【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测试剂盒，尤其涉及一种同时检测单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的双重荧光定量PCR试剂盒，属于单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的检验检疫领域。
技术介绍
随着世界经济全球化、贸易自由化和食品国际贸易的迅速发展，食品安全已成为事关人民健康和构建和谐社会的重大战略问题。而食源性疾病在食品安全问题中又占据非常重要的地位。WHO将食源性疾病定义为存在于自然界中的有污染性或毒性的因子(包括病毒、寄生虫、细菌和农业、环境、危险化学品以及生物毒素)通过进食而进入身体引起的疾病(任玉华，田海霞.食品安全与食源性疾病[J].职业与健康，2005，21 (12)1977-1978.)。爆发的食源性疾病中多数是由致病性细菌引起(张敏，童华荣，张丽平.动 物性食品安全现状及其对策[J].食品工业科技，2005 (5) :182-186)。其中，单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌是比较重要的两种食源性致病菌(刘圆圆.沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的同步快速检测方法的研究[D].华南理工大学，2010，1-86)。单增李斯特菌是一种能引起人畜共患的致病菌，致死率高达30%，对...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种同时检测单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的双重荧光定量PCR试剂盒，包括Taq DNA聚合酶，荧光定量PCR扩增缓冲液，灭菌去离子水，一对扩增单增李斯特菌的上、下游引物和一条检测单增李斯特菌的TaqMan探针，一对扩增金黄色葡萄球菌的上、下游引物和一条检测金黄色葡萄球菌的TaqMan探针；其特征在于所述的一对扩增单增李斯特菌引物的核苷酸序列分别为SEQ ID No. I和SEQ ID No. 2所示，所述的检测单增李斯特菌的TaqMan探针的核苷酸序列为SEQ ID No. 3所示；所述的一对扩增金黄色葡萄球菌引物的核苷酸序列分别为SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5所示，所述的检测金黄色葡萄球菌的TaqMan探针的核苷酸序列为SEQ ID No. 6所示。2.按照权利要求I所述的的双重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于所述的荧光定量PCR扩增缓冲液中含有dNTPs和Mg2+。3.按照权利要求I所述的的双重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于 在SEQ ID No. 3所示探针的5'端连接有荧光报告基团，3'端连有非荧光淬灭基团；优选的，所述的荧光报告基团是FAM，所述的非荧光淬灭基团是Eclipse ； 在SEQ ID No. 6所示探针的5'端连接有荧光报告基团，3'端连有非荧光淬灭基团；优选的，所述的荧光报告基团是JOE，所述的非荧光淬灭基团是Eclipse。4.按照权利要求1-3任何一项所述的的双重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于含有单增李斯特菌标准质粒和金黄色葡萄球菌标准质粒；此外，该试剂盒还含有阴性质控标准品。5.一种同时检测食品中单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的双重荧光定量PCR方法，包括以下步骤(I)提取待检测食品的DNA ；(2)建立PCR扩增体系所提取的待检测食品的DNA, Taq DNA聚合酶，荧光定量PCR扩增缓冲液，灭菌去离子水，一对扩增单增李斯特菌的上、下游引物和一条检测单增李斯特菌的TaqMan探针，一对扩增金黄色葡萄球菌的上、下游引物和一条检测金黄色葡萄球菌的TaqMan探针；(3)将所建立的PCR扩增体系在荧光定量PCR仪上进行PCR扩增，根据扩增曲线、标准曲线或/和Ct值对样品中的单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌进行定性或定量分析；其中，所述的一对扩增单增李斯特菌的上、下游引物的核苷酸序列分别为SEQ ID No. I和SEQ ID No. 2所示，所述的检测单增李斯特菌的TaqMan探针的核苷酸序列为SEQ ID No. 3所示；所述的一对扩增金黄色葡萄球菌的上、下游引物的核苷酸序列分别为SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5所示，所述的检测金黄色葡萄球菌的TaqMan探针的核苷酸序列为SEQ ID No. 6所示。6.按照权利要求5所述的双重荧光定量PCR方法，其特征在于所述的荧光定量PCR扩增缓冲液中含有dNTPs和Mg2+ ; 在SEQ ID No. 3所示探针...
【专利技术属性】
技术研发人员：邵美丽，于国萍，许岩，张秀玲，边亚娟，赵艳丽，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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