一种针对单增李斯特菌的单域重链抗体和多肽，其具有SEQIDNO.:1所示的氨基酸序列的蛋白质或多肽，可用于免疫检测、抗原富集纯化等领域。本发明专利技术所提供的氨基酸序列可以作为前体，通过随机或定点突变技术进行改造，能够获得性质（亲和性、特异性、稳定性等）更好的突变体，用来发展进一步用于医药、工业、农业的蛋白质或多肽。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】一种针对单增李斯特菌的单域重链抗体和多肽，其具有SEQIDNO.:1所示的氨基酸序列的蛋白质或多肽，可用于免疫检测、抗原富集纯化等领域。本专利技术所提供的氨基酸序列可以作为前体，通过随机或定点突变技术进行改造，能够获得性质（亲和性、特异性、稳定性等）更好的突变体，用来发展进一步用于医药、工业、农业的蛋白质或多肽。【专利说明】针对单增李斯特菌的单域重链抗体L5-78
本专利技术涉及单域重链抗体技术(又称纳米抗体技术)，以及基因工程抗体技术，特别是针对单增李斯特菌的单域重链抗体或多肽。 技术背景单域抗体是指由普通抗体可变区(VH或VL)组成的基因工程抗体。单域重链抗体(又称为纳米抗体，VHH 抗体，variable domain of heavy chain of heavy-chainantibody)是指仅由重链抗体(heavy-chain antibody)可变区(Variable region)组成的基因工程抗体，其中，重链抗体(heavy-chain antibody)是一种存在于骆5它、S鱼等动物体内天然缺失轻链的抗体。单域重链抗体具有分子量小、渗透性好等特点，目前已广泛用于基础研究、医学诊断和检测、抗体药物开发等领域。单核细胞增生性李斯特菌(Zisteria简称单增李斯特菌，LM),属于李斯特菌属，目前在病源学上已被世界普遍公认为是一种能引起人畜共患病和食源性疾病的病原菌，于1926年最先由Murray等从家兔体内分离得到，能引起人、畜及禽类的李斯特菌病，该病的临床表现为人和动物脑膜炎、败血症及孕妇流产等，以妊娠期妇女、新生儿及免疫功能低下者易感染。人主要是通过食用污染的奶及奶制品、肉类等动物性食品而引起李斯特菌病。虽然由单增李斯特菌引起的李斯特病的发生率并不高，但是由于其致死率高达30%以上，对免疫缺损的病人，致死率甚至高达70%。目前，已有针对单增李斯特菌的多克隆抗体、单克隆抗体的公开报道。与单域重链抗体相比，这些抗体存在生产成本相对较高，制备过程复杂等缺点。单域重链抗体具有分子量小、渗透性好等性质，显示出广阔的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供针对单增李斯特菌的单域重链抗体(包括含有所述单域重链抗体全部或部分功能区域的蛋白质或多肽)及其氨基酸序列，可以被用于制备检测单增李斯特菌的试剂和工具。本专利技术提供针对单增李斯特菌的单域重链抗体，具有SEQ ID N0.:1所示的氨基酸序列。其氨基酸序列的IMGT编号和结构域的划分如图1所示。本专利技术所提供的单域重链抗体分别包括四个框架区(Framework region, FR)和三个互补决定区(Complementarity-determining region, CDR)。SEQ ID N0.:1 中，框架区(FR1-FR4)分别选自I~25，34~50，59~96，114~124氨基酸序列，互补决定区(CDR1-CDR3)分别选自26~33，5广58和97~113氨基酸序列(见序列表)。互补决定区主要负责抗原的识另IJ，框架区结构相对稳定，主要起着支撑维持蛋白质结构的作用。本专利技术提供一个核酸分子，编码SEQ ID N0.:1，通过遗传密码子可以随时获得该核酸分子的具体序列。所述的核酸分子优选为SEQ ID N0.:2序列。本专利技术所提供的核苷酸序列可以通过合适的表达系统进行表达以得到相应的蛋白质或多肽。这些表达系统包括细菌，酵母菌，丝状真菌，动物细胞，昆虫细胞，植物细胞，或无细胞表达系统。本专利技术还提供一种载体，包含所述核酸序列。本专利技术还提供一种宿主细胞，包括所述蛋白质或表达载体。