【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，尤其涉及一种解决生物制品活性成分长期稳定性的冻干制剂处方。
技术介绍
1、时至今日，仍有数百万人死于疫苗及治疗性生物制品可预防和治愈的疾病，虽然这与在偏远农村地区、不发达国家和冲突地区生物医药的分发有直接关系，但也与生物制品的热稳定性较弱密切相关。换言之，生物制品的不稳定性一定程度上限制了其更广泛的使用。例如：新型冠状病毒的大流行凸显出疫苗在运输、储存及分发等环节的重要性，而疫苗的不稳定性往往造成较短的货架期以及对低温的依赖。提高疫苗的稳定性以及延长其货架期一直是几十年来的前沿问题，尤其对于具有活性的生物制品而言，研究如何在相对较长的时间内保证其良好的稳定性具有重要的意义。很多优秀的制剂科学家通过不断地研发，开发了大量用于维持生物医药活性的配方并优化了工艺参数，其研发目标是提供在储存期间和意外暴露于异常条件后仍能保持足够质量(效价、活性和免疫原性)的产品，一直到药物被使用。众所周知，病毒、蛋白等生物药品在8℃以上水介质中的稳定性是有限的，其热稳定性一直受到挑战，再加上冷链运输和储存条件的不确定性和不均衡性，液体制剂虽然制备方便，但也局限了药物长期使用的潜力。冻干方法在生物医药及食品工业领域有着广泛的应用，通过冻干的手段去除游离水(使最终水含量为产品总重量的1％～3％)可以通过充分抑制或减缓水介质中可能发生的降解等不稳定途径来显著增加病毒或者蛋白等的稳定性并延长其货架期。
2、本专利技术根据现有相关技术知识，通过一系列试验筛选了冻干配方中的关键组分。
技术实现思路b>
1、本专利技术旨在开发并提供一种冻干制剂配方，该制剂应用冻干手段，一方面能够改善生物制品在冻干完成后效价、活性和免疫原性降低的问题，另一方面能够保护并维持其生物质量长期稳定。
2、本专利技术同时利用该制剂配方，开发了重组腺病毒制剂的冻干工艺，用于重组腺病毒类制剂的冻干。
3、本专利技术的具体实施方案
4、本专利技术提供一种冻干制剂，由有效成分，盐类缓冲液，糖类冻干保护剂，蛋白质类保护剂，表面活性剂，赋形剂制备而成，ph为6.0～7.0。
5、所述有效成分为重组腺病毒疫苗。
6、所述的盐类缓冲液选自：柠檬酸、pb、tris-hcl、生理盐水、dpbs及kpbs缓冲液；
7、所述糖类冻干保护剂选自：蔗糖、海藻糖、棉子糖或和环糊精；
8、所述蛋白质类保护剂选自：人血清白蛋白，牛血清白蛋白、明胶，水解乳清蛋白、水解酪蛋白；
9、所述表面活性剂选自：吐温20、吐温80、普洛沙姆f12、普洛沙姆f68、司盘20；
10、所述赋形剂选自：甘氨酸，右旋糖酐，聚乙烯吡咯烷酮，甘露醇，山梨醇，海藻糖。
11、所述液体制剂中，所述有效成分选自：呼吸道合胞病毒重组腺病毒疫苗，水痘-带状疱疹重组腺病毒疫苗，新型冠状病毒重组腺病毒疫苗，偏肺病毒重组腺病毒疫苗，水泡性口炎病毒重组腺病毒疫苗，单纯疱疹病毒i型重组腺病毒疫苗，单纯疱疹病毒ii型重组腺病毒疫苗，幽门螺杆菌重组腺病毒疫苗，治疗性乙肝重组腺病毒疫苗，其中，优选的，所述有效成分为水痘-带状疱疹重组腺病毒疫苗。最优选的，所述有效成分呼吸道合胞病毒重组腺病毒疫苗包含的病毒颗粒数(virus particle，vp)以1.0×109～5.0×1013vp/ml的量存在。
12、其中，所述呼吸道合胞病毒重组腺病毒疫苗腺病毒疫苗，制备方法如下：
13、(1)构建并合成含有保护性抗原核苷酸的穿梭质粒；
14、(2)利用重组试剂盒将步骤(1)所述穿梭质粒与骨架质粒进行重组，得到含有保护性抗原蛋白基因的腺病毒重组子；
15、(3)将步骤(2)所述的腺病毒重组子转染入hek-293或hek-293.2sus；
16、(4)培养步骤(3)所述包装细胞为hek-293或hek-293.2sus；
17、(5)收获从步骤(4)所述包装细胞释放的复制缺陷型重组腺病毒；
18、(6)收获从步骤(5)所述复制缺陷型重组腺病毒进行噬斑纯化；
19、(7)对步骤(6)中的复制缺陷型重组腺病毒进行扩大培养；
20、(8)对步骤(7)中的培养的复制缺陷型重组腺病毒进行反复冻融，离心后去上清；
21、(9)对步骤(8)中的冻融产物进行物理除杂后超滤浓缩；
22、(10)对步骤(9)中的培养产物进行柱层析纯化。
23、优选的，所述盐类缓冲液选自kpbs或和pb缓冲液，其物质的量浓度为5mmol/l～100mmol/l。优选的，所述糖类冻干保护剂选自蔗糖、海藻糖或和棉子糖，其浓度为5％～30％。
24、优选的，所述蛋白质类保护剂为人血清白蛋白，其浓度为0.1～5％。
25、优选的，所述表面活性剂为吐温80，其浓度为0.001％～0.8％。
26、优选的，所述赋形剂选自右旋糖酐、甘露醇或和pvp，浓度为2％～12％。
27、本专利技术所述盐类缓冲液选自kpbs或和pb缓冲液，其物质的量浓度为10mmol/l～50mmol/l；
28、所述糖类冻干保护剂选自蔗糖、海藻糖或和棉子糖，其浓度为5％～20％；
29、所述蛋白质类保护剂为人血清白蛋白，其浓度为0.2％～3％；
30、所述表面活性剂为吐温80，其浓度为0.01％～0.6％或0.015％～0.4％；
31、所述赋形剂选自右旋糖酐、甘露醇或和pvp，浓度为3％～8％。
