一种靶向长循环的高分子脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种靶向长循环的高分子脂质体及其制备方法。即通过PEG和RGD对γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐(OQPGA)进行修饰得到PEG-OQPGA和RGD-OQPGA，并与胆固醇通过反相蒸发法或薄膜分散法组装，制备得到一种靶向长循环的高分子脂质体，其粒径介于80～150nm，Zeta电位为5～7mV。通过本技术得到的新型高分子脂质体具有粒径均一、分散性好、Zeta电位低、体内长循环性和肿瘤靶向性的优点，在水溶液中稳定性好，适于长期保存。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于药物

技术介绍
脂质体是单层或多层脂质双分子膜以同心圆的形式包封而成的微球体。由于脂质体的膜材与细胞膜的成分很相似，因此与细胞的亲和能力较强，可通过内吞作用被细胞吞噬，或通过与细胞膜的融合作用进入细胞。将一些不稳定、易氧化的药物包封在脂质体中，不仅可以保护药物在进入病灶部位前免受机体酶的分解，提高其稳定性，而且可以保持药物在血液中的有效浓度，实现长期持续的释放，因此脂质体在药物载体和基因载体领域受到越来越广泛的关注。但是以卵磷脂和胆固醇制备的常规脂质体在体内多被网状内皮系统 (reticuloendothelial system, RES)吞卩遼,在血液循环中驻留时间较短。并且其物理化学稳定性差，储存和应用过程中容易发生融合聚集，疏水性药物包封率低，包封药物容易泄漏；表面官能团少，不易进行功能修饰，无靶向性、功能单一等。因此，开发新型脂质体的研究备受关注。专利CN102058534A使用一种双亲性高分子Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐(OQPGA)，代替传统脂质体中的组分卵磷脂，与胆固醇组装制得了一种新型的高分子脂质体。该脂质体原料易得、组装简便，长期放置仍然具有稳定的粒径和电位。但是该脂质体在生理条件下具有较强的正电性，在正常细胞和病变细胞均有分布，缺少对病灶部位的靶向性，而且容易被网状内皮系统(reticuloendothelial system, RES)捕捉,在血液循环中的驻留时间较短。聚乙二醇(PEG)是一种常用的药用辅料，良好的水溶性使得其常常作为难溶药物的助溶剂从而增加药物的体内生物利用度，而且PEG可以延长药物在体内的释放时间，主药与PEG组成的耦合体进入体内会因酶的作用而慢慢降解，主药从PEG的羟基上缓慢脱落进入血液循环从而可延时释放。α νβ 3整合素在各种肿瘤细胞及新生血管内皮细胞上有高表达，RGD多肽可特异性地识别这些整合蛋白受体，从而提高对肿瘤部位的靶向性。将RGD肽连接在药物载体上不仅可以使药物集中在病灶部位发生作用，而且可以降低使用剂量，减少药物的毒副作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种表面正电位低，粒径均匀同时具有靶向和长循环功能的新型高分子脂质体及其制备方法，这种高分子脂质体表面带有PEG和RGD多肽。本专利技术首先对Υ -聚谷氨酸十八烷基季铵盐(OQPGA)进行修饰，将PEG和RGD肽连接到聚合物上，然后将功能化后的OQPGA与胆固醇通过反相蒸发法或薄膜分散法组装，制备得到这种新型高分子脂质体。如图3透射照片所示，其粒径均匀，分散性好，且具有明显的层状脂质体结构。如图4粒度测试结果所示，其有效粒径为99. 8nm，且多分散度较小。如图5的Zeta电位分析图所示,该脂质体具有较低的Zeta正电位。本专利技术的技术方案如下一种靶向长循环的高分子脂质体，其特征是PEG修饰的Y-聚谷氨酸十八烷基季铵盐和RGD肽修饰的Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐，共同和胆固醇组装得到的阳离子高分子脂质体，其粒径在80nm 150nm之间，表面Zeta电位为5 7mV。PEG修饰的Y-聚谷氨酸十八烷基季铵盐，其特征是将PEG接枝到Y-聚谷氨酸十八烷基季铵盐的侧链上，制备步骤如下 a.将Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐和PEG-2000以质量比为2 4溶解在二氯甲烷里，室温搅拌至固体溶解；b.向上述溶液中加入质量为PEG-2000的I. I I. 5倍的二环己基碳二亚胺，室温搅拌反应24 48小时；c.