本发明专利技术公开了一种实时定量检测人类VSTM1基因表达水平的引物及探针。本发明专利技术提供了一种试剂盒，包括特异性引物对甲和探针甲；所述特异性引物对甲为序列表的序列1所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段组成的引物对；所述探针甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示。所述试剂盒的功能为如下（a）或（b）或（c）或（d）：（a）辅助诊断肿瘤患者；（b）辅助评价肿瘤患者的疗效；（c）辅助鉴定肿瘤细胞系；（d）定量检测VSTM1基因的表达量。本发明专利技术提供的引物对和探针，可以用于定量检测VSTM1基因表达水平，从而用于血液肿瘤细胞系的辅助鉴定或血液肿瘤患者（特别是白血病患者）的辅助诊断，将在医学检测领域发挥重要作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种实时定量检测人类VSTMl基因表达水平的引物及探针。
技术介绍
白血病是ー种造血干/祖细胞发生恶性病变的异质性造血系统肿瘤，以异常造血细胞的恶性増殖、分化受阻、凋亡受抑并造成正常造血干/祖细胞受抑为特征，是导致青少年死亡的最常见的恶性肿瘤，发病机制至今尚不明确。分子生物学的进展已证明基因异常是白血病形成的基础，2008年WHO发布的白血病和淋巴瘤诊断标准强调基因异常在血液恶性肿瘤诊断、分层及预后中的重要性。急性髓性白血病(acute myeloid leukemia, AML)相关的染色体易位造成的癌基因活化,如AMLl/ETO、PML/RARa、CBFb/MYHll等，已为人们所认知并在临床诊断、靶向治疗中发挥重要作用。但细胞癌基因的活化仅代表參与肿瘤发生的基因变化之一，另ー种变化是抑癌基因的失活。抑癌基因正常时起抑制细胞増殖和肿瘤发生的作用。许多肿瘤均发现抑癌基因的两个等位基因缺失或失活，失去细胞增生的阴性调节因素，导致肿瘤克隆的増殖和/或生存优势。目前存在的问题是，尚不能证明已发现的抑癌基因在AML发病机制中的普遍意义，而随着人类基因组计划顺利完成，有可能在大多数人类白血病中找到更多的诊断及药物作用靶点。虽然人类基因组全部序列已确定，但许多基因的功能仍然ー无所知。根据2010年发表的人类转录组数据库Η-Invitational Database (H-InvDB)的统计,在目前已注释的35，303个人类编码基因中，有功能报道的只有13，314个。因此，大量人类新发现的基因的功能、其在肿瘤病理机制中的作用及其开发应用仍有待于科学工作者的努力发掘。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种实时定量检测人类VSTMl基因表达水平的引物及探针。本专利技术保护ー种试剂盒，包括特异性引物对甲和探针甲；所述特异性引物对甲为序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段组成的引物对；所述探针甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示。具体来说，所述探针甲的5’末端标记有荧光基团(如FAM荧光基团)，3’端标记有荧光淬灭基团(如BHQ荧光淬灭基团或TAMRA荧光淬灭基团)。所述试剂盒的功能为如下(a)或(b)或(C)或(d): (a)辅助诊断肿瘤患者；(b)辅助评价肿瘤患者的疗效；(c)辅助鉴定肿瘤细胞系；(d)定量检测VSTMl基因的表达量。所述VSTMl基因可如序列表的序列7、序列表的序列9、序列表的序列10、序列表的序列11、序列表的序列12、序列表的序列13或GENBANK ACCESSION NO. NM_198481. 3所不。所述试剂盒还可包括阳性质粒；所述阳性质粒为含有VSTMl基因或其片段的重组质粒。所述阳性质粒具体可为含有序列7所示的VSTMl基因片段的重组质粒。所述阳性质粒更具体可为将PMD18-T载体与序列表的序列7所示的VSTMl基因片段连接得到的重组质粒。 所述(a)和/或所述(b)和/或所述(C)中，所述肿瘤为淋巴肿瘤或血液肿瘤。所述(a)和/或(b)中，所述肿瘤患者具体可为血液肿瘤患者或淋巴肿瘤患者(淋巴瘤患者)，所述血液肿瘤患者更具体可为急性髓细胞白血病(AML)患者、急性淋巴细胞白血病(ALL)患者或慢性髓性白血病(CML)患者，所述急性髓细胞白血病(AML)患者具体可为M0/M1、M2、M3、M4、M5或M6亚型，所述初治慢性髓性白血病(CML)患者的亚型具体可为CML-慢性期患者或CML-加速/急变期患者。所述(c)中，所述肿瘤细胞系具体可为淋巴肿瘤细胞系或血液肿瘤细胞系，所述淋巴肿瘤细胞系更具体可为Raji细胞，所述血液肿瘤细胞系具体可为K562细胞、MEG-Ol细胞、NB4细胞、HL60细胞、6T-CEM细胞、Jurkat细胞或KG-I细胞。本专利技术还保护特异性引物对甲和探针甲在制备试剂盒中的应用；所述特异性引物对甲为序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段组成的引物对；所述探针甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示。