本发明专利技术提供了一种双孢蘑菇333号菌株SCAR-PCR鉴定方法，其特征在于：利用SCAR分子标记对双孢蘑菇333号菌株进行PCR扩增。本发明专利技术的方法用于特异性地鉴别出双孢蘑菇333号菌株，该方法耗时短，操作简便，特异性强，只针对蘑菇333特异性扩增出389bp的产物，可以更大地保护双孢蘑菇的菌种资源。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种针对双孢蘑菇品种的特异性SCAR-PCR检测方法，更具体涉及一种双孢蘑菇333号菌株的特异性SCAR-PCR检测方法。
技术介绍
双孢蘑菇(Agaricus bisporus)属蘑菇科蘑菇属，别名蘑菇、洋蘑菇、白蘑菇。其味道鲜美，质地脆嫩，属高蛋白低脂肪的营养食品。经常食用双孢蘑菇，可以防止坏血病、预防肿瘤，促进伤口愈合和解除铅、砷、汞等的中毒，兼有补脾、润肺、理气、化痰之功效，能防止恶性贫血，改善神经功能，降低血脂。我国是食用蘑菇生产大国，但是食用蘑菇的菌种互相串弓丨，流通量大使得菌种市场的管理比较混乱，同物异名、同名异物的现象较为普遍，品种知识产权得不到有效保护。 自DNA双螺旋结构发现以来，伴随着分子生物学的发展许多生物技术已经用于食用蘑菇的分类鉴定研究。目前，常用的技术有随机扩增多态性DNA(RAPD)、限制性片段长度多态性 (RFLP)、序列特异扩增区域(SCAR)、ITS序列分析等。继同核不育单孢分离物配对杂交育种、原生质体融合等细胞水平的育种技术之后，双袍蘑菇的遗传育种已达到分子水平，其成果主要有同工酶电泳法鉴定种性，染色体混合标记连锁图的建立，纤维素酶、漆酶基因的克隆，性因子的定位等。而每个成果的取得都离不开各种遗传标记在该物种研究上的应用及不断更新。随机扩增多态DNA (RAPD)技术在生命科学的许多研究领域已得到广泛应用，包括遗传多态性研究、分类研究、遗传关系分析、某些特定基因标记、作连锁图谱等。这种以 PCR反应为基础的技术克服了同工酶和RELP技术的一些缺点，具有快速、安全、简便、灵敏度高、需样量少的特点。该方法可用于鉴定不同类型的菌株，而不能对同一菌株进行检测。各国对本国特产物种的保护已经成为国际贸易技术壁垒的新趋势。为了使得我国农产品物种资源免遭国外侵犯，对双孢蘑菇菌种资源权益保护，势在必行。因此建立双孢蘑菇菌种鉴别技术，十分必要。序列特异扩增区域(SCAR)的PCR扩增技术已被应用于香菇等食用菌菌种的鉴别， 但在双孢蘑菇菌株鉴别上的应用，尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术基于分子标记技术，建立一种双孢蘑菇333号菌株的SCAR-PCR鉴定方法。本专利技术的蘑菇333由福建省蘑菇菌种研究推广站提供，该菌种是目前国内主栽菌株，具有较强的适应能力，我国不管南方、北方都栽培有较大的面积。本专利技术的一种双孢蘑菇333号菌株的特异性SCAR-PCR鉴定方法，是利用SCAR分子标记对双孢蘑菇333号菌株进行PCR扩增。利用特异引物对蘑菇333的基因组DNA进行SCAR-PCR扩增，能特异性地扩增出 389 bp的产物；所述特异引物的核苷酸序列为MR333-F :5’ - AGGAAGGAAAGCACCAAATGG -3，； MR333-R 5' - CGCAACCCGTATTCAACTCC -3，。所述SCAR-PCR扩增的条件为94°C预变性5 min, 94°C变性1 min,退火68. 0°C 1 min，72°C延伸1 min，40个循环，最后72°C延伸10 min，4°C保存。反应体系为10 X Taq buffer 2.0 μ L，7 《酶 1. 5 U，模板 DNA 100 ng，MgCl2 3.5 mmol/L, dNTPs 300 μ mol/L, 上游引物0.5 ymol/L，下游引物0. 