一种稳定性多肽介导跨屏障膜的脑部肿瘤多重靶向递药系统技术方案

本发明专利技术属药学领域，涉及一种稳定性多肽介导跨多重屏障膜的脑部肿瘤靶向载体系统由稳定性多肽DCDX和c(RGDyK)与脂质体组成，该递药系统为能抵御体内酶屏障、介导跨血脑屏障(BBB)和血脑肿瘤屏障(BBTB)的脑肿瘤多重靶向脂质体递药系统。实验结果显示所述脂质体可将所包载模型药物递送至靶组织，如体外跨BBB并进入下室肿瘤球、体内进入脑胶质瘤，包载阿霉素可延长脑胶质瘤模型动物的生存期，显著提高药物疗效。该稳定性多肽修饰的多重靶向脂质体递药系统在脑部肿瘤的诊治方面具备良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属药学领域，涉及一种稳定性多肽修饰的多重靶向递药的脂质体载体系统，具体涉及稳定性多肽DCDX其氨基酸序列为GDRDEDIDRDTGDRDADEDRDWDSDEDKDF和c(RGDyK)共同修饰的抵御体内酶屏障、跨血-脑屏障和血-脑肿瘤屏障的脑部肿瘤靶向脂质体载体系统、制备方法及其在制备脑部肿瘤诊治药物中的用途。
技术介绍
研究报道，目前临床实践中脑肿瘤的治疗方案以手术切除为主，辅以放疗和化疗，患者五年生存率较低，脑部肿瘤严重威胁着人类的健康和生命。研究显示，脑作为人体中枢其禁区多，手术难以将肿瘤切除干净，残余肿瘤细胞极易复发，故术后放、化疗尤为重要；但放疗副作用较大，易导致患者生活质量降低，而化疗药物又难以入脑而限制其药效，因此，脑部肿瘤的化疗药物靶向递送已成为目前本
关注的热点。近年来，靶向递药系统研究已取得一定进展，但由于脑部特殊环境脑肿瘤靶向治疗仍存在诸多问题。在肿瘤发生早期，肿瘤细胞通过脑毛细血管供给营养，血-脑屏障(BBB)完整，BBB是一个由脑微血管内皮细胞、星形胶质细胞和周细胞共同构成的结构、功能和酶屏障，它能够选择性地输送营养物质和必需内源性物质入脑，并排出脑内毒性代谢物和入脑的外源性物质，维持大脑内环境的稳定。实践显示，BBB的存在使得几乎所有大分子和约98％的小分子药物难以入脑，只有分子质量极小(<400-500道尔顿)、且脂溶性及电中性的分子才能经被动扩散穿过BBB。随着脑肿瘤的发展，肿瘤新生血管形成可导致BBB破坏，但其与外周肿瘤不同，脑肿瘤新生血管相对致密、通透性较差，存在血-脑肿瘤屏障(BBTB)，但部分肿瘤细胞浸润区仍存在完整BBB。随着脑肿瘤进一步恶化，肿瘤部位出现EPR效应，但其效应明显弱于外周实体瘤，人源性脑胶质瘤新生血管的空隙仅为7-100nm。脑肿瘤发展不同阶段存在的屏障膜限制了递药系统到达病灶部位。鉴于BBB上表达多种受体，包括低密度脂蛋白受体、转铁蛋白受体和烟碱型乙酰胆碱受体等，血循环中的多肽配体及其修饰的递药系统可通过受体介导的胞吞转运方式跨越BBB。考虑到体内环境特别是血清及BBB的酶屏障对靶向配体稳定性的影响而可能降低其介导递药系统的靶向效率、D构型多肽具有良好耐受酶降解的优势，本申请的专利技术人前期工作设计合成了一种稳定的脑靶向多肽分子DCDX，与烟碱型乙酰胆碱受体具有高亲和力，可携带递药系统穿透血脑屏障入脑。研究显示BBTB和肿瘤细胞上均高表达整合素，含精氨酸、甘氨酸和天冬氨酸(RGD)序列的多肽能与整合素特异性结合，其中环肽c(RGDyK)具有比线性肽更高的稳定性，可有效介导递药系统靶向BBTB和肿瘤细胞。因此，本申请的专利技术人拟针对脑肿瘤发展不同阶段存在的屏障膜，考虑到体内酶环境影响靶向多肽分子稳定性而可能降低其介导递药系统的靶向效率，提供一种由稳定性多肽分子DCDX和c(RGDyK)共修饰的跨多重屏障膜的脑肿瘤靶向递药系统，利用该靶向递药系统具有的多重靶向及跨越多重屏障膜特点，实现各时期脑部肿瘤诊断或治疗药物靶向递送。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对脑肿瘤发展不同阶段存在的屏障膜，考虑到体内酶环境影响靶向多肽分子稳定性而可能降低其介导递药系统的靶向效率，提供一种稳定性多肽修饰的多重靶向递药的脂质体载体系统，该靶向递药系统是由稳定性多肽分子DCDX和c(RGDyK)共修饰的跨多重屏障膜的脑肿瘤靶向递药系统，该靶向递药系统中由稳定性多肽DCDX和c(RGDyK)共同修饰抵御体内酶屏障、介导跨BBB和BBTB多重屏障膜，能实现脑部肿瘤的靶向诊断和治疗。本专利技术利用所述的靶向递药系统具有的多重靶向及跨越多重屏障膜特点，实现各时期脑部肿瘤诊断或治疗药物靶向递送；在脑肿瘤发生的早期及肿瘤浸润生长边缘区域，该递药系统利用第一级靶向分子DCDX与BBB上烟碱型乙酰胆碱受体的特异性结合介导递药系统跨越BBB，通过第二级靶向分子c(RGDyK)与肿瘤细胞上整合素结合而介导递药系统靶向脑肿瘤细胞；随着脑肿瘤的发展而形成BBTB，该载体系统可通过c(RGDyK)与脑肿瘤新生血管上的整合素特异性结合而跨越BBTB，并靶向杀灭肿瘤细胞；通过控制递药系统粒径小于100nm，利用弱EPR效应到达脑肿瘤部位，并以c(RGDyK)介导靶向杀灭肿瘤细胞。具体的，本专利技术的一种稳定性多肽修饰的多重靶向递药的脂质体载体系统，其特征在于，由稳定性多肽DCDX和c(RGDyK)与脂质体组成，所述DCDX氨基酸序列为GDRDEDIDRDTGDRDADEDRDWDSDEDKDF。本专利技术的DCDX和c(RGDyK)共修饰的脂质体递药系统可包载阿霉素、表阿霉素、紫杉醇、多烯紫杉醇、喜树碱、羟基喜树碱、9-硝基喜树碱、长春新碱、硼替唑米、卡啡唑米、甲氨蝶呤、顺铂等小分子抗肿瘤药物；也可包载TRAIL蛋白、LPMI、DPMI、TRAIL基因、siRNA等生物大分子抗肿瘤药物，也可包载异硫氰荧光素FITC，近红外染料Cy5.5、Cy7、IR820、DiR和和磁共振显像剂Gd等诊断药物。本专利技术证明了DCDX和c(RGDyK)的体外血清稳定性和肝溶酶体匀浆稳定性。