具体来说，所述探针甲的5’末端标记有荧光基团(如FAM荧光基团)，3’端标记有荧光淬灭基团(如BHQ荧光淬灭基团或TAMRA荧光淬灭基团)。所述试剂盒的功能为如下(a)或(b)或(C)或(d): (a)辅助诊断肿瘤患者；(b)辅助评价肿瘤患者的疗效；(c)辅助鉴定肿瘤细胞系；(d)定量检测VSTMl基因的表达量。所述(a)和/或所述(b)和/或所述(C)中，所述肿瘤为淋巴肿瘤或血液肿瘤。所述(a)和/或(b)中，所述肿瘤患者具体可为血液肿瘤患者或淋巴肿瘤患者(淋巴瘤患者)，所述血液肿瘤患者更具体可为急性髓细胞白血病(AML)患者、急性淋巴细胞白血病(ALL)患者或慢性髓性白血病(CML)患者，所述急性髓细胞白血病(AML)患者具体可为M0/M1、M2、M3、M4、M5或M6亚型，所述初治慢性髓性白血病(CML)患者的亚型具体可为CML-慢性期患者或CML-加速/急变期患者。所述(c)中，所述肿瘤细胞系具体可为淋巴肿瘤细胞系或血液肿瘤细胞系，所述淋巴肿瘤细胞系更具体可为Raji细胞，所述血液肿瘤细胞系具体可为K562细胞、MEG-Ol细胞、NB4细胞、HL60细胞、6T-CEM细胞、Jurkat细胞或KG-I细胞。本专利技术还保护特异性引物对甲、探针甲和阳性质粒在制备试剂盒中的应用；所述特异性引物对甲为序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段组成的引物对；所述探针甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述阳性质粒为含有VSTMl基因或其片段的重组质粒。具体来说，所述探针甲的5’末端标记有荧光基团(如FAM荧光基团)，3’端标记有荧光淬灭基团(如BHQ荧光淬灭基团或TAMRA荧光淬灭基团)。所述试剂盒的功能为如下(a)或(b)或(C)或(d): (a)辅助诊断肿瘤患者；(b)辅助评价肿瘤患者的疗效；(c)辅助鉴定肿瘤细胞系；(d)定量检测VSTMl基因的表达量。所述阳性质粒具体可为含有序列7所示的VSTMl基因片段的重组质粒。所述阳性质粒更具体可为将PMD18-T载体与序列表的序列7所示的VSTMl基因片段连接得到的重组质粒。所述(a)和/或所述(b)和/或所述(C)中，所述肿瘤为淋巴肿瘤或血液肿瘤。所述(a)和/或(b)中，所述肿瘤患者具体可为血液肿瘤患者或淋巴肿瘤患者(淋巴瘤患者)，所述血液肿瘤患者更具体可为急性髓细胞白血病(AML)患者、急性淋巴细胞白血病(ALL)患者或慢性髓性白血病(CML)患者，所述急性髓细胞白血病(AML)患者具体可为M0/M1、M2、M3、M4、M5或M6亚型，所述初治慢性髓性白血病(CML)患者的亚型具体可为CML-慢性期患者或CML-加速/急变期患者。所述(c )中，所述肿瘤细胞系具体可为淋巴肿瘤细胞系或血液肿瘤细胞系，所述淋巴肿瘤细胞系更具体可为Raji细胞，所述血液肿瘤细胞系具体可为K562细胞、MEG-Ol细胞、NB4细胞、HL60细胞、6T-CEM细胞、Jurkat细胞或KG-I细胞。VSTMl (V-set and transmembrane domain containing I)基因在血液肿瘤的病理机制中可能发挥重要作用，该基因不仅参与正常造血细胞的发生、发展，而且本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.ー种试剂盒，包括特异性引物对甲和探针甲；所述特异性引物对甲为序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段组成的引物对；所述探针甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示。2.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒的功能为如下(a)或(b)或(c)或(d) : Ca)辅助诊断肿瘤患者；(b)辅助评价肿瘤患者的疗效；(c)辅助鉴定肿瘤细胞系；(d)定量检测VSTMl基因的表达量。3.如权利要求I或2所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括阳性质粒；所述阳性质粒为含有VSTMl基因或其片段的重组质粒。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述阳性质粒为含有序列7所示的VSTMl基因片段的重组质粒。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述阳性质粒为将PMD18-T载体与序列表的序列7所示的VSTMl基因片段连接得到的重组质粒。6.如权利要求I至5中任一所述的试剂盒，其特征在于所述(a)和/或所...
【专利技术属性】
技术研发人员：阮国瑞，黄晓军，谢敏，马大龙，韩文玲，陈珊珊，李金兰，冷馨，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：
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