5 口11101/1，用(1(1!120将总体积补至2(^1^本专利技术的方法用于特异性地鉴别出双孢蘑菇333号菌株，该方法耗时短，操作简便，特异性强，只针对蘑菇333特异性扩增出389 bp的产物，可以更大地保护双孢蘑菇的菌种资源。附图说明图1为40个双孢蘑菇SCAR-PCR扩增产物图谱。 具体实施例方式试剂来源10 X Taq buffer与7 《酶、dNIPs购自上海生工有限公司，引物委托上海生工有限公司合成，DNA序列委托广州英韦创建生物科技有限公司测试。1.引物合成根据SRAP-PCR扩增产物序列，应用I^rimer Premier 5. 0自动设计了 SCAR引物，并用 Oligo 6进行分析评价。共设计了 5对引物，成功扩增出PCR产物的只有1对，序列如表1。表1 SCAR-PCR引物及其退火温度权利要求1.一种双孢蘑菇333号菌株SCAR-PCR鉴定方法，其特征在于利用SCAR分子标记对双孢蘑菇333号菌株进行PCR扩增。2.根据权利要求1所述的双孢蘑菇333号菌株SCAR-PCR鉴定方法，其特征在于利用特异引物对蘑菇333的基因组DNA进行SCAR-PCR扩增；所述特异引物的核苷酸序列为MR333-F :5’ - AGGAAGGAAAGCACCAAATGG -3，；MR333-R 5' - CGCAACCCGTATTCAACTCC -3，。3.根据权利要求2所述的双孢蘑菇333号菌株SCAR-PCR鉴定方法，其特征在于利用所述特异引物对蘑菇333的基因组DNA进行SCAR-PCR扩增，特异性地扩增出389 bp的产物。4.根据权利要求2所述的双孢蘑菇333号菌株SCAR-PCR鉴定方法，其特征在于所述 SCAR-PCR扩增的条件为94°C预变性5 min，94°C变性1 min，退火68. 0°C 1 min，72°C延伸 1 min，40个循环，最后72°C延伸10 min，4°C保存。5.根据权利要求2所述的双孢蘑菇333号菌株SCAR-PCR鉴定方法，其特征在于所述 SCAR-PCR扩增的反应体系为10 X Taq buffer 2.0 μ LJa《酶 1.5 U，模板DNA 100 ng, MgCl2 3.5 mmol/L,dNTPs 300 μ mol/L，上游引物 0. 5 μ mol/L，下游引物 0. 5 ymol/L，用 ddH20将总体积补至20 μ L0全文摘要本专利技术提供了一种双孢蘑菇333号菌株SCAR-PCR鉴定方法，其特征在于利用SCAR分子标记对双孢蘑菇333号菌株进行PCR扩增。本专利技术的方法用于特异性地鉴别出双孢蘑菇333号菌株，该方法耗时短，操作简便，特异性强，只针对蘑菇333特异性扩增出389bp的产物，可以更大地保护双孢蘑菇的菌种资源。文档编号C12Q1/04GK102242208SQ20111018590公开日2011年11月16日 申请日期2011年7月5日 优先权日2011年7月5日专利技术者江树勋, 邵碧英, 陈文炳 申请人:福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种双孢蘑菇３３３号菌株ＳＣＡＲ－ＰＣＲ鉴定方法，其特征在于：利用ＳＣＡＲ分子标记对双孢蘑菇３３３号菌株进行ＰＣＲ扩增。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈文炳，邵碧英，江树勋，
申请(专利权)人：福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：35
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