本发明专利技术提供了一种转移肿瘤缺失蛋白抑制剂多肽，包含SEQ?ID?No：2所示的氨基酸序列。本发明专利技术还提供了编码该多肽的多核苷酸以及该多核苷酸重组载体。该转移肿瘤缺失蛋白抑制剂多肽通过抑制Mtss1蛋白二聚化作用，从而达到抑制肿瘤细胞内摄，干扰细胞膜形态变化以及干扰肿瘤相关信号传导的效果，其中多肽-蛋白的体外结合解离常数和抑制活性均在纳摩尔级。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物化学领域，特别涉及一种转移肿瘤缺失蛋白抑制剂多肽，还涉及此多肽和多核苷酸重组质粒的制备和应用以及该多肽物质对Metastasis suppressor I ニ聚化抑制作用生物活性。
技术介绍
Inverse BAR (I-BAR)家族基因的表达产物蛋白能结合细胞膜，并能在细胞外刺激作用下对细胞膜的形态变化和细胞状况做出调节 οMetastasis suppressor I (以下简称 Mtssl) 基因是I-BAR家族的重要成员，由于其在转移性细胞中表达异常，且对 膜运动、细胞极性、胞内交织以及细胞移动具有调控功能。近期对人类恶性肿瘤样本的研究显示，在多种晚期膀胱癌和转移性胃癌中发现Mtssl基因表达的缺失；由于和预后不良情况成反比，Mtssl基因表达的程度可做为某些癌症患者无病生存率的诊断依据。同时也有报道某些Mtssl基因过度表达以及染色体8q24. I上Mtssl基因位点扩增的肿瘤。另タ卜，Mtssl 还是 Sonic hedgehog (Shh)响应基因之一 ,而Shh信号通路往往会促进作用肿瘤的发生。尽管当前的数据暗示Mtssl基因异常表达与肿瘤进展相关，但Mtssl的生理功能及其信号通路对肿瘤进展的影响尚没有得到充分阐明。Mtssl基因早先被认为与肿瘤转移有关，在某些恶性肿瘤中表达降低。该基因编码全长759个氨基酸的蛋白，其N端带有250个氨基酸组成的inverse Bin-Amphiphysin-Rvs (I-BAR)同源区，能形成扭曲的椭球形状的ニ聚体结构，利用该结构形成的凸面结合细胞膜。I-BAR 家族蛋白在 N 端往往高度的保守，并且与细胞膜运动密切相关。研究表明Mtssl蛋白I-BAR区能结合PI (4，5)P2_富集的人工膜并引发丝状伪足样的膜突起 此外，Mtssl I-BAR 能够与小 GTP 酶 Rac 相互作用，结合细胞膜并交叉连接肌动蛋白细胞骨架。Mtssl的C端还包括一个丝氨酸富集区(SRD)、ー个脯氨酸富集区(PRD)和ー个WASP同源2区(WH2)结构，这些位点能够结合肌动蛋白单体、皮层肌动蛋白和 Daaml 等细胞骨架调节相关蛋白。许多证据表明Mtssl的I-BARニ聚体在其构象形成和功能发挥发面具有重要作用；针对这一位点对进行阻断，将有理由于了解Mtssl蛋白N端特殊的作用。在结构上，两个Mtssl蛋白分子能够借助其N端的I-BAR区域结合成ニ聚体的结构，这ー结构能结合细胞膜并促使膜形成伪足状突起。Mtssl蛋白ニ聚体发挥生物活性的机制尚未阐明，这就需要发现有针对性的相关抑制剂，用以研究ニ聚化作用能否影响Mtssl介导的细胞膜变化和内吞作用，以及ニ聚化作用与Mtssl蛋白对肌动蛋白细胞骨架调节之间的联系。
技术实现思路
专利技术目的本专利技术的目的在于提供ー种能够有效抑制Mtssl蛋白ニ聚化作用的多肽，编码这些多肽物质的多核苷酸以及该多核苷酸重组载体。技术方案本专利技术提供了一种转移肿瘤缺失蛋白抑制剂多肽，包含SEQ ID No 2所示的氨基酸序列。作为改进，本专利技术提供的转移肿瘤缺失蛋白抑制剂多肽，还包含SEQ ID No :2所示的氨基酸序列的片段或类似物。作为进ー步改进，本专利技术提供的转移肿瘤缺失蛋白抑制剂多肽，还包含SEQ IDNo 2所示的氨基酸序列的多肽的片段，或与SEQ ID No 2所示的氨基酸序列具有80%以上同源性的多肽。本专利技术还提供了ー种多核苷酸，它编码包含SEQ ID No 2所示的氨基酸序列的碱基序列。作为改进，该多核苷酸编码包含SEQ ID No :2所示的氨基酸序列的多肽或其片段、类似物的碱基序列。