汉滩病毒糖蛋白特异性T细胞表位肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了HTNV-Gn/Gc特异性的T细胞表位肽及其应用，HTNV-Gn/Gc特异性的T细胞表位肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.75其中之一。本发明专利技术的HTNV-Gn/Gc特异性的T细胞表位肽，包括CD4+T细胞表位及CTL表位，可分别诱导CD4+T细胞和CD8+T细胞产生强烈的细胞免疫应答，分泌高水平IFN-γ。可应用于T细胞表位肽疫苗的制备，或应用于诱导产生表位肽特异性的CD4+T细胞或细胞毒性T细胞，在HFRS特异性免疫治疗领域中有着良好的开发应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于汉滩病毒的防治
，涉及汉滩病毒糖蛋白特异性的CD4+T细胞表位肽和CTL表位肽及其应用。
技术介绍
汉滩病毒(hantaan virus, HTNV)是《禁止生物武器公約》议定书核查范围的病原微生物中一种重要的病毒，属于布尼亚病毒科汉坦病毒属(Hantavirus, HTV),是HTV的原型。HTV属病毒均为单股负链RNA有包膜病毒，基因组包括大(L)、中(M)、小(S)三个片段，其中L片段编码RNA聚合酶，M片段编码包膜糖蛋白I和2 (glycoprotein I, Gl/Gn和 glycoprotein 2，G2/Gc), S 片段编码核蛋白(nucleocapsid protein, NP)。1978 年李镐汪等首先分离出的HTNV 76-118株是HTNV的代表株，也是在我国引起肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)的主要;)丙原体^!一。HFRS是ー种急性自限性疾病，但发病机理尚不清楚。HFRS是ー种以发热、出血和急性肾功能损害为特征的急性传染病，典型病例可有发热期、低血压休克期、少尿期、多尿期和恢复期五期经过，同时存在有大量轻型非典型病例，并可见多种非典型的特殊临床表现。人群对HTNV有较普遍的易感性，在人口密集，带病毒鼠数量多的条件下容易出现爆发和流行。全球每年HFRS发病人数达10万例，死亡率在2°/Γ Ο%左右，90%以上病例发生在我国，已成为我国目前死亡人数最多的传染病之一。HFRS在我国分布广，发病率和病死率较高，并且新疫区仍不断出现，在广大农村、城镇和林区部分疫点还时有爆发，严重危害我国人民的生命和健康，威胁和影响エ农业生产、经济开发、外贸及旅游事业的发展，是国家重点防治的传染病之一。在HTNV的三种结构蛋白中，HTNV糖蛋白(Gn/Gc)通过其C端黏附于病毒包膜上。由于Gn/Gc位于病毒衣壳的外层，其特异性抗体可直接与之结合，从而參与机体对病毒的免疫清除。但研究发现，尽管小鼠体内存在特异性中和抗体，仍会表现为病毒持续感染。病毒是胞内感染病原体，抗体分子不易进入细胞内，不能对胞内病毒发挥免疫清除功能，因此对胞内感染的病毒颗粒的免疫清除还主要依靠细胞免疫来执行。在病毒感染过程中，T细胞通过识别抗原提呈细胞(antigen-presenting cell, APC)表面的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC) - I类或II类分子与抗原肽表位形成的复合体，发挥清除病原体的效应。HTNV特异性CD4+T细胞和CD8+T细胞(细胞毒性T细胞，cytotoxic T lymphocyte, CTL)在清除病毒和HFRS的发病机制中均发挥重要作用。CD8+T细胞是抗病毒免疫的主要效应细胞，可通过穿孔素途径和死亡受体途径以及分泌细胞因子杀伤病毒感染细胞，引起病毒感染细胞凋亡。特异性CD4+T细胞尤其是Thl细胞则通过分泌细胞因子调节⑶8+T细胞介导的抗病毒免疫，对辅助⑶8+T细胞的活化至关重要。HTNV感染所诱导的特异性CTL识别与MHC- I类分子结合的内源性肽，长度多为8-10个氨基酸。HTNV感染所诱导的特异性CD4+T细胞则识别与MHC- II类分子结合的长度多为13-17个氨基酸的肽段。尽管细胞免疫应答在HFRS发生、发展和疾病的转归中起着重要作用，但迄今为止，对HTNV结构蛋白上的T细胞表位的研究只有零星报道。