本专利技术中，脂质体载体系统的膜材料包括以下五种成分：a：天然磷脂或合成的磷脂，和b：胆固醇，和c：甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物(甲氧基聚乙二醇的分子量为1000～5000)，和d：含DCDX序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物(聚乙二醇的分子量为1000～8000)和e：含c(RGDyK)序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物(聚乙二醇的分子量为1000～8000)；各成分之间的摩尔比为a:b＝5:1～1:2，a:c＝1000:1～1000:100，a:d＝1000:1～1000:100，a:e＝1000:1～1000:100。所述的天然磷脂或合成磷脂选自卵磷脂、豆磷脂、氢化大豆磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、氢化蛋磷脂酰胆碱、蛋黄鞘磷脂、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱；所述的甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物、含DCDX序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物和含c(RGDyK)序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物中的磷脂可以是二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氢化大豆磷脂酰乙醇胺、氢化蛋磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺或蛋磷脂酰乙醇胺；本专利技术中，甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物中甲氧基聚乙二醇分子量为1000～5000，含DCDX序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物中聚乙二醇分子量为1000～8000，含c(RGDyK)序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物中聚乙二醇分子量为1000～8000；所述的甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物和含DCDX序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物和含c(RGDyK)序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物中的磷脂选自二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、氢化大豆磷脂酰乙醇胺、氢化蛋磷脂酰乙醇胺；本专利技术中，含DCDX序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物或含c(RGDyK)序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物的合成通过共价键形式与聚乙二醇-磷脂连接成复合物：DCDX或c(RGDyK)序列多肽提供一个游离巯基，聚乙二醇-磷脂提供一个马来酰亚胺基，两者通过马来酰亚胺基团与巯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定性多肽修饰的多重靶向递药的脂质体载体系统，其特征在于，由稳定性多肽DCDX和c(RGDyK)与脂质体组成，所述DCDX氨基酸序列为GDRDEDIDRDTGDRDADEDRDWDSDEDKDF。

【技术特征摘要】
1.一种稳定性多肽修饰的多重靶向递药的脂质体载体系统，其特征在于，由稳定性多肽DCDX和c(RGDyK)与脂质体组成，所述DCDX氨基酸序列为GDRDEDIDRDTGDRDADEDRDWDSDEDKDF。2.按权利要求1所述的稳定性多肽修饰的多重靶向递药的脂质体载体系统，其特征在于，所述的脂质体其膜材料选自：a：天然磷脂或合成的磷脂，和b：胆固醇，和c：甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物，和d：含DCDX序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物，和e：含c(RGDyK)序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物；所述脂质体膜材料的摩尔比为a:b＝5:1～1:2，a:c＝1000:1～1000:100，a:d＝1000:1～1000:100，a:e＝1000:1～1000:100。3.按权利要求2所述的稳定性多肽修饰的多重靶向递药的脂质体载体系统，其特征是，所述的天然磷脂或合成磷脂选自卵磷脂、豆磷脂、氢化大豆磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、氢化蛋磷脂酰胆碱、蛋黄鞘磷脂、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱。4.按权利要求2所述的稳定性多肽修饰的多重靶向递药的脂质体载体系统，其特征是所述的甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物中甲氧基聚乙二醇分子量为1000～5000，含DCDX序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物中聚乙二醇分子量为1000～8000，含c(RGDyK)序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物中聚乙二醇分子量为1000～8000。5.按权利要求2所述的稳定性多肽修饰的多重靶向...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆伟跃，魏晓丽，占昌友，谢操，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31