该多核苷酸包含SEQ ID No :I所示的碱基序列。作为改进，该多核苷酸包括SEQ ID No :I的碱基序列或与SEQ ID No :I的碱基序列有80%以上的同源性。本专利技术还提供了 ー种重组质粒表达载体，它包含SEQ ID No 1所示的碱基序列；该重组质粒表达载体由上述的多核苷酸与外源表达载体质粒构建而成。本专利技术还提供了上述转移肿瘤缺失蛋白抑制剂多肽在制备抗肿瘤药物中的应用。该转移肿瘤缺失蛋白抑制剂多肽通过与Mtssl蛋白I-BAR区结合,抑制Mtssl蛋白的ニ聚化作用，从而达到抑制肿瘤细胞内摄，干扰细胞膜形态变化以及干扰肿瘤相关信号传导的效果。其中，多肽-蛋白的体外结合解离常数和抑制活性均在纳摩尔级。有益效果本专利技术提供的转移肿瘤缺失蛋白抑制剂多肽通过抑制Mtssl蛋白ニ聚化作用，抑制肿瘤细胞内摄，干扰细胞膜形态变化以及干扰肿瘤相关信号传导，削弱由表皮生长因子EGF、血小板衍生因子TOGF或刺猬因子shh等肿瘤刺激因素引发的细胞增殖和生长，其中多肽-蛋白的体外结合解离常数和抑制活性均在纳摩尔级。附图说明图I为转染GFP标记的序列号2代表的多肽，在293T细胞中表达情况，用WesternBlot检测的结果；其中目标蛋白分子量约38KD。图2为纯化的GST标记的序列号2代表的多肽，使用Commassie Blue染色的結果；其中目标蛋白分子量约35KD。图3为GST柱结合的序列号2代表的抑制剂多肽与Mtssl蛋白结合能力的检测结果；计算二者的解离常数在纳摩尔级。图4为GST标记的序列号2代表的抑制剂多肽抑制Mtssl ニ聚化能力的检测结果；计算多肽的抑制活性在纳摩尔级。具体实施例方式·根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、エ艺条件及其结果仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。试剂及仪器聚介: : PfuUltra II fusion HS DNA polymeraseStratagene 公司 单核苷酸混合物dNTPPromega公司 BamH I限制性内切酶NEB公司 SalI限制性内切酶NEB公司 3号酶切缓冲液NEB公司 T4 DNA連接酶和配套浓缩缓冲液Invitrogen公司 氨苄青霉素SIGMA公司 LB固体培养基GIBCO BRL公司 小牛血清BCSHyclone公司 DMEM高糖培养液Lonza公司 青霉素GffiCO公司 链霉素GIBCO公司 细胞转染试剂SuperFectQiagen公司 S.O.C.培养基SIGMA公司 LB液体培_基Invitxogen公司 异丙基-beta-D-硫代半乳糖苷IPTGSIGMA公司谷胱甘肽琼脂糖凝胶 Glutathione Sepharose 4BAmerican Biosciences 公H] 化学发光底物Thermo公司 考马斯亮蓝BIO-RAD公司 鼠抗 anti-Myc 抗体(9E10)BD Biosciences 公'-同 鼠抗anti-Flag抗体SIGMA公司Ilr \ i 凝胶 Protein A SepharoseGE Healthcare 公 ι Mastercycler型DNA梯度热循环仪eppendorf公司 细胞培养皿BD Falcon公司 Centricon YM-30 超滤管Millipore 公司 ImageStation 2000丨冬丨像糸统Kodak公'丨丨'j正常培养液为含10%小牛血清BCS的DMEM高糖培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种转移肿瘤缺失蛋白抑制剂多肽，包含SEQ？ID？No：2所示的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：詹熙，吉民，曹萌，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：
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