本发明专利技术公开了基于多个基因辅助诊断多发性骨髓瘤患者的定量检测试剂盒。本发明专利技术提供了包括引物探针组合物甲(序列1和2所示核苷酸序列组成的引物对甲和序列3所示探针甲)、引物探针组合物乙(序列4和5所示核苷酸序列组成的引物对乙和序列6所示探针乙)、引物探针组合物丙(序列7和8所示核苷酸序列组成的引物对丙和序列9所示探针丙)和引物探针组合物丁(序列10和11所示核苷酸序列组成的引物对丁和序列12所示探针丁)的试剂盒。本发明专利技术为多发性骨髓瘤的诊断提供了一条快速、可靠、准确的新途径，为疗效观察、微小残留病的动态观察提供依据。本发明专利技术将在医学检测领域发挥重要作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基于多个基因辅助诊断多发性骨髓瘤患者的定量检测试剂盒。
技术介绍
多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)是威胁生命的浆细胞性恶性肿瘤，在血液恶性肿瘤中发病率位于第二位。尽管干细胞移植以及新型药物治疗可以使病情得到有效控制，但很少有患者能够取得完全缓解甚至治愈，复发和死亡的结局仍不可避免。分子生物学的发展使越来越多的肿瘤相关基因为人们所认知，这些重要的分子标志已在血液系统恶性肿瘤的诊断和治疗中发挥了极大的作用，在MM中虽然已发现涉及免疫球蛋白基因重排、C-MYC、RAS癌基因突变及人类端粒酶逆转录酶mRNA过度表达等，但缺乏公认的肿瘤相关的特异性诊断、微小残留病检测和预后评估的分子靶标。癌睾丸抗原(Cancer testis antigen，CT抗原)基因是与恶性肿瘤相关的基因家族，编码免疫原性蛋白质，在过去15年间已鉴定了 40多个家族，表达特点是限制性表达于正常组织睾丸、卵巢和胚胎滋养层细胞，其他正常组织几乎不表达，而在多种肿瘤组织中有不同频率的表达，且可诱导抗体介导和T细胞介导的免疫反应。基于其在肿瘤患者及正常组织中的表达特点和免疫原性，CT抗原已被认为是有应用前景的人类恶性肿瘤免疫治疗的靶标，并有可能成为重要的诊断和预后标志。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种基于多个基因辅助诊断多发性骨髓瘤患者的定量检测试齐U盒。本专利技术提供了一种辅助诊断多发性骨髓瘤患者的试剂盒，包括引物探针组合物甲、引物探针组合物乙和引物探针组合物丙；所述引物探针组合物甲由特异性引物对甲和探针甲组成；所述引物探针组合物乙由特异性引物对乙和探针乙组成；所述引物探针组合物丙由特异性引物对丙和探针丙组成；所述特异性引物对甲为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述探针甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示； 所述特异性引物对乙为序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA组成的引物对； 所述探针乙的核苷酸序列如序列表的序列6所示；所述特异性引物对丙为序列表的序列7 所示DNA和序列表的序列8所示DNA组成的引物对；所述探针丙的核苷酸序列如序列表的序列9所示。所述试剂盒具体可由所述引物探针组合物甲、所述引物探针组合物乙和所述引物探针组合物丙组成。所述试剂盒还可包括引物探针组合物丁 ；所述引物探针组合物丁由特异性引物对丁和探针丁组成；所述特异性引物对丁为序列表的序列10所示DNA和序列表的序列11所示DNA组成的引物对；所述探针丁的核苷酸序列如序列表的序列12所示。所述试剂盒具体可由所述引物探针组合物甲、所述引物探针组合物乙、所述引物探针组合物丙和所述弓I物探针组合物丁组成。所述试剂盒还可包括阳性质粒甲、阳性质粒乙和阳性质粒丙；所述阳性质粒甲为含有MAGE-C1/CT7基因(NCBI基因库序列号匪_00546幻或其片段的重组质粒；所述阳性质粒乙为含有MAGE-A3基因(NCBI基因库序列号匪_00536幻或其片段的重组质粒；所述阳性质粒丙为含有MAGE-C2/CT10基因(NCBI基因库序列号匪_016对钔或其片段的重组质粒。所述试剂盒还可可包括阳性质粒丁 ；所述阳性质粒丁为含有SSX-2基因(NCBI基因库序列号NM_175698/003147)或其片段的重组质粒。所述阳性质粒甲可为含有序列表的序列13所示的MAGE-C1/CT7基因片段的重组质粒。所述阳性质粒乙可为含有序列表的序列14所示的MAGE-A3基因片段的重组质粒。所述阳性质粒丙可为含有序列表的序列15所示的MAGE-C2/CT10基因片段的重组质粒。所述阳性质粒丁可为含有序列表的序列16所示的SSX-2基因片段的重组质粒。