本发明专利技术涉及一种伯克氏菌的制备及其在高效溶磷微肥中的应用，其特征在于具体步骤如下：（1）采集种植玉米的贫磷土壤放入塑料袋中，置于4℃的冰箱保存；（2）菌株（伯克氏菌）的分离及筛选；（3）伯克氏菌溶磷能力的测定；（4）菌株的鉴定：对筛选获得的菌株进行了DNA测序和16SrRNA系统发育树构建，鉴定为伯克氏菌。其对壤难溶性磷活化的活化率可以达到10.94%～13.03%，P素利用率达到21.75%－37.98%，在玉米上应用可减少三分之一的磷肥用量。溶磷微生物肥料具有成本低、效果好、增强植物抗病能力、不污染环境、充分利用潜在磷素资源等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种伯克氏菌的制备及其在高效溶磷微肥中的应用，是一种磷素肥料增效剂，属于现代农业科学
中的土壤培肥技术。
技术介绍
磷是一切生命存在的必需元素。在土壤一植物一动物生态系统中，磷是不可替代的营养元素，没有磷就没有细胞，没有植物，没有粮食，没有人类社会的可持续性发展。作为植物生长必需的三大营养元素之一，由于磷肥施入土壤后，90%左右的有效磷与土壤中的钙、铁、铝等固定成溶解性极低的磷酸化合物，植物很难吸收利用，当季植物利用率仅为 5% 25%。而土壤和作物根际存在大量能够溶解难溶性磷酸盐的微生物。向土壤接种这些溶磷菌，能够活化土壤难溶性磷和提高化学磷肥的利用率，显著地增强土壤供磷能力，增加作物吸收磷量，提高作物生物量和产量。近十几年来，随着农业生产的不断发展，农业生产对磷肥的需求日益增大。但是由于农田大量施用化肥，导致土壤中有机肥和无机肥的比例严重失调，土壤板结及恶化也越来越严重，土壤产出能力下降。因此，开辟新肥源，发展微生物肥料已成为当务之急。除了人工施用化学磷肥以外，施用能够分解土壤中难溶态磷的微生物，使其在作物根际形成一个磷素供应较充分的微区，改善作物磷元素的供应，也是一个重要途径。溶磷微生物自1903年被发现与报道以来，至今已有100多年的研究历史。前苏联研究者上世纪50年代就从土壤中筛选出溶磷菌株，并命名为解磷巨大芽抱杆菌iBacillus megatherium var. phosphaterium),远销到美国和埃及研究其效果。但其效果仅仅局限于无土栽培和小面积栽培，当施用到大面积栽培环境时，其效果甚微，而且在不同区域得到不同的结果。所以说溶磷菌肥料发展不快，应用还不普遍，其中最主要的是溶磷微生物种类多，分解机制不尽相同且复杂，虽然有一些研究，但不够深入，溶磷机理不十分明确，施入土壤后的消长动态，溶磷作用发挥的条件不十分了解。目前就土壤固定态P的微生物利用和转化研究中，对土壤微生物溶解难溶性磷酸盐的机制有几种认识，但都不能成为定论。其研究都是针对个别微生物，缺乏对整个溶磷微生物菌群的全面认识，研究的内容和深度还很不够。溶磷微生物与环境间相互作用的研究有待于进一步拓展。因此，针对有效磷缺乏、土壤潜在磷源丰富的现状，筛选高效解磷微生物，研制解磷微生物肥料并应用于农业生产，充分利用土壤潜在磷源，这对于缓解磷资源短缺、减少环境污染、发展持续高效高产农业具有深远的战略意义，也是国内外土壤肥料及植物营养学界研究的热点之一。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种伯克氏菌的制备。本专利技术的另一个目的在于提供一种伯克氏菌在制备高效溶磷微肥中的应用，其作为微肥用于玉米生长促进剂，不仅能改善植物磷素营养，还能促进土壤中有益微生物的代谢活动，显著改善植物根部营养，达到增产效果；利用微生物来活化土壤固定态磷和提高化学磷肥利用率，无疑是节约资源、保护环境行之有效的方法。本专利技术的技术方案是这样实现的1、伯克氏菌的制备，其特征在于具体步骤如下土壤样本的采集采集种植玉米的贫磷土壤放入塑料袋中，置于4°C的冰箱保存；菌株 (伯克氏菌)的分离及筛选，筛选培养基葡萄糖10. 0克，(NH4)2SO4 0. 5克，NaCl 0. 3克，KCl 0. 3 克，MgSO4 · 7Η20 0. 3 克，FeSO4 .7H2O 0. 03 克，MnSO4 · 4Η20 0. 03 克，( (PO4) 2 10. 0 克， 酵母粉0. 5 g琼脂粉15 g，PH值7.0 7. 2，水1000 mL ；在121°C条件下灭菌20min然后制作平板固体培养基备用；将土壤样品在无菌条件下分别进行10倍梯度稀释，制成10 — 1 10一6系列稀释液，然后分别取0. 1 mL不同稀释度的样品以平板划线法涂布于以上制作的筛选平板培养基二8°C培养3 d后，选取产生透明圈(溶磷圈)较大的菌落转接到溶磷平板培养上，菌株纯化后，挑出，斜面保藏；伯克氏菌溶磷能力的测定以上述溶磷培养基为主要成分制作液体培养基，然后分别量取100 mL分装在250 mL三角瓶中，加入1 mL已培养24 h的菌液，28° C 30° C，120 r/min摇床培养，分别在48 h、72 h、96 h及120 h， 取上清液进行钼锑抗比色法测定菌株溶解无机磷能力；菌株的鉴定对筛选获得的菌株进行了 DNA测序和16S rRNA系统发育树构建，鉴定为伯克氏菌，其序列见附件；伯克氏菌在溶磷微肥的应将能够活化和溶解土壤多种难溶磷、提高磷肥利用率的伯克氏菌进行菌体发酵培养成一级种子液，然后通过二、三级扩繁培养制备发酵液(发酵液的菌体密度为2亿 /ml)，最后选择适宜的载体和稳效助剂进行吸附制备固体溶磷生物肥料(溶磷固体肥料的菌数含量为2亿/克)，或者在液体发酵液中加入乳化剂和分散剂制成液面喷施的溶磷生物肥料产品；该产品在农作物上应用具有促进作物生长、提高磷肥利用率和增加作物产量的功能。