FGF脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种FGF脂质体的制备方法，其包括以下步骤：将磷脂和胆固醇溶解于叔丁醇中，形成脂质体透明溶液；将冻干保护剂溶于去离子水中，得到冻干保护剂水溶液；均匀混合所述脂质体透明溶液与所述冻干保护剂水溶液，得到脂质体叔丁醇/水共溶液；冷冻干燥所述脂质体叔丁醇/水共溶液，得到冻干脂质体固体；将FGF蛋白溶于3%甘油水溶液中，得到FGF甘油水溶液；再与所述冻干脂质体固体混合，经过整粒处理，得到包含有FGF脂质体和游离FGF蛋白的悬浮液；再进行分离处理得到FGF脂质体颗粒。本发明专利技术还提供一种FGF脂质体。该FGF脂质体可以保证其中的FGF蛋白具有更好的稳定性和皮肤吸收效果细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种纳米脂质体及其制备方法，尤其涉及一种成纤维细胞生长因子（(FibroblastGrowthFactor，缩写：FGF）脂质体及其制备方法。
技术介绍
FGF是一种多功能强力的细胞因子，其包括酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）或碱性成纤维细胞生长因子（bFGF），可促进各种组织损伤的修复，改善伤口的愈合。而且与表皮生长因子（EGF）相比较，EGF可促进I型胶原的合成，导致瘢痕疙瘩形成；而FGF能通过对αI型前胶原基因表达的下行调节作用，抑制成纤维细胞的胶原合成，减少成纤维细胞的胶原蛋白的过量沉积，有助于防止瘢痕疙瘩的产生。此外，aFGF还可以促进成纤维细胞的代谢和胶原蛋白的形成，对皮肤光泽、滋润、柔软、减皱、祛粉刺、祛色斑、增白、改善皮肤弹性、损伤皮肤修复等方面有重要效果。因此，随着人们生活水平的提高，人们也越来越注重仪容，将FGF应用到生活美容和医学美容领域中是一个重要的研究方向。但是，将FGF应用到美容领域中，需要考虑解决FGF的稳定性、皮肤吸收性以及与其它活性物质的兼容性。脂质体可以将活性成分包裹到脂质体中，而且还可以将活性成分从其中释放出来，从而可以极大提高这些活性成分的稳定性，同时，由于脂质体膜成分与人体细胞生物膜的成分极其接近，因此脂质体的生物相容性好，安全性高。所以，将FGF与脂质体结合形成FGF脂质体，则可以解决FGF应用到美容领域中存在的主要问题。然而，现有的FGF脂质体的稳定性和皮肤吸收性虽然较单独使用FGF有所提高，但其稳定性、皮肤吸收性、安全性等性能还不能满足现有需求，需要进一步提高。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术确有必要提供一种FGF脂质体及其制备方法，以解决上述问题。本专利技术提供一种FGF脂质体的制备方法，其包括以下步骤：制备冻干脂质体固体将磷脂和胆固醇按照2:1～5:1的质量比溶解于叔丁醇中，形成脂质体透明溶液；将冻干保护剂溶于去离子水中，得到冻干保护剂水溶液；均匀混合所述脂质体透明溶液与所述冻干保护剂水溶液，得到脂质体叔丁醇/水共溶液，且该脂质体叔丁醇/水共溶液中的脂质体与冻干保护剂的质量比为1:1～1:4；冷冻干燥所述脂质体叔丁醇/水共溶液，得到冻干脂质体固体；制备悬浮液将FGF蛋白溶于3%甘油水溶液中，得到浓度为0.1～0.5mg/ml的FGF甘油水溶液；再均匀混合所述FGF甘油水溶液与所述冻干脂质体固体，使所述冻干脂质体固体重新水化；然后进行重新整粒处理，得到包含有FGF脂质体颗粒和游离FGF蛋白的悬浮液；分离制备成品将所述FGF脂质体颗粒从所述悬浮液中分离出来，得到FGF脂质体成品。基于上述，所述冻干保护剂水溶液的质量百分浓度为4%～6%。