将上述反应液减压抽滤除去悬浮固体后，用截留分子量为8000 14000的透析袋透析I 2天后真空冻干，即得到纯化的PEG修饰的Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐。RGD肽修饰的Y-聚谷氨酸十八烷基季铵盐，其特征是将RGD接枝到Y-聚谷氨酸十八烷基季铵盐的侧链上，制备步骤如下a.将I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺加入到Y-聚谷氨酸十八烷基季铵盐的二氯甲烷溶液中，二者与Y-聚谷氨酸十八烷基季铵盐的质量比分别为I 4和O. 25 2，室温搅拌18 24小时；b.用旋转蒸发仪除去反应液中的二氯甲烷后，加入乙腈使其溶解，向体系中加入RGD肽，室温下搅拌反应I 3天；c.将得到的反应液用截留分子量为8000 14000的透析袋透析2 4天后真空冻干，即得到RGD肽修饰的Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐。一种靶向长循环的高分子脂质体的制备方法，其特征是将PEG修饰的Y-聚谷氨酸十八烷基季铵盐和RGD肽修饰的Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐(二者质量比为O. 25 2)，与胆固醇通过反相蒸发法或薄膜分散法制备得到，胆固醇的用量与前面两者的质量和之比为O. 5 2。一种靶向长循环的高分子脂质体的制备方法，其特征是采用反相乳液蒸发法时制备步骤如下a.将PEG修饰的Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐、RGD肽修饰的Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐和胆固醇，溶解于二氯甲烷中；b.将上述溶液用超声波细胞粉碎机超声，功率控制在200 250W，并且在超声的过程中加入2 4倍于二氯甲烷体积的去离子水，形成均匀乳液；c.将上述乳液用旋转蒸发仪除去体系中的二氯甲烷，即得到靶向长循环的高分子脂质体。一种靶向长循环的高分子脂质体的制备方法，其特征是采用薄膜分散法时制备步骤如下a.将PEG修饰的Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐、RGD肽修饰的Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐和胆固醇，溶解于二氯甲烷中；b.将上述溶液用旋转蒸发仪除去体系中的二氯甲烷，待反应瓶中形成脂质膜时停止蒸发;c.向上述脂质膜中加入去离子水，超声分散均匀，即得到靶向长循环的高分子脂质体。其中原料可以采用如下方法制备本专利技术所述的OQPGA制备可按照常津等提供的专利方法(申请(专利)号201010563409. 6)进行制备。将Y _聚谷氨酸和二甲基环氧丙基十八烷基氯化铵加入到四口烧瓶中，加入异丙醇搅拌至固体溶解，加热至60 V，冷凝回流反应I天；反应结束后，用旋转蒸发仪将异丙醇蒸出，将产物透析后冻干。本专利技术的有益效果制备过程简单可行，所用原料易得，且反应产率较高。本专利技术涉及的高分子脂质体的性能包括有效粒径在80 150nm之间，粒径分布均匀；Zeta电位在5 7mV，正电性低；表面有PEG和RGD肽修饰，具有体内长循环性和肿瘤靶向性；稳定性好，可在水溶液中稳定保存。附图说明图I :实施例I中制备的PEG修饰的OQPGA的红外谱图；图2 :实施例4中制备的RGD肽修饰的OQPGA的红外谱图；图3 :实施例7中制备的高分子脂质体的透射电镜照片；图4 :实施例10中制备的高分子脂质体的粒径分析图；图5 :实施例12中制备的高分子脂质体的Zeta电位分析图。具体实施例方式下面结合附图对本专利技术的实施例作出详细说明本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，所给出的详细实施方式和过程，是对本专利技术的进一步说明，而不是限制本专利技术的范围。实施例I :制备PEG修饰的Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐将200mg Y -聚谷氨酸十八烷基季铵盐和100mgPEG-2000溶解在二氯甲烷里，室温搅拌至固体溶解，再加入IlOmg 二环己基碳二亚胺，室温搅拌反应24小时，将上述反应液减压抽滤除去悬浮固体后，用截留分子量为8000 14000的透析袋透析I天后真空冻干本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：常津，彭瑶，王生，苏文雅，王汉杰，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：