本发明专利技术公开了一种鉴别产绿壳蛋鸡及鸡绿壳蛋基因型的方法及专用片段与引物。本发明专利技术提供了鉴定或辅助鉴定待测鸡是否为绿壳蛋鸡的方法，为检测待测鸡的基因组DNA，若基因组DNA中含有目的DNA分子（序列4），则所述待测鸡为或候选为绿壳蛋鸡；若基因组DNA中不含有目的DNA分子，则所述待测鸡不为或候选不为绿壳蛋鸡。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术一段425bp的短片段，根据该短片段设计合成3条引物，用于多重PCR扩增，可以通过检测扩增产物是否含有该短片段用来鉴定待测鸡是否产绿壳蛋，同时可以鉴定鸡绿壳蛋基因型。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种鉴别产绿壳蛋鸡及鸡绿壳蛋基因型的方法及专用片段与引物。
技术介绍
蛋壳颜色是影响鸡蛋品质的因素之一。在禽蛋市场上，表面光滑，色泽美观、均一的鸡蛋往往更受消费者的青睐。绿壳蛋以其独特的蛋壳颜色在禽蛋市场中受到欢迎，且常以“养生蛋”、“保健蛋”的身份出现在高端禽蛋市场中。传统绿壳蛋鸡的选育存在选而不纯、蛋壳颜色变异大的问题。鸡的绿壳蛋性状是由显性单基因(O)控制的质量性状，显性纯合子(0/0)和杂合 子(Ο/ο)个体都下绿壳蛋。这种遗传特点决定了依据表型选择很难区分纯合子(0/0)和杂合子(Ο/ο)，致使隐性非绿壳基因(O)难以剔除干净。常规育种手段只能通过测交鉴别杂合子，但这种方法费时、费力，延长了育种进程。用与绿壳蛋基因紧密连锁的分子标记进行标记辅助选择(MAS)可以缩短育种进程，但由于重组，一般标记的选择准确性依然无法达到100%。最准确、最有效的选择方法是直接对O基因进行选择。目前已证明鸡绿壳蛋性状是由SLC01B3基因上游5’端一段4. 2kb的插入序列引起，已经提出包含4. 2kb的长片段PCR扩增来鉴别产绿壳蛋鸡及鸡绿壳蛋基因型(图1A)。这种方法可以准确区分产绿壳蛋鸡与非产绿壳蛋鸡，并可判断产绿壳蛋鸡的基因型是显性纯合子(0/0)或是杂合子(O/o)，但该方法存在三个缺点(1)基因型检测时间长，因为算上插入片段两侧的序列，PCR扩增片段长度近6kb，I次PCR反应时间至少需要4. 5h ; (2)扩增失败机率高，长片段PCR对模板质量、扩增条件要求较高，稍不注意即可导致反应失败；(3)费用高，长片段PCR需要专用的长片段Taq酶，这种酶价格比普通Taq酶高4_5倍。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定待测鸡是否为绿壳蛋鸡的方法。本专利技术提供的方法，为检测待测鸡的基因组DNA，若基因组DNA中含有目的DNA分子，则所述待测鸡为或候选为绿壳蛋鸡；若基因组DNA中不含有目的DNA分子，则所述待测鸡不为或候选不为绿壳蛋鸡；所述目的DNA分子为如下I) -3)中的任意一种I)序列表中的序列4所示的DNA分子；2)在严格条件下与I)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；3)与I)限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的DNA分子。本专利技术的另一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定待测鸡基因型的方法。本专利技术提供的方法，为检测待测鸡的基因组DNA，若所述基因组DNA中含有目的DNA分子，则所述待测鸡的基因型为或候选为0/0纯合型或Ο/ο杂合型；若基因组DNA中不含有目的DNA分子，则所述待测鸡不为或候选不为0/0纯合型或Ο/ο杂合型；所述目的DNA分子为如下I) -3)中的任意一种I)序列表中的序列4所示的DNA分子；2)在严格条件下与I)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；3)与I)限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的DNA分子。上述两种方法中，所述检测待测鸡的基因组DNA的方法为测序、PCR扩增或分子杂交；所述待测鸡的基因组DNA来源于离体的鸡组织器官或血液。 上述鉴定或辅助鉴定待测鸡的基因型方法在鉴定待测鸡是否为产绿壳蛋鸡中的应用也是本专利技术保护的范围；其中，所述应用为若所述待测鸡的基因型为0/0纯合型或0/ο杂合型任意一种，则所述待测鸡为或候选为产绿壳蛋鸡；若所述待测鸡的基因型不为0/0纯合型或Ο/ο杂合型中的任意一种，则所述待测鸡不为或不候选为产绿壳蛋鸡。本专利技术的第三个目的是提供一种DNA分子。