【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种转基因种子或含有该转基因种子的饲料中转基因含量的检测方法，尤其涉及一种转植酸酶基因玉米或含有转植酸酶基因玉米饲料中植酸酶基因的定量检测方法，属于转植酸酶基因玉米的定量检测领域。
技术介绍
自1996至2010年，全球转基因作物的种植面积在十五年间增长了 87倍，截止2010年达到I. 48亿公顷，且每年都以10%以上的速度增长。迄今为止，共有59个国家批准种植或进口生物技术作物用于食物和饲料，其中包括29个国家批准了生物技术作物的本地化种植，全世界75%的人口居住在这59个国家。截至目前所发展的转基因植物中，转基因玉米、大豆、棉花、油菜籽和马铃薯等都与饲料有关，用于动物的日粮中，其中占转基因植物总种植面积80%以上的玉米和大豆在饲料中广泛应用。世界上每年约有4000万吨转基因玉米用于饲喂动物。大豆和豆柏是饲料中的主要蛋白原料，因此用作饲料的转基因大豆也有约7400多万吨。加上棉籽柏和油菜籽柏，每年用于饲料的转基因植物约为I. 2亿吨以上。并且由于转基因技术的快速发展，目前已有60 70%的饲料原料与转基因植物相关，例如抗虫的转基因玉米和棉花，抗...
【技术保护点】
一种转植酸酶基因玉米种子或含有转植酸酶基因玉米种子的饲料中植酸酶基因的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)建立转植酸酶基因玉米定量检测标准曲线和线性方程；(2)以待检测样品的DNA为模板，分别以扩增玉米内参基因的一对特异引物、扩增植酸酶基因的一对特异引物或者是扩增植酸酶基因表达框中构建载体终止子与植酸酶基因结合区域的一对特异引物进行实时荧光定量PCR扩增，计算出二次实时荧光定量PCR扩增的Ct值差值，将Ct值差值代入步骤(1)所构建的标准曲线和线性方程，得到待检测样品中植酸酶基因的含量。
【技术特征摘要】
2012.03.22 CN 201210078627.X1.一种转植酸酶基因玉米种子或含有转植酸酶基因玉米种子的饲料中植酸酶基因的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤 (I)建立转植酸酶基因玉米定量检测标准曲线和线性方程；(2)以待检测样品的DNA为模板，分别以扩增玉米内参基因的一对特异引物、扩增植酸酶基因的一对特异引物或者是扩增植酸酶基因表达框中构建载体终止子与植酸酶基因结合区域的一对特异引物进行实时荧光定量PCR扩增，计算出二次实时荧光定量PCR扩增的Ct值差值，将Ct值差值代入步骤(I)所构建的标准曲线和线性方程，得到待检测样品中植酸酶基因的含量。2.按照权利要求I所述的方法，其特征在于，所述转植酸酶基因玉米定量检测标准曲线和线性方程按照以下方法建立 (I)制备转植酸酶基因玉米的标准品DNA或含有转植酸酶基因玉米饲料的标准品DNA ；(2)以所制备的标准品DNA为模板，以扩增玉米内参基因的一对特异引物进行实时荧光定量PCR扩增，得到标准品DNA中内参基因Ct值；以所制备的标准品DNA为模板，以扩增植酸酶基因的一对特异引物或者是扩增植酸酶基因表达框中构建载体终止子与植酸酶基因结合区域的一对特异引物进行实时荧光定量PCR扩增，得到标准品DNA中植酸酶基因的Ct值；(3)建立转植酸酶基因玉米或含有转植酸酶基因玉米饲料的定量检测标准曲线和线性方程。3.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(3)所述的转植酸酶基因玉米的定量检测标准曲线和线性方程按照以下方法建立根据实时荧光定量PCR仪中的软件记录下检测得到的标准品DNA中内参基因Ct值和植酸酶基因的Ct值，以植酸酶基因的Ct值与内参基因Ct值的差值为纵坐标，以标准品DNA中转植酸酶基因玉米基因组DNA含量为横坐标，建立转植酸酶基因玉米定量检测标准曲线和线性方程； 步骤(3)所述的含有转植酸酶基因玉米饲料的标准曲线和线性方程按照以下方法建立根据实时荧光定量PCR仪中的软件记录下检测得到的含有转植酸酶基因玉米饲料的标准品DNA中内参基因Ct值和植酸酶基因的Ct值，以植酸酶基因的Ct值与内参基因Ct值的差值为纵坐标，以标准DNA中转植酸酶基因玉米饲料的基因组DNA含量为横坐标，建立定量检测标准曲线和线性方程。4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于步骤(3)所述的转植酸酶基因玉米的定量检测标准曲线和线性方程按照以下方法建立根据实时荧光定量PCR仪中的软件记录下检测得到的标准品DNA中内参基因Ct值和植酸酶基因的Ct值，以植酸酶基因的Ct值与内参基因Ct值的差值为纵坐标，以转植酸酶基因玉米标准品DNA中植酸酶基因组DNA含量的O. 5 %，I %，2 %，5 %，10 %为横坐标，建立转植酸酶基因玉米定量检测标准曲线和线性方程...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨文竹，初晓宇，陈茹梅，伍宁丰，范云六，姚斌，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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