本专利技术还提供一种检测单增李斯特菌的方法，其特征是含有上述蛋白质或多肽。基于本专利技术提供的蛋白质或多肽与单增李斯特菌特异性结合的能力，建立单增李斯特菌的检测方法。其中，优选的方法包括酶连免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),荧光免疫法(Fluoroimmunoassay，FIA)，免疫芯片法，亲和层析法和免疫层析法。本专利技术还涉及该针对单增李斯特菌的单域重链抗体在单增李斯特菌免疫检测、菌体或抗原富集纯化方法中的应用。本专利技术所提供的氨基酸序列可以作为前体，通过随机或定点突变技术进行改造，能够获得性质(水溶性、稳定性、亲和力以及特异性等)更好的突变体，用来发展进一步用于医药、工业、农业的蛋白质或多肽。本专利技术所叙述的一些术语具有如下含义: 同源性:描述两个或更多氨基酸序列的相似程度，第一个氨基酸序列和第二个氨基酸序列之间同源性的百分比可以通过【第一个氨基酸序列中与第二个氨基酸序列中相应位置处的氨基酸序列相同的氨基酸残基的数量】除以【第一个氨基酸序列中氨基酸总数】在乘以【100%】来计算，其中第二个氨基酸序列中的某个氨基酸的缺失、插入、替换或添加(与第一个氨基酸相比)被认为是有差别`。备选地，同源性百分比也可以利用已知的用于序列匹配的计算机运算程序如NCBI Blast获得。结构域:蛋白质三级结构的基本结构单位，通常具有一定的功能。IMGT 编号:IMGT 数据库(The International ImMunoGeneTics Datbase)中的一种已经标准化的抗体氨基酸序列编号方法。具体编号方法可以参考文献(Ehrenman，F.，Q.Kaas, et al.(2010).” IMGT / 3D structure-DB and IMGT / DomainGapAlign:adatabaseand a tool for immunoglobulins or antibodies, T cell receptors, MHC,IgSF and MhcSF.，，Nucleic Acids Res 38 (Database issue): D301-307.Lefranc,M.P., C.Pommie, et al.(2003).，，IMGT unique numbering for immunoglobulin andT cell receptor variable domains and Igsuperfamily V-1ike domains “Dev compImmunol 27(1):55-77.)中的描述。密码子(codon):又称为三连体密码子(triplet code),指对应于某种氨基酸的核苷酸三联体。在转译过程中决定该种氨基酸插入生长中多肽链的位置。【专利附图】【附图说明】图1氨基酸编号及结构域示意图。图2间接phage-ELISA法测定噬菌体结合活性及特异性。纵坐标表示ELISA读数计测定450nm处吸光值,横坐标表不按照表1加样，包被的不同菌体，大肠表不大肠杆菌，沙门表示沙门氏菌，蜡样表示蜡样芽胞杆菌，单增表示单增李斯特氏菌，格氏表示格氏李斯特氏菌，英诺表示英诺克李斯特氏菌，威尔表示威尔李斯特氏菌，绵羊表示绵羊李斯特氏菌，西尔表示西尔李斯特氏菌。图3噬菌粒pHEN-L5-78结构图。图4表达质粒PET25-L5-78结构图。图5为L5-78单域重链抗体表达及Western Blot鉴定图，左边泳道I为蛋白分子量标准，泳道2为不加IPTG诱导的BL21-PET-25b-本文档来自技高网...
【技术保护点】
针对单增李斯特菌的单域重链抗体，具有SEQ?ID?NO.:1所示的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：涂追，陈奇，陶勇，熊勇华，许杨，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：
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