这种研究现状大大限制了人们对HTNV感染后适应性免疫应答规律及其与免疫保护或免疫损伤关系的认识，也限制了人们利用多肽疫苗对疾病进行治疗及控制的研究。合成肽疫苗是近年来出现的新型疫苗研究方向，合成肽能够直接与MHC分子结合，而不需要APC的加工处理，它与天然的内源性肽在激活免疫系统方面具有相同的效果，因此合成肽疫苗广泛应用于抗病毒免疫治疗。目前已有多种基于多肽表位的合成肽疫苗进入临床研究阶段或已上市。建立在T细胞表位鉴定基础之上的T细胞表位肽疫苗，由于人工合成多肽不包含病原生物的无关成分，只诱导特异性T细胞应答，因此安全、稳定、毒副作用少，且研制周期大大缩短。更重要的是，基于T细胞表位研发的多个T细胞表位组合，还可设计针对ー种或多种病原体的多价T细胞表位肽疫苗。因此T细胞表位合成肽疫苗已成为防治HTNV感染 研究的ー个新策略，而对HTNV特异的T细胞表位进行鉴定即成为疫苗研究的前提和关键。由于HTNV感染引起的HFRS有较高的发病率和死亡率，但迄今为止仍无特异的预防和治疗方法。因此迫切需要研发可用于预防和治疗HTNV感染的安全有效的表位肽疫苗。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供HTNV-Gn/Gc特异性的T细胞表位肽及其应用，所提供的表位肽可诱导CD4+T细胞或CTL产生强烈的细胞免疫应答，分泌高水平IFN- Y，可应用于HTNV多肽疫苗的制备。本专利技术是通过以下技术方案来实现HTNV-Gn/Gc特异性的T细胞表位肽，其特征在于，其氨基酸序列为以下SEQ IDNO. I SEQ ID NO. 75 其中之一SEQ ID NO. I =MGIffKffLVMASLVffP ；SEQ ID NO. 2 =KffLVMASLVffPVLTL ；SEQ ID NO. 3 =NVYDMKIECPHTVSF ；SEQ ID NO. 4 MKIECPHTVSFGENS ；SEQ ID NO. 5 VSFGENSVIGYVELP ；SEQ ID NO. 6 IGYVELPPVPLADTA ；SEQ ID NO. 7 SVTCYDLSCNSTYCK ；SEQ ID NO. 8 TLYMIVPIHACNMMK ；SEQ ID NO. 9 IVPIHACNMMKSCLI ；SEQ ID NO. 10 MMKSCLIALGPYRVQ ；SEQ ID NO. 11 : CL IALGP YRVQ WYE ；SEQ ID NO. 12 KHGIFDIASVHIVCF ；SEQ ID NO. 13 LDDFRSMEAFTGIFR ；SEQ ID NO. 14 IASYSIVGPANAKVP ；SEQ ID NO. 15 SIVGPANAKVPHSAS ；SEQ ID NO. 16 FRLTEQQVNFVCQRV ；SEQIDNO.17GQRKVILTKTLVIGQ ；SEQIDNO.18KTLVIGQCIYTITSL ；SEQIDNO.19IGQCIYTITSLFSLL ；SEQIDNO.20IYTITSLFSLLPGVA ；SEQIDNO.21TSLFSLLPGVAHSIA ；SEQIDNO.22SLLPGVAHSIAVELC ；SEQIDNO.23GVAHSIAVELCVPGF ；SEQIDNO.24AALLVTFCFGWVLIP ；SEQIDNO.25VTFCFGWVLIPAITF ；SEQIDNO.26FGWVLIPAITFIILT ；SEQIDNO.27LIPAITFIILTVLKF ；SEQIDNO.28ETYKELKAHGVSCPQ ；SEQIDNO.29:TLNLFRYKSRCYIFT ；SEQIDNO.30SETPLTPVWNDNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
