修饰抗体组合物及其制备和使用方法技术

本发明专利技术提供了含有由掩蔽基团(MM)修饰的抗体或抗体片段(AB)的抗体的修饰抗体。这些修饰抗体可以进一步耦合到一个可裂解基团(CM)，产生激活的抗体(AAS)，其中CM是能够被裂解、还原、光解，或以其他方式修饰。AAs可以表现出激活状态，使AB更易于到达靶点，例如，在能够裂解、还原或光解CM的药剂存在条件下，通过CM的裂解、还原或光解去除MM。本发明专利技术还提供了这种修饰抗体和激活抗体的制备和应用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】修饰抗体组合物及其制备和使用方法交叉引用本申请要求享有于2009年1月12日提交的第61/144110号美国临时申请，2009年1月12日提交的第61/1441105号美国临时申请，2009年10月7日提交的第61/249441号美国临时申请以及2009年10月7日提交的第61/249416号美国临时申请的权益，这些临时申请通过引用全部并入本文中。
技术介绍
以蛋白质为基础的疗法改变了用药的面貌，在各种不同的疾病间发现了各种应用。尤其是以抗体为基础的疗法，已经证明对一些疾病能有效治疗，但是在某些情况下，由于对广泛的靶点表达的毒性限制了其治疗的有效性。然而，对于任何药物，改善其靶点特异性和选择性对药物的需要和需求有极大兴趣，特别是对开发以抗体为基础的结合具有已知靶点的第二代药物。提高抗体对病变的部位靶向性可以减少全身的机制为基础的毒性，并导致更广泛的治疗应用。在小分子药物领域，战略已经发展到提供一个活性化学实体的前体药物。这些前体药物是在一中相对不活泼的(或显着减少活性)的形式供给。一旦供给，前体药物在体内代谢成为活性的化合物。这种药物前体的策略，可以对其预期靶点提供增加的药物选择性并减少不利影响。用于特异性缺氧的肿瘤细胞的药物，通过氧化还原激活的使用，利用存在于缺氧细胞中的大量还原酶将药物转化成其细胞毒素的状态，实质上是使其激活。由于在这种激活之前，前提药物是低毒性的，这显著降低了损害非癌变细胞的风险，从而降低与药物相关的副作用。本领域需要一种为以抗体为基础的疗法提供一种前体药物特性的战略需求。专利技术简述目前披露的规定修改和激活的抗体治疗和诊断的有用成分。激活的抗体成分，表现出更高的生物利用度和生物分布，相比传统的抗体疗法与药物前体的功能。此外，还提供使用在诊断和治疗，以及筛选和建设等组成的方法。在一方面，本专利技术提供了一种修饰过的抗体，包括一种抗体或一种抗体片段(AB)，能专门与其靶点结合，能够与以中掩蔽基团耦合(MM)，其中MM对AB的耦合降低AB与其靶点的结合能力以便使耦合了MM的AB对靶点的裂解常数比没有耦合MM的AB对靶点的裂解常数至少大100倍、至少大1000倍、或者至少大10000倍。在另一方面，本专利技术提供了一种修饰抗体，包括一种抗体或一种抗体片段(AB)，能专门与其靶点结合，能够与以中掩蔽基团耦合(MM)，其中当使用靶点的替代物在体外进行测试时，对比没有耦合MM的AB与其靶点的结合能力，耦合了MM的AB与其靶点的结合能力至少降低90％。这种MM与AB的耦合降低AB与靶点结合能力的时间至少为12小时或至少为24小时或至少为72小时。在另一方面，修饰抗体进一步耦合到一种雷杰基团(CM)。该CM能被酶裂解，或该CM能被一种降低药剂减少，或该CM能被光溶解。该CM能具体地至少在1x104M1S4、或至少在5x104M1S、或至少在10x104M4S的速率下被裂解、减少或光溶解。在一个实施例中，修饰抗体的CM在MM内。在本专利技术提供的抗体中MM对AB的离解常数(Kd)通常比AB对靶点的Kd至少大100倍。一般地，MM对AB的Kd低于10nM，或低于5nM，或低于1nM。在一些实施例中，修饰抗体的MM通过与AB的抗原结合域特异性结合降低AB与其靶点结合的能力。这种结合可以是非供价的。修饰抗体的MM能在allosterically或空间上降低AB与其靶点的结合能力。