基于上述，在所述制备悬浮液的步骤中，在将所述FGF甘油水溶液与所述冻干脂质体固体混合之后，再采用100nm微孔滤膜进行整粒处理，得到所述悬浮液。基于上述，所述分离制备成品的步骤包括采用超滤离心法、透析法、凝胶柱层析法或超速离心法对所述悬浮液进行处理，以将所述FGF脂质体颗粒和所述游离FGF蛋白进行分离。基于上述，所述磷脂为天然大豆磷脂、氢化磷脂、合成磷脂双肉豆蔻磷脂酰胆碱(DMPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂甘油(DMPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二硬脂酸磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)或聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)。基于上述，所述冻干保护剂为乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、葡萄糖和海藻糖中的一种或多种。基于上述，所述FGF蛋白为bFGF蛋白或者aFGF蛋白。其中，在上述制备FGF脂质体的过程中，各个步骤中所述形成的溶液，比如，所述脂质体透明溶液、所述冻干保护剂水溶液、所述脂质体叔丁醇/水共溶液、所述FGF甘油水溶液等各种溶液都需要进过灭菌处理，其中灭菌处理的方法可以包括0.22μm微孔滤膜过滤处理法或60钴15～20kGy射线照射法等。本专利技术提供的上述FGF脂质体颗粒的制备方法采用叔丁醇作为溶剂溶解磷脂和胆固醇，得到所述脂质体透明溶液，再与所述冻干保护剂水溶液混合，然后经冻干后得到结构疏松的冻干脂质体固体，加入水相后可迅速水化制成脂质体；叔丁醇作为溶剂可溶解由磷脂和胆固醇形成的脂质体，毒性小，且可与水溶液以任意比例混匀，凝固点高，可在冻干机中完全冻结，蒸汽压高，有利于升华，节省冻干时间。而且叔丁醇毒性低，在冻干过程中，大部分叔丁醇可在一次干燥阶段升华，在产品中残留量低，所以，在脂质体制备过程中不需要单独蒸发叔丁醇，从而使得本专利技术提供的上述FGF脂质体的制备方法比较简单。另外，在制备所述FGF脂质体的过程中，采用3%甘油水溶液水化所述冻干脂质体固体，甘油是一种水溶性物质，对机体无毒，因此，在制备过程中无需除去甘油。另外，甘油还可以增加所述FGF脂质体颗粒的稳定性，使得所述FGF脂质体颗粒包裹的FGF蛋白具有更好的稳定性和皮肤吸收效果细胞，使所述FGF脂质体颗粒具有更好的皮肤透过性。本专利技术还提供一种由上述方法制备的FGF脂质体，其包括脂质体颗粒和包裹在该脂质体颗粒中的FGF蛋白。基于上述，所述FGF脂质体的粒径分布范围为50～250nm，平均粒径为130～150nm。因此，本专利技术提供的FGF脂质体颗粒粒径分布范围为50～250nm，且90%以上的FGF脂质体颗粒的粒径小于230nm，而且其平均粒径为130～150nm，保证了该FGF脂质体颗粒包裹的FGF蛋白具有更好的稳定性和皮肤吸收效果细胞，使所述FGF脂质体颗粒具有更好的皮肤透过性，从而使得所述FGF脂质体颗粒可应用于生活美容或医学美容中。此外，本专利技术最终的产品为流动性良好的粉末，便于使用、运输和贮存。另外，本专利技术采用单相溶液冻干-重新水化-挤出法制备所述FGF脂质体颗粒，制备方法简单易操作、可重复性高、且具有较高的包封率与载药量，包封率可达到83.5%～86.4%；原料成分简单无毒，安全稳定。具体实施方式下面通过具体实施方式，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。