HTNV？Gn/Gc特异性的T细胞表位肽，其特征在于，其氨基酸序列为以下SEQ？ID？NO.1~SEQ？ID？NO.75其中之一：SEQ？ID？NO.1：MGIWKWLVMASLVWP；SEQ？ID？NO.2：KWLVMASLVWPVLTL；SEQ？ID？NO.3：NVYDMKIECPHTVSF；SEQ？ID？NO.4：MKIECPHTVSFGENS；SEQ？ID？NO.5：VSFGENSVIGYVELP；SEQ？ID？NO.6：IGYVELPPVPLADTA；SEQ？ID？NO.7：SVTCYDLSCNSTYCK；SEQ？ID？NO.8：TLYMIVPIHACNMMK；SEQ？ID？NO.9：IVPIHACNMMKSCLI；SEQ？ID？NO.10：MMKSCLIALGPYRVQ；SEQ？ID？NO.11：CLIALGPYRVQVVYE；SEQ？ID？NO.12：KHGIFDIASVHIVCF；SEQ？ID？NO.13：LDDFRSMEAFTGIFR；SEQ？ID？NO.14：IASYSIVGPANAKVP；SEQ？ID？NO.15：SIVGPANAKVPHSAS；SEQ？ID？NO.16：FRLTEQQVNFVCQRV；SEQ？ID？NO.17：GQRKVILTKTLVIGQ；SEQ？ID？NO.18：KTLVIGQCIYTITSL；SEQ？ID？NO.19：IGQCIYTITSLFSLL；SEQ？ID？NO.20：IYTITSLFSLLPGVA；SEQ？ID？NO.21：TSLFSLLPGVAHSIA；SEQ？ID？NO.22：SLLPGVAHSIAVELC；SEQ？ID？NO.23：GVAHSIAVELCVPGF；SEQ？ID？NO.24：AALLVTFCFGWVLIP；SEQ？ID？NO.25：VTFCFGWVLIPAITF；SEQ？ID？NO.26：FGWVLIPAITFIILT；SEQ？ID？NO.27：LIPAITFIILTVLKF；SEQ？ID？NO.28：ETYKELKAHGVSCPQ；SEQ？ID？NO.29：TLNLFRYKSRCYIFT；SEQ？ID？NO.30：SETPLTPVWNDNAHG；SEQ？ID？NO.31：LTPVWNDNAHGVGSV；SEQ？ID？NO.32：WNDNAHGVGSVPMHT；SEQ？ID？NO.33：AHGVGSVPMHTDLEL；SEQ？ID？NO.34：GSVPMHTDLELDFSL；SEQ？ID？NO.35：MHTDLELDFSLTSSS；SEQ？ID？NO.36：SSSKYTYRRKLTNPL；SEQ？ID？NO.37：NPLEEAQSIDLHIEI；SEQ？ID？NO.38：EQTIGVDVHALGHWF；SEQ？ID？NO.39：GVDVHALGHWFDGRL；SEQ？ID？NO.40：HALGHWFDGRLNLKT；SEQ？ID？NO.41：HWFDGRLNLKTSFHC；SEQ？ID？NO.42：FHCYGACTKYEYPWH；SEQ？ID？NO.43：GACTKYEYPWHTAKC；SEQ？ID？NO.44：KYEYPWHTAKCHYER；SEQ？ID？NO.45：PWHTAKCHYERDYQY；SEQ？ID？NO.46：YERDYQYETSWGCNP；SEQ？ID？NO.47：YQYETSWGCNPSDCP；SEQ？ID？NO.48：VGTGCTACGLYLDQL；SEQ？ID？NO.49：CTACGLYLDQLKPVG；SEQ？ID？NO.50：GLYLDQLKPVGSAYK；SEQ？ID？NO.51：DQLKPVGSAYKIITI；SEQ？ID？NO.52：YSRRVCVQFGEENLC；SEQ？ID？NO.53：NLCKIIDMNDCFVSR；SEQ？ID？NO.54：IIDMNDCFVSRHVKV；SEQ？ID？NO.55：NDCFVSRHVKVCIIG；SEQ？ID？NO.56：IIGTVSKFSQGDTLL；SEQ？ID？NO.57：VSKFSQGDTLLFFGP；SEQ？ID？NO.58：STCQFGDPGDIMSPR；SEQ？ID？NO.59：FGDPGDIMSPRDKGF；SEQ？ID？NO.60：CPEFPGSFRKKCNFA；SEQ？ID？NO.61：RKKCNFATTPICEYD；SEQ？ID？NO.62：NMVSGYKKVMATIDS；SEQ？ID？NO.63：GYKKVMATIDSFQSF；SEQ？ID？NO.64：VMAT...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马樱，张赟，张春梅，庄然，徐竹蔚，易静，刘蓓，张宇丝，陈丽华，杨琨，宋朝君，李琦，方亮，周幸春，刘志佳，金伯泉，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：