一种桉树良种尾赤桉DH191‑7的组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种桉树良种尾赤桉DH191‑7的组培快繁方法，该方法采用DH191‑7无性系优树，对其进行伐桩萌芽，以萌芽条带潜伏芽的茎段作为外殖体，离体诱导无菌芽，不经过愈伤组织途径，由茎段直接萌生侧芽，无菌芽经继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽等环节后，获得再生植株。本发明专利技术以桉树良种为繁殖对象，以芽器官离体诱导无菌芽方式直接成苗，再生植株能完整保持优树的优良遗传性状，不易发生变异，该方法操作难度低，生产成本低，苗木出根率高，移栽成活率高，结果稳定，重复性良好，可以大规模工厂化育苗。

【技术实现步骤摘要】
一种桉树良种尾赤桉DH191-7的组培快繁方法
本专利技术涉及桉树栽培
，特别是涉及一种桉树良种尾赤桉DH191-7的组培快繁方法。
技术介绍
桉树原产澳大利亚，是桃金娘科（Mytaceae)桉树属（Eucalyptus)、杯果木属（Angophora）、伞房属（Corymbia）3个属树种的统称。共有1039个种、亚种和变种，其中桉树属树种多达945种，地理分布跨度大，表现差异也大。在世界上100多个国家引种栽培，均表现出适应性强、生长快、产量高、轮伐期短等优良性状。桉树木材可用于车船、建筑、矿山、人造板，而且是重要的制浆造纸工业原料，是培育短周期工业原料的最佳树种之一。目前已经成为世界公认的三大人工林树种之一。1982年，中澳技术合作——东门桉树示范林项目实施，广西国有东门林场从澳大利亚、印度尼西亚等七个国家，引进了174个桉树树种/种源，经过科学的引种栽培试验、测定、分析后，确定尾叶桉、巨桉、赤桉、园角桉、粗皮桉、大花序桉这6个树种适合中国华南地区生长。随后，对引种成功的尾叶桉、巨桉、赤桉、园角桉进行人工控制授粉，通过杂交育种对遗传基础进行改良，并获得大量遗传增益高、抗逆性强、生长量突出的杂交子代，并建成亚洲最大的桉树种质资源基因库。现在东门林场是国家桉树良种基地、广西桉树良种培育中心、全国特色种苗基地。由于桉树是异花授粉的多年生木本植物，容易天然杂交，产生的子代繁育后，性状发生严重的分离，用有性繁殖方法难以保持其优良特性，采用传统的扦插、嫁接等无性繁殖方法繁育苗木，常常因为优树材料来源不足，繁殖季节和育苗环境受到限制，育苗成本高等因素，制约了推广应用的速度。采用组培快繁技术繁育桉树良种，既能保持优树的遗传特性，又能达到快速繁殖的目的，是生产桉树优良无性系广泛采用的方法。1989年，尾叶桉×巨桉杂交子代经组培繁育成功，并规模推广造林。桉树引种成功并经杂交改良后推广种植，对中国林业的发展起到了突出的作用。据统计，到2013年，中国桉树人工林面积440万公顷，仅占我国森林总面积的2.2%，但提供的木材占全国木材产量的25%，因为桉树人工林生产木材的能力是天然杂木林的4-10倍，所以，有了桉树人工林，也就大大减少了对天然林砍伐的压力，因此，桉树为缓解我国木材资源的短缺和供需矛盾，为维护我国生态安全方面发挥了突出的作用。由于现在推广种植的尾巨桉，耐寒性有限，适生范围较小，造林地面积的扩大受到制约，为了获得更多生产建设所需要的木材，有两个途径，一是培育抗寒桉树品种，促成桉树向北发展，以扩大造林面积，二是培育高产品种，提高速丰林单位面积的木材产量，以达到在有限的土地上产生更多的木材。东门林场选育的桉树良种尾赤桉DH191-7，兼具速生丰产性和耐寒性两个优良品质，它是由尾叶桉和赤桉通过人工控制授粉杂交的子代，从F1代选优获得优树，经无性繁育成的无性系。