32、本专利技术进一步提供所述冻干制剂的制备方法，所述方法，步骤如下：按照2×的质量分数或摩尔物质的量称取各组分，使用注射用水将其溶解后定容，每次配制均为现配现用，并调节至指定ph值，使用0.22μm滤器进行过滤除菌，取生物制品原液进行适当稀释与冻干配方按照1:1体积比进行充分混匀，放入冻干机样品仓后，放置好温度电极，关紧仓门，设置冻干工艺流程及参数，进行冻干，冻干完成后，充入氮气破除真空，进行压塞和轧盖；所述的冻干工艺流程主要包括以下步骤：搁板预冷、冷冻、退火、一次干燥和二次干燥；所述的冻干工艺参数主要为：搁板预冷温度为-10～20℃，持续时间至少30min；冷冻温度为-60～-40℃，持续时间3～8h；退火温度为-30～-10℃，持续时间0.5～5h；一次干燥第一阶段为-60～-45℃持续时间4～6h，第二阶段为-40～-25℃持续时间至少12h，此阶段真空压力为0.08～0.5mbar；二次干燥温度为5～20℃，持续时间为6～12h，此阶段真空压力至为0.001～0.3mbar；其中，温度变化时的升温及降温速率为0.01～1.5℃/min，降温速率为0.5～5℃/min。优选的，其中，升温速率为0.1～1℃/min，降温速率为0.6～2℃/min。
33、本专利技术所述的最终冻干制剂中配方组分的确定，是通过冻干前后滴度的变化来筛选关键辅料，并综合冻干饼的评分来进行综合评估本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种冻干制剂，其特征在于：由有效成分，盐类缓冲液，糖类冻干保护剂，蛋白质类保护剂，表面活性剂，赋形剂制备而成，pH为6.0-7.0。
2.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述有效成分为重组腺病毒疫苗。
3.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述盐类缓冲液选自为KPBS或和PB缓冲液，其物质的量浓度为5mmol/L-100mmol/L。
4.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述糖类冻干保护剂选自蔗糖、海藻糖或和棉子糖，其浓度为5％-30％。
5.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述蛋白质类保护剂为人血清白蛋白，其浓度为0.1-5％。
6.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述表面活性剂为吐温80，其浓度为0.001％-0.8％。
7.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述赋形剂选自右旋糖酐、甘露醇或和PVP，浓度为2％-12％。
8.根据权利要求2-7所述的冻干制剂，其特征在于：
9.权利要求1所述冻干制剂的制备方法，其特征在于，
10.权利要求9所述的制备方法，其特征在于，其中，升温速率为0.1～1℃/min，降温速率为0.6～2℃/min。
...【技术特征摘要】
1.一种冻干制剂，其特征在于：由有效成分，盐类缓冲液，糖类冻干保护剂，蛋白质类保护剂，表面活性剂，赋形剂制备而成，ph为6.0-7.0。
2.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述有效成分为重组腺病毒疫苗。
3.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述盐类缓冲液选自为kpbs或和pb缓冲液，其物质的量浓度为5mmol/l-100mmol/l。
4.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述糖类冻干保护剂选自蔗糖、海藻糖或和棉子糖，其浓度为5％-30％。
5.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述蛋白质类保护剂为人血清白蛋白，其浓度为0.1-5％。
6.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述表面活性剂为吐温80，其浓度为0.001％-0.8％。
7.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于：所述赋形剂选自右旋糖酐、甘露醇或和pvp，浓度为2％-12％。
8.根据权利要求2-7所述的冻干制剂，其特征在于：
9.权利要求1所述冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：按照2×的质量分数...
【专利技术属性】
技术研发人员：高博，李辰霄，赵佳，郝超辉，郭杨，万常青，冯树仁，牛文清，石怡昕，杜琳，
申请(专利权)人：北京智飞绿竹生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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