本专利技术的积极效果是对壤难溶性磷活化的活化率可以达到10. 94% 13. 03%, P素利用率达到21. 75% - 37. 98%，在玉米上应用可减少三分之一的磷肥用量；溶磷微生物肥料具有成本低、效果好、增强植物抗病能力、不污染环境、充分利用潜在磷素资源等优点。附图说明图1为土壤中筛选的伯克氏菌产生的溶磷圈。图2为伯克氏菌生产的葡聚糖酸的高效液相色谱图。具体实施例方式下面结合附图和实施例对本专利技术做进一步的描述 实施例1 (一)高效溶磷微生物菌株的筛选及鉴定 1、菌株的筛选从我省中部地区采取种植玉米的土壤样品，用稀释平板分离法，在无菌操作条件下取土样lg，用无菌水以10倍梯度稀释成 ο—1 10_6稀释液，取稀释液0. ImL涂布基础培养基平板观°C培养，分离筛选到功能菌株M株(表1)。2、菌株溶磷能力的测定以磷酸钙为唯一磷源，对分离筛选的菌株进行溶磷能力测定。结果表明，分离获得的菌株58. 3的菌株具有较强的综合能力(如图1所示)，其中溶磷能力最强的是来源于黑土的14号和M号菌株，其次是来源于黑土的15、16、17、18号菌株和来源于黑钙土 22号菌株(如表1)。以磷酸钙为磷源上形成的溶磷圈说明筛选的菌株具有较强的溶磷效果(如图 2所示)。总体趋势是长期不施磷肥的土壤中溶磷菌的活性较强。3、菌株的鉴定分别对综合能力较强的4、5、12、13、、14、18和24号菌株进行了 DNA测序和16S rRNA系统发育树构建，分别鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain Q1)、苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis serovar kurstaki strain AR-10)、焚光假单胞菌 (Pseudomonas fluorescens PfO—1)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus 生产禁用菌)、伯克金氏菌(Burkholderia sp. CEB01056)、Oxalobacteraceae bacterium NR186 禾口肠杆菌 (Enterobacter ludwigii strain K9)(如表 1)。( 二)溶磷菌发酵在玉米上的施用效果及其对磷素效率的影响 (1)溶磷生物肥料对玉米产量及生物学性状的影响分别在吐丝期本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．伯克氏菌的制备，其特征在于具体步骤如下：土壤样本的采集：（１）采集种植玉米的贫磷土壤放入塑料袋中，置于４℃的冰箱保存；（２）菌株（伯克氏菌）的分离及筛选，筛选培养基：葡萄糖１０．０克，（ＮＨ４）２ＳＯ４ ０．５克，ＮａＣｌ ０．３克，ＫＣｌ ０．３克，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．３克，ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．０３克，ＭｎＳＯ４·４Ｈ２Ｏ ０．０３克，Ｃａ３（ＰＯ４）２ １０．０克，酵母粉 ０．５ ｇ 琼脂粉 １５ ｇ， ＰＨ值７．０～７．２，水 １０００ ｍＬ；在１２１℃条件下灭菌２０ｍｉｎ然后制作平板固体培养基备用；将土壤样品在无菌条件下分别进行１０倍梯度稀释，制成１０－１～１０－６系列稀释液，然后分别取０．１ｍＬ不同稀释度的样品以平板划线法涂布于以上制作的筛选平板培养基，２８℃培养３ｄ后，选取产生透明圈（溶磷圈）较大的菌落转接到溶磷平板培养上，菌株纯化后，挑出，斜面保藏；（３）伯克氏菌溶磷能力的测定：以上述溶磷培养基为主要成分制作液体培养基，然后分别量取１００ ｍＬ分装在２５０ ｍＬ三角瓶中，加入１ ｍＬ已培养２４ ｈ的菌液，２８°Ｃ～３０°Ｃ，１２０ ｒ／ｍｉｎ摇床培养，分别在４８ ｈ、７２ ｈ、９６ ｈ及１２０ ｈ，取上清液进行钼锑抗比色法测定菌株溶解无机磷能力；（４）菌株的鉴定：对筛选获得的菌株进行了ＤＮＡ测序和１６Ｓ ｒＲＮＡ系统发育树构建，鉴定为伯克氏菌。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴海燕，金荣德，刘淑霞，范作伟，高星爱，陈宝玉，刘春光，于雷，盖嘉慧，李明姝，王洪君，王巍巍，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，
类型：发明
国别省市：82
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