本发明专利技术提供了人类粘蛋白-1肿瘤抗原性多肽或其连续10个氨基酸的片段，其可结合HLA?I并被CD8+T细胞识别。本发明专利技术还提供了编码上述多肽的核酸。本发明专利技术还提供了可在细胞表面呈递上述多肽的抗原呈递细胞，以及可识别上述多肽或抗原呈递细胞的免疫效应细胞。本发明专利技术还提供了所述多肽或其变体，核酸，抗原呈递细胞或免疫效应细胞在用于制备治疗或预防癌症的疫苗或药物组合物中的用途。本发明专利技术提供的肿瘤疫苗在较大的人群中有良好的治疗效果，尤其是适合亚洲人种，例如中国人。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤和免疫预付和治疗领域。具体的，本专利技术涉及人类粘蛋白-1肿瘤多肽衍生物和其作为肿瘤疫苗的用途。
技术介绍
目前临床上对于癌症的治疗是以手术为主,化疗和放疗为辅,但治疗的特异性不足，常常对正常组织和器官造成损伤，并且手术治疗仍存在术后高度复发及易转移的问题。肿瘤疫苗的免疫治疗可以产生针对肿瘤的特异性反应，甚至能清除残余的肿瘤病灶，并产生免疫记忆。现已成为继手术、化疗和放疗之后的第四种肿瘤治疗方式，且与三大常规疗法有明显的互补性。作为预防或治疗性疫苗，肿瘤疫苗是免疫治疗的一种方式。其中利用多肽制作疫苗是利用肿瘤特异性抗原及其它免疫调节细胞来治疗和预防肿瘤。抗肿瘤免疫反应过程中先由抗原递呈细胞(APC)肿瘤抗原处理递呈给T细胞而激发的。树突状细胞(DendriticCell，DC)是人体内功能最强的专职APC。应用负载肿瘤抗原的DC，能够激发体内肿瘤特异性T细胞，从而能有效杀伤肿瘤细胞，并且能够建立起持久的抗肿瘤特异性免疫应答。人粘蛋白I (MUCl)是一种高度O-糖基化和含有连续重复肽序列为特征的高分子量糖蛋白，存在于多种上皮组织，具有多种功能。粘蛋白在癌组织中异常表达，表达量丰富。人粘蛋白I(MUCl)是一种肿瘤相关抗原(Tumor associated antigen, TAA),存在于90%癌细胞表面的分子。健康的人体细胞中也含有粘蛋白1，但数量很少，无法触发免疫反应。免疫系统遭遇粘蛋白I浓度高的癌 细胞可能触发免疫反应，激活的毒性T淋巴细胞可攻击和杀死癌细胞。细胞免疫，特别是细胞毒性T细胞(下文中称为CTL)在从活体中清除肿瘤细胞、病毒感染的细胞等中发挥重要作用。CTL识别肿瘤细胞上的抗原肽(肿瘤抗原肽)和MHC (主要组织相容性复合体)I类抗原(在人中其被称为HLA抗原)的复合物，并攻击和杀死肿瘤细胞。当细胞内合成肿瘤特异性蛋白(即肿瘤抗原蛋白质)后，该肿瘤特异性蛋白通过蛋白酶的细胞内降解产生肿瘤抗原肽。得到的肿瘤抗原肽与内质网中的MHC I类抗原(HLA抗原)结合以形成复合物，其被运输至细胞表面并作为抗原呈递。当肿瘤特异性CTL识别了作为抗原呈递的复合物时通过细胞毒性作用或淋巴因子的产生展示抗肿瘤作用。对一系列这些作用的阐明使通过使用肿瘤抗原蛋白或肽作为所谓的癌症免疫治疗剂(癌症疫苗)在具有肿瘤的患者中提高肿瘤特异性CTL的疗法成为可能。在肿瘤免疫治疗中，清除肿瘤细胞依靠T细胞的免疫作用。T细胞对抗原的识别，并不是完整的抗原分子。在抗原递呈细胞(APC)中，肿瘤相关抗原被酶分解成多肽，然后再在肽链转运蛋白的参与下被转运到内质网腔与新合成的HLA分子(human leukocyte antigen,人类白细胞抗原,包括HLA I分子或HLA II分子)结合并移至APC表面，形成HLA/抗原肽复合物，T细胞通过其表面特异的TCR识别抗原呈递细胞表面的HLA/抗原肽复合物后，再收到协同刺激信号(B7分子与CD28分子相互作用)。在双信号刺激下，T细胞被激活并发生增殖，大部分进而分化成效应细胞。其中cd8+t细胞有杀伤力，使外源细胞破裂而死亡。cd8+t细胞分泌白介素等细胞因子使cd8+t细胞、Μφ以及各种有吞噬能力的白细胞集中于肿瘤细胞周围，将肿瘤细胞消灭。其中一部分τ淋巴细胞，成为记忆细胞，再次遇到相同抗原刺激时，它将更迅速地增殖分化为效应细胞。少数记忆细胞再次分裂为记忆细胞,持久地执行特异性免疫功能。 1991年,Rotzschke等用X射线晶体衍射揭示,HLA I类分子顶部α I和α 2链组成的抗原肽结合区呈凹槽状结构，可容纳8~12个氨基酸残基组成的短肽。凹槽内氨基酸组成在不同型别的HLA I分子中高度保守，可与表位肽N端残基和C端残基形成稳定而强大的氢键，保证了 HLA I分子可以识别特殊表位。在不同基因型HLA I的凹槽内氨基酸可以有各种变化，这是形成HLA I多态性的基础。虽然抗原肽与HLA I类分子的结合有一定的选择性，但与抗体和抗原结合的机理不一样，只要被结合的多肽有2~3个关键的有相似化学性质的氨基酸残基(锚定位点)，就能恰当地连接到凹槽内的多肽结合基序(bindingmotif)的相应位置上。多肽与之结合后，并被运送到细胞表面递呈给⑶8+τ细胞。ra8+T细胞通过其表面的T细胞受体(TCR)特异性识别抗原呈递细胞表面的HLA/抗原肽复合物后，被激活化并增殖，进而分化成效应细胞。