本专利技术提供的DNA分子，为如下I) -3)中任一所述的DNA分子I)序列表中的序列4所示的DNA分子；2)在严格条件下可与I)或2)限定的DNA序列杂交的DNA分子；3)与I)限定的DNA序列具有70%以上的同源性的DNA分子。上述严格条件具体可以为在6XSSC，0. 5%SDS的溶液中，在65° C下杂交，然后用 2 X SSC, 0. 1%SDS 和 I X SSC, 0. 1%SDS 各洗膜一次。扩增上述DNA分子的引物也是本专利技术保护的范围，具体为由序列表中序列I所示的DNA分子和由序列表中序列2所示的DNA分子组成的引物对。本专利技术的第四个目的是提供鉴别产绿壳蛋鸡和/或鸡绿壳蛋基因型的多重PCR的引物组、多重PCR试剂或多重PCR试剂盒。本专利技术提供的鉴别产绿壳蛋鸡和/或鸡绿壳蛋基因型的多重PCR的引物组由引物I、引物2和引物3组成；所述引物I、所述引物2和所述引物3的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列I、序列2和序列3 ;所述引物I、所述引物2和所述引物3的摩尔比具体为1:1:1 ；本专利技术提供的鉴别产绿壳蛋鸡和/或鸡绿壳蛋基因型的多重PCR试剂由所述引物组、dNTP、PCR扩增缓冲液、DNA聚合酶和水组成；所述弓I物组中的各条弓I物在所述试剂中的终浓度均为0. 4-0. 5pmol/ μ L ；本专利技术提供的鉴别产绿壳蛋鸡和/或鸡绿壳蛋基因型的多重PCR试剂盒，包括所述引物组或所述多重PCR试剂。上述多重PCR的引物组、多重PCR试剂或多重PCR试剂盒在鉴定或辅助鉴定待测鸡是否为产绿壳蛋鸡中的应用也是本专利技术保护的范围；或上述多重PCR的引物组、多重PCR试剂或多重PCR试剂盒在鉴定或辅助鉴定待测鸡的基因型中的应用也是本专利技术保护的范围；所述待测鸡基因型具体为0/0纯合型、Ο/ο杂合型或ο/ο纯合型。本专利技术第五个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定待测鸡是否为产绿壳蛋鸡的方法。本专利技术提供的方法，为用上述多重PCR的引物组、多重PCR试剂或多重PCR试剂盒中的引物组对待测鸡进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，检测PCR扩增产物，若PCR扩增产物具有400_450bp大小的扩增产物，则待测鸡为或候选为产绿壳蛋鸡；若PCR扩增产物不具有400-450bp大小的扩增产物，则待测鸡不为或候选不为产绿壳蛋鸡。本专利技术的第六个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定待测鸡基因型的方法。本专利技术提供的方法，为用上述多重PCR的引物组、多重PCR试剂或多重PCR试剂盒对待测鸡进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，检测PCR扩增产物。若PCR扩增产物具有400_450bp大小的PCR扩增产物且不具有300_350bp大小的PCR扩增产物，则待测鸡基因型为或候选为0/0纯合型；若PCR扩增产物具有400-450bp大小的PCR扩增产物和300-350bp大小的PCR扩增产物，则待测鸡基因型为或候选为Ο/ο杂合型；若PCR扩增产物具有300-350bp大小的PCR扩增产物且不具有400_450bp大小的PCR扩增产物，则待测鸡基因型为或候选为ο/ο纯合型。上述第五个和第六个目的的方法中，所述400_450bp大小的PCR扩增产物为425bp大小的扩增产物；所述425bp大小的扩增产物的核苷酸序列具体为序列表中的序列4 ;所述300-350bp大小的PCR扩增产物为34本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鉴定或辅助鉴定待测鸡是否为绿壳蛋鸡的方法，为检测待测鸡的基因组DNA，若基因组DNA中含有目的DNA分子，则所述待测鸡为或候选为绿壳蛋鸡；若基因组DNA中不含有目的DNA分子，则所述待测鸡不为或候选不为绿壳蛋鸡；所述目的DNA分子为如下1）？3）中的任意一种：1）序列表中的序列4所示的DNA分子；2）在严格条件下与1）限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；3）与1）限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的DNA分子。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邓学梅，王哲鹏，吴常信，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：
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