尾叶桉原产印度尼西亚，具有较好的速生丰产性，生长快，产量高，但是耐寒性较差，赤桉原产澳大利亚，它对寒冷炎热等不良环境具有良好的适应性，对温度有较宽的生理适应幅度，其抗寒性大于巨桉，所以，以尾叶桉为母本，巨桉为父本，杂交选育的尾赤桉DH191-7，丰产性和抗寒性都比较突出，在无性系对比试验中，DH191-7表现良好，5.5年生的DH191-7蓄积生长量达198.06m3/hm2，年均蓄积生长量达36.01m3/hm2；在区域性造林推广试验中，DH191-7生长迅速，抗寒性良好，在桂北区域试验中，4.1年生林分平均胸径12.9cm，平均树高17.2m，蓄积生长量178.0m3/hm2，年均蓄积生长量43.4m3/hm2，在桂南区域试验中，4年生林分平均胸径13.2cm，平均高17.1m，蓄积生长量137.5m3/hm2，年均蓄积生长量34.4m3/hm2，在广东区域试验中，4.1年生林分平均胸径10.3cm，平均树高15.2m，蓄积生长量149.4m3/hm2，年均蓄积生长量36.4m3/hm2，另外，DH191-7干形通直，出材率高，木材材质好，纹理直，经木材材性检测，表明尾赤桉DH191-7是一个比较好的实木利用型用材树种。因为上述优良特性，广西林木品种审定委员会在2013年，经专家鉴定后，授予广西林木良种。要实现快速成规模推广DH191-7这一桉树良种，利用组培快繁技术是最有效的途径。东门林场在1992年建立组培厂，至今已成功繁育一百多个桉树优良无性系，培育组培苗近十亿株。因为采用芽器官离体诱导无菌芽的方式，非愈伤组织成苗途径，所以组培苗能够完整保持优树的优良特性，不易发生变异，造林后林相整齐，生长量高，采用同样的方法研究DH191-7的组培快繁技术，取得了成功。目前国内对赤桉组培的研究非常多，但对于尾赤桉组培育苗研究则较少，2007年张远华等对东门林场D2、D6、D5进行了组培快繁获得成功；2006年陈剑勇等对尾赤桉进行组培快繁获得成功，但没有具体的无性系名称，来源也不明确；2006年张连水等对尾赤桉DH201组培快繁获得成功，但DH201是巨桉和园角桉的杂交子代，并非尾赤桉。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对以上技术的不足，提供一种快速获得大量遗传性状一致，能完整保持母树优良性状的再生植株，使用该方法得到的再生植株，结果稳定，重复性良好的尾赤桉DH191-7的组培再生方法。为实现本专利技术的目的，采取如下技术方案：一种桉树良种尾赤桉DH191-7的组培快繁方法，是采用尾赤桉DH191-7原株繁育的扦插苗无性系林分中的优良单株，对其进行伐桩萌芽，利用近根茎处的萌芽条，取带有潜伏芽的半木质化茎段作外植体，离体诱导无菌芽，经过对无菌芽的继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株。该方法的步骤如下：（1）从东门林场桉树无性系对比实验测定林中，经过连续测定胸径、树高、木材材性以及干形指标，经过计算获得蓄积、连年生长量，综合分析对比后，选出优良无性系DH191-7，然后在DH191-7无性系中，再一次选择、实地评估，选择出DH191-7优良单株。（2）将DH191-7优良单株在离地面10-15cm高度处伐倒，促萌芽，当萌芽条长到10-15cm时，剪取萌芽条，用水浸泡基部，带回实验室备用。（3）萌芽条修剪去叶片，用自来水流水冲洗30min,再用饱和洗衣粉溶液洗涤10min，用纯净水清洗干净。（4）在超净工作台上，将萌芽条剪去嫩梢段和基部老化部分，切取长2-3cm，保留有1-2个潜伏芽的切段做表面灭活材料。