正是这一结构基础，所以每个HLA I分子能与一定数量的不同多肽结合。这为不同型别的分子结合肽的序列进行表位预测提供了理论基础，从而使计算机辅助手段进行CTL表位的分析乃至预测成为可能。HLA-DP、DQ、DR等HLA II类分子是由HLA II类基因编码的α链和β链非共价连接的糖蛋白组成。α链和β链在内质网分别合成后，各自盘绕成一个α螺旋和β片层构成凹槽。凹槽内也有锚定位点，凹槽与抗原肽结合形成HLA/多肽复合体。由于它的末端是开放的，故可容纳较长的多肽(约12~20个氨基酸)。当HLA II的凹槽与抗原肽结合形成MHC/多肽复合体，并被运送到细胞表面递呈给ra4+T细胞。ra4+T细胞通过其表面TCR特异性识别抗原呈递细胞表面的HLA/抗原肽复合物后，被活化和发生增殖，进而分化成效应细胞。ra8+T细胞必须要有刺激cd4+t细胞的信号，才能产生有效的免疫反应。激活的ra4+T细胞能有效促进CD8+T细胞产生记忆细胞，从而使机体产生长期的抗肿瘤的CTL反应。除此之外，激活的cd4+t细胞也可直接杀伤肿瘤细胞。HLA不同基因座位或同基因同一座位的不同等位基因之间结构上的差异，可形成不同的HLA分子凹槽的结构。由此造成不同HLA等位基因编码分子对各种抗原肽的结合具有选择性。而且，能够和同一类HLA分子结合的抗原肽，其锚定位点和锚定残基往往相同或相似。这表明，特定的HLA分子可凭借所需要的共同性基序选择性地结合抗原肽，在这个意义上，两者的结合具有一定的选择性。事实上，不同HLA分子可选择性地结合具有不同锚定位和残基的肽段，故不同HLA等位基因产物有可能提呈同一抗原分子的不同表位，造成不同个体(带有相异的MHC等位基因)对同一抗原的应答在强度上出现差异。这上是HLA以其多态性参与和调控免疫应答的一种重要机制。深入研究还发现，HLA分子对抗原肽的识别并非呈现严格的一对一关系。这一可变通性可表现在不同方面:一，组成共同性基础序列的抗原肽，其顺序和结构可变；二，同一HLA分子(如HLA II分子)所要求的锚定残基往往不止一种氨基酸，结果是对应的特定共同基础序列的肽链数量可以相当地多，造成一种HLA分子可结合多种抗原肽，激活多个特异T细胞克隆；三，不同HLA分子接纳的抗原肽，可拥有相似的共同基序。例如，在HLA I类分子中至少已知A2、A3、B4、B44四个家族，这些家族中的成员(各种等位基因产物)可选择性地共同识别拥有相同或相似锚定残基的抗原肽。这意味着能够被某一 HLA分子所识别和提呈的抗原肽，也可能被其所属家族中的其它分子所提呈。这对应用多肽疫苗，体外致敏树突状细胞疫苗或T细胞疫苗进行免疫预防和免疫治疗提供了便利。同时也为鉴定和改造肿瘤疫苗的多肽顺序提供依据。不仅每个HLA 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的多肽或其变体，所述多肽包含与下列(a)或(b)的氨基酸序列相同或基本上相同的氨基酸序列：(a)SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列；(b)所述(a)的氨基酸序列的片段。
【技术特征摘要】
2012.07.27 CN 201210265629.X1.一种分离的多肽或其变体，所述多肽包含与下列(a)或(b)的氨基酸序列相同或基本上相同的氨基酸序列: (a)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列； (b)所述(a)的氨基酸序列的片段。2.权利要求1的多肽或其变体，其中(b)中所述片段为包含SEQID NO:1所示的氨基酸序列中连续10个氨基酸的片段。3.权利要求2的多肽或其变体，所述片段具有LLLLLTVLTV的氨基酸序列。4.权利要求1-3中任一项的多肽或其变体，所述片段可结合HLAI分子并被CD8+T细胞识别。5.权利要求4的多肽或其变体，其中所述HLAI为HLA A2或HLA A3型，优选为HLAA2,更优选为 A*0201 或 A*0202。6.一种分离的核酸，其基本上由编码权利要求1-5中任一项的多肽的碱基序列组成。7.抗原呈递细胞，其可在细胞表面呈递权利要求1-5中任一项的多肽或其变体，优选的，所述抗原呈递细胞为树突细胞。8.免疫效应细胞，其可识别权利要求1-5中任一项的多肽或其变体或在细胞表面呈递权利要求1-5中任一项的多肽或其变体的抗原呈递细胞，优选的，所述免疫效应细胞为T细胞，例如CD8+T细胞。9.产生抗原呈递细胞的方法，所述方法包括将权利要求1-5中任一项的多肽或其变体与具有抗原呈递能力...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢雍，杜琳，
申请(专利权)人：北京智飞绿竹生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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