌酶1～2份、溶壁酶2～3份、黄芪多糖0.1～0.5份、植物提取液1～2份；其中，植物提取液的制备方法为：将重量份为5～10份的槐根、8～10份的千金藤、5～10份的土木香，用质量分数为70％的乙醇溶液提取量次，得到浸膏，加入重量份为1～5份的蜂蜜，兑重量份为50～100份的水，即得植物提取液。优选的是，所述的促进罗汉果UGT6基因表达的方法，步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后10～20d之间，每5d天采用注射的方式将茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L的乙醇溶液在注射入罗汉果植株的主茎中，每次注射量为1～3ml。优选的是，所述的促进罗汉果UGT6基因表达的方法，步骤一中培养基还含有保水剂与核桃壳粉，每升培养基含保水剂与核桃壳粉的重量为30～50g，所述保水剂与核桃壳粉质量比为5:0.1～0.5，所述保水剂由质量比为1:0.1～0.3的聚丙烯酸钾和沸石粉组成。优选的是，所述的促进罗汉果UGT6基因表达的方法，步骤二中在罗汉果栽培前，在待栽培土壤表面按1000～2000kg/亩施加营养土，并翻耕均匀；所述营养土的制备方法包括以下步骤：A、取重量份为10～20份的泥炭、1～2份的河沙、1～2份的珍珠岩、2～5份的硅藻土混合，向其中加入重量份为30～40份的水、1～2份的碳酸钠、1～2份的氢氧化钠、2～3份的磷酸钠，于温度为40～80℃下搅拌4～8h，冷却至室温，然后再加入重量份为0.1～0.5份的硫酸铝、0.5～1份的聚丙酰胺、1～2份的聚丙烯酸钠，调节pH为1～2，继续搅拌1～2h，过滤，烘干，粉碎至200～500目，得到第一混合物；B、将重量份1～2份的聚乙二醇、0.5～1份的聚乙烯醇、15～20份的水于温度为85～100℃下搅拌溶解，得到第一混合液；C、将第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸混合均匀，然后表面均匀喷洒第一混合液即得营养土；其中，第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸、第一混合液的质量比为20:5～10:0.1～0.5:0.5～1:2～5:1～2:0.1～0.5:0.1～0.2:1～2:0.05～0.1。本专利技术至少包括以下有益效果：1、本专利技术通过在将罗汉果组培苗置于含有茉莉酸甲酯的培养基中培养和栽培罗汉果过程中施加茉莉酸甲酯，短期内快速诱导罗汉果甜苷V生物合成途径中关键酶基因UGT6的高表达，从而促进罗汉果甜苷V的生物合成，为提高罗汉果甜苷V含量的积累打下坚实基础。2、在罗汉果授粉后通过注射方式向罗汉果植株注射茉莉酸甲酯溶液，以注射方式通过一定压力把茉莉酸甲酯溶液压到植株的各个部位，使罗汉果植株在短时间内吸收茉莉酸甲酯溶液，短期内加快UGT6的高表达，从而促进罗汉果甜苷V含量的提高。3、在罗汉果置于培养基中培养时同时喷洒杀菌液，杀菌液中的蛇床子素、秦皮乙素、武夷菌素、春雷霉素、井冈霉素、溶菌酶、溶壁酶可与病毒结合后能使病毒、真菌失活；其中木醋液具有杀菌、促进植物生长等作用；杀菌液中的植物提取液可以防止培养环境中的细菌、病毒和真菌影响罗汉果组培苗的生长，提高罗汉果果实中甜苷V的含量，也能降低对培养环境的要求。4、本专利技术的培养基中还含有保水剂和核桃壳粉，保水剂培养基没有凝固时，能吸收培养基中的有效成分，保水剂中的沸石和核桃壳粉具有微孔结构，也能吸附很多培养基中的有效成分，这样能有效地保持营养成分，使营养成分的分布比较均匀，被保水剂和核桃壳粉吸收和吸附的营养成分能缓慢释放出来，有利于培养物长效地吸收有效成分，从而能促进罗汉果组培苗的生长，有利于提高罗汉果甜苷V的含量。5、本专利技术在罗汉果栽培本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种促进罗汉果UGT6基因表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L的培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、在栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗过程中，施加茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L的乙醇溶液。

【技术特征摘要】
1.一种促进罗汉果UGT6基因表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L的培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、在栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗过程中，施加茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L的乙醇溶液。2.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT6基因表达的方法，其特征在于，步骤一中培养基还包括：MS、1～2mg/L的6-BA、0.2～0.5mg/L的IBA、3～4g/L的琼脂、20～40g/L的蔗糖、0.5～2g/L的活性炭。3.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT6基因表达的方法，其特征在于，步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为60～66％，光照强度为1200～1500lux，光照时间为8h/d，温度为23±2℃条件下培养30d。4.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT6基因表达的方法，其特征在于，步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后20～30d后，每天喷洒三次茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L的乙醇溶液，每株每次喷洒200～300g，连续喷洒5d。5.如权利要求1所述的促进罗汉果UGT6基因表达的方法，其特征在于，步骤一中罗汉果置于培养基中培养时同时喷洒温度为40～50℃的杀菌液，得到罗汉果幼苗；所述杀菌液由以下重量份原料组成：蛇床子素0.1～0.5份、秦皮乙素0.1～0.5份、武夷菌素0.05～0.1份、春雷霉素0.05～0.1份、井冈霉素0.01～0.05份、木醋液20～30份、聚六亚甲基胍0.1～0.5份、水50～100份、黄连素0.01～0.05份、苯甲酸钠0.1～0.5份、甲磺酸1～2份、辛菌胺0.1～0.5份、溶菌酶1～2份、溶壁酶2～3份、黄芪多糖0.1～0.5份、植物提取液1～2份；其中，植物提取液的制备方法为：将重量份为5～10份的槐根、8～10份的千金藤、5～10份的土木香，用质量分数为70％的乙醇溶液提取量次，得到浸膏，加入重量份为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦荣昌，黄小华，
申请(专利权)人：韦荣昌，
类型：发明
国别省市：广西,45