实施例1本实施例提供一种aFGF脂质体的制备方法，该方法包括以下步骤：将0.4g的大豆卵磷脂和0.1g的胆固醇溶解于10g的叔丁醇中形成大豆卵磷脂透明溶液，然后经过0.22μm微孔滤膜过滤处理，得到无菌大豆卵磷脂脂质体透明溶液；将0.5g的蔗糖溶于去离子水中，得到浓度为5%的蔗糖溶液，然后经过0.22μm微孔滤膜过滤处理，得到无菌蔗糖溶液；混合所述无菌大豆卵磷脂脂质体透明溶液与所述无菌蔗糖溶液，并采用超声匀质处理成匀相，然后反复采用0.22μm微孔滤膜过滤，得到大豆卵磷脂脂质体叔丁醇/水共溶液，且该大豆卵磷脂脂质体叔丁醇/水共溶液中的脂质体与蔗糖的质量比为1:3；将所述大豆卵磷脂叔丁醇/水共溶液进行冷冻干燥24h，得到冻干大豆卵磷脂固体；将20mg的aFGF蛋白溶于3%甘油水溶液中，过滤除菌，得到浓度为0.2mg/ml的aFGF甘油水溶液；再将所述aFGF甘油水溶液与所述冻干大豆卵磷脂固体混合，使所述冻干大豆卵磷脂固体重新水化；然后采用100nm微孔滤膜进行重新整粒处理，得到包含有aFGF脂质体和游离aFGF蛋白的悬浮液；采用超滤离心法处理所述悬浮液，分离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种FGF脂质体的制备方法，其包括以下步骤：制备冻干脂质体固体 将磷脂和胆固醇按照2:1～5:1的质量比溶解于叔丁醇中，形成脂质体透明溶液；将冻干保护剂溶于去离子水中，得到冻干保护剂水溶液；均匀混合所述脂质体透明溶液与所述冻干保护剂水溶液，得到脂质体叔丁醇/水共溶液，且该脂质体叔丁醇/水共溶液中的脂质体与冻干保护剂的质量比为1:1～1:4；冷冻干燥所述脂质体叔丁醇/水共溶液，得到冻干脂质体固体；制备悬浮液 将FGF蛋白溶于3%甘油水溶液中，得到浓度为0.1～0.5 mg/ml的FGF甘油水溶液；再均匀混合所述FGF甘油水溶液与所述冻干脂质体固体，使所述冻干脂质体固体重新水化；然后进行重新整粒处理，得到包含有FGF脂质体颗粒和游离FGF蛋白的悬浮液；分离制备成品 将所述FGF脂质体颗粒从所述悬浮液中分离出来，得到FGF脂质体成品。

【技术特征摘要】
1.一种FGF脂质体的制备方法，其包括以下步骤：制备冻干脂质体固体将磷脂和胆固醇按照2:1～5:1的质量比溶解于叔丁醇中，形成脂质体透明溶液；将冻干保护剂溶于去离子水中，得到冻干保护剂水溶液；均匀混合所述脂质体透明溶液与所述冻干保护剂水溶液，得到脂质体叔丁醇/水共溶液，且该脂质体叔丁醇/水共溶液中的脂质体与冻干保护剂的质量比为1:1～1:4；冷冻干燥所述脂质体叔丁醇/水共溶液，得到冻干脂质体固体；制备悬浮液将FGF蛋白溶于3%甘油水溶液中，得到浓度为0.1～0.5mg/ml的FGF甘油水溶液；再均匀混合所述FGF甘油水溶液与所述冻干脂质体固体，使所述冻干脂质体固体重新水化；然后进行重新整粒处理，得到包含有FGF脂质体颗粒和游离FGF蛋白的悬浮液；分离制备成品将所述FGF脂质体颗粒从所述悬浮液中分离出来，得到FGF脂质体成品。2.根据权利要求1所述的FGF脂质体的制备方法，其特征在于，所述冻干保护剂水溶液的质量百分浓度为4%～6%。3.根据权利要求1或2所述的FGF脂质体的制备方法，其特征在于，在所述制备悬浮液的步骤中，在将所述FGF甘油水溶液与所述冻干脂质体固体混合之后，再采用100nm微孔滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：王学庆，
申请(专利权)人：河南佰柯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41