（5）将待灭活材料置于高压灭菌处理过的无菌瓶中，用体积分数为75%的酒精溶液浸泡15-17s，无菌水清洗3-5次，洗去残留酒精，再用质量分数为0.1%HgCL2溶液浸泡，并适当搅拌，7-9min后倒去HgCL2溶液至专用收集罐中，用无菌水清洗材料5-6次，洗去残留在材料表面的HgCL2溶液。（6）用灭菌后的镊子夹取清洗好的茎段，放置在灭菌的接种碟上，用无菌滤纸吸干附着在材料表面水分后，切去叶柄和茎段的两端，接种到无菌芽诱导培养基上，每瓶接种一支外植体，全暗培养8-12d，温度26±2℃，腋芽开始萌动并不断生长，转入光照条件下培养15-20d，光照时间12h/d,光照强度1500-2000lux，培养温度26±2℃。（7）选取没有污染的无菌芽，切割后转入继本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种桉树良种尾赤桉DH191‑7的组培快繁方法，其特征在于：采用广西壮族自治区林木品种审定委员会审定的桉树良种尾赤桉DH191‑7无性系原株，伐倒促萌后，以萌芽条带潜伏芽的茎段作为外殖体，离体诱导无菌芽，由茎段直接萌生侧芽，无菌芽经继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽环节后，获得再生植株。

【技术特征摘要】
1.一种桉树良种尾赤桉DH191-7的组培快繁方法，其特征在于：采用广西壮族自治区林木品种审定委员会审定的桉树良种尾赤桉DH191-7无性系原株，伐倒促萌后，以萌芽条带潜伏芽的茎段作为外殖体，离体诱导无菌芽，由茎段直接萌生侧芽，无菌芽经继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽环节后，获得再生植株。2.根据权利要求1所述的桉树良种尾赤桉DH191-7的组培快繁方法，其特征在于：所述方法具体步骤如下：（1）在桉树良种尾赤桉DH191-7无性系试验林中，选出优树原株；（2）将DH191-7优树原株在离地面10-15cm高度处伐倒，促萌芽，当萌芽条长至10-15cm时，剪取萌芽条，用水浸泡基部，带回实验室备用；（3）萌芽条修剪去叶片，用自来水流水冲洗30min，再用饱和洗衣粉溶液洗涤10min，用纯净水清洗干净；（4）在超净工作台上，将萌芽条剪去嫩梢段和基部老化部分，切取长2-3cm，保留有1-2个潜伏芽的切段做表面灭活材料；（5）将待灭活材料置于高压灭菌处理过的无菌瓶中，用体积分数为75%的酒精溶液浸泡15-17s，无菌水清洗3-5次，洗去残留酒精，再用质量分数为0.1%HgCL2溶液浸泡，并适当搅拌，7-9min后倒去HgCL2溶液至专用收集罐中，用无菌水清洗材料5-6次，洗去残留在材料表面的HgCL2溶液；（6）用灭菌后的镊子夹取清洗好的茎段，放置在灭菌的接种碟上，用无菌滤纸吸干附着在材料表面水分后，切去叶柄和茎段的两端，接种到无菌芽诱导培养基上，每瓶接种一支外植体，全暗培养8-12d，温度26±2℃，腋芽开始萌动并不断生长，转入光照条件下培养15-20d，光照时间12h/d，光照强度1500-2000lux，培养温度26±2℃；（7）选取没有污染的无菌芽，切割后转入继代增殖培养基上培养18-23天；培养条件：温度26±2℃，光照强度2000-2500lux；（8）选取芽苗长2-3cm，并有3-4个节的继代芽苗，切成长1.5-1.8cm的单芽，插入生根培养基上培养，每瓶接种25株，培养条件：温度28-30...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐再生，李丽芳，张磊，王建忠，熊涛，邱炳发，陈德文，莫继有，兰俊，黎怀玲，陈东林，陈远龙，沈云，吴兵，庞贞武，黄全东，梁秀莉，韦炳俭，吴满芬，俸荣娣，
申请(专利权)人：广西壮族自治区国有东门林场，
类型：发明
国别省市：广西,45