所述阳性质粒甲具体可为将pMDIS-T载体与序列表的序列13所示的MAGE-C1/CT7 基因片段连接得到的重组质粒。所述阳性质粒乙具体可为将PMD18-T载体与序列表的序列 14所示的MAGE-A3基因片段连接得到的重组质粒。所述阳性质粒丙具体可为将pMD18_T载体与序列表的序列15所示的MAGE-C2/CT10基因片段连接得到的重组质粒。所述阳性质粒丁具体可为将PMD18-T载体与序列表的序列16所示的SSX-2基因片段连接得到的重组质粒。所述试剂盒还可包括针对内参基因的内参引物对和内参探针；所述内参基因为 ABL基因(NCBI基因库序列号NM_005157)。所述内参引物对具体可为序列表的序列17所示DNA和序列表的序列18所示DNA 组成的引物对；所述内参探针的核苷酸序列具体可如序列表的序列19所示。所述试剂盒还可包括内参质粒；所述内参质粒为含有ABL基因或其片段的重组质粒。所述内参质粒可为含有序列表的序列20所示的ABL基因片段的重组质粒。所述内参质粒具体可为将PMD18-T载体与序列表的序列20所示的ABL基因片段连接得到的重组质粒。所述引物探针组合物甲、所述引物探针组合物乙和所述引物探针组合物丙可用于制备辅助诊断多发性骨髓瘤的试剂盒。所述引物探针组合物甲、所述引物探针组合物乙、所述引物探针组合物丙和所述引物探针组合物丁可用于制备辅助诊断多发性骨髓瘤的试剂盒。对42例匪患者跟踪样本的检测发现，在表达某一 CT抗原基因且治疗无效患者中其MAGE-C1/CT7、MAGE-A3、MAGE-C2/CT10基因皆100%持续表达，在治疗有效患者中仍有 50%持续表达至少这三种基因之一，而SSX-2基因的表达则不稳定。MAGE-C 1/CT7.MAGE-A3 和MAGE-C2/CT10基因的阳性率、表达水平以及共表达的阳性基因数均与MM患者骨髓浆细胞数显著相关，基因的表达变化与患者临床病程一致，其中MAGE-C1/CT7基因的变化有统计学意义。MAGE-C1/CT7、MAGE-A3及MAGE-C2/CT10基因表达水平和共表达的阳性基因数与多项有预后意义的临床指标显著相关，且基因的高水平表达与患者生存时间缩短，总体生存率下降有关。SSX-2基因虽然与多项临床指标没有直接关联，但可以作为以上三种基因的补充，增加检测MM病人的灵敏性。 MAGE-C 1/CT7、MAGE-A3、MAGE-C2/CT 10 和 SSX-2 基因的表达水平是潜在的 MM 辅助诊断、预后评估及疗效监测的有意义的临床指标。本专利技术对于深入了解MM的发病机制，认识其发生发展规律，提高我国MM诊治水平具有重要的价值，也为寻求新的MM靶向治疗策略奠定基础。本专利技术的试剂盒，不仅可以应用于定性辅助诊断多发性骨髓瘤，还可以通过内参基因，测定患者各个基因的表达水平。本专利技术为多发性骨髓瘤的诊断提供了一条快速、可靠、准确的新途径，为疗效观察、微小残留病的动态观察提供依据。本专利技术将在医学检测领域发挥重要作用。附图说明 图1为内参对照质粒RQ-PCR荧光标准曲线。图2为阳性对照质粒甲的RQ-PCR荧光标准曲线。图3为阳性对照质粒乙的RQ-PCR荧光标准曲线。图4为阳性对照质粒丙的RQ-PCR荧光标准曲线。图5为高表达MAGE-C1/CT7基因的多发性骨髓瘤患者(志愿者)的cDNA的RQ-PCR 荧光标准曲线。图6为各个基因表达量与浆细胞数和⑶38+/⑶138+浆细胞数的相关性结果。图7为各个基因的表达量与患者生存时间的相关性结本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种辅助诊断多发性骨髓瘤患者的试剂盒，包括引物探针组合物甲、引物探针组合物乙和引物探针组合物丙；所述引物探针组合物甲由特异性引物对甲和探针甲组成；所述引物探针组合物乙由特异性引物对乙和探针乙组成；所述引物探针组合物丙由特异性引物对丙和探针丙组成；所述特异性引物对甲为序列表的序列１所示ＤＮＡ和序列表的序列２所示ＤＮＡ组成的引物对；所述探针甲的核苷酸序列如序列表的序列３所示；所述特异性引物对乙为序列表的序列４所示ＤＮＡ和序列表的序列５所示ＤＮＡ组成的引物对；所述探针乙的核苷酸序列如序列表的序列６所示；所述特异性引物对丙为序列表的序列７所示ＤＮＡ和序列表的序列８所示ＤＮＡ组成的引物对；所述探针丙的核苷酸序列如序列表的序列９所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄晓军，阮国瑞，刘开彦，江滨，陈珊珊，张瑶，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：11
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