在具体的实施例中，修饰抗体的MM不能含有多于50％的与AB的天然结合配体相似的氨基酸序列。在具体的实施例中，修饰抗体的AB是选自由Fab′片段、F(ab′)2、scFv、scAB、dAb、单域重链抗体和单域轻链抗体构成的组中的抗体片段。在相关的实施例中，修饰抗体的AB选自表2或AB的来源是西妥昔单抗、帕木单抗、英利昔单抗、阿达木单抗、依法珠单抗、伊匹单抗、tremelimumab(CTLA-4单抗)、阿德木单抗、Hu5c8、阿伦单抗、雷珠单抗、托西莫单抗、替伊莫单抗、利妥昔单抗、英利昔单抗、贝伐珠单抗或figitumumab(IGFR-1抑制剂)。在一个具体的实施例中，修饰抗体不是阿伦单抗。在相关的实施例中，AB的靶点是选自表1中的靶点多构成的组。在典型的实施例中，靶点是EGFR、TNFα、CD1Ia、CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF、CD40、CD20、Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、Jagged1、Jagged2、CD52、MUC1、IGF1R、转铁蛋白、gp130、VCAM-I、CD44、DLL4、或IL4。在一个具体的实施例中，修饰抗体进一步包括一个第二AB，其中该第二AB的靶点是选自表1中的靶点所构成的组。在一个相关的实施例中，CM是一种用于选自表3中的酶所构成的组中酶的底物。在具体的实施例中，CM是一种用于半胱氨酸蛋白酶、纤溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9、MT1-MMP、组织蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人中性粒细胞弹性蛋白酶、β-分泌酶、uPA或PSA的底物。在这样的实施例中，其中修饰过的AB包含一种CM，AB是选自表2中的抗体所构成的组，具体地，选自西妥昔单抗、帕木单抗、英利昔单抗、阿达木单抗、依法珠单抗、伊匹单抗、tremelimumab(CTLA-4单抗)、阿德木单抗、Hu5c8、阿伦单抗、雷珠单抗、托西莫单抗、替伊莫单抗、利妥昔单抗、英利昔单抗、贝伐珠单抗或figitumumab(IGFR-1抑制剂)所构成的组。在一个典型的实施例中，AB不是阿伦单抗。在一个实施例中，其中修饰过的抗体包括一个AB，并与一个CM和一个MM连接。在一个实施例中，靶点是选自表1的靶点所构成的组，或靶点是EGFR、TNFα、CD1Ia、CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF、CD40、CD20、Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、Jagged1、Jagged2、CD52、MUC1、IGF1R、转铁蛋白、gp130、VCAM-I、CD44、DLL4或IL4。靶点不是CD52。修饰蛋白可进一步于一个第二裂解基团连接，能够专门被一种酶修饰。在该实施例中，该第二裂解蛋白是一种天冬酰胺内肽酶、纤溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9，MT1-MMP、组织蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人类中性粒细胞弹性蛋白酶、β-分泌酶、uPA、或PSA的底物。在另一个具体的实施例中，修饰抗体进一步包括一种连接肽，其中该连接肽位于AB和MM之间。或者该修饰过的抗体进一步包括一种连接肽，其中该连接肽位于MM和CM之间。或者该修饰过的抗体进一步包括一种连接肽，其中该连接肽位于AB和CM之间。或者该修饰过的抗体进一步包括两种连接肽，其中第一种连接肽位于AB和CM之间以及第二种连接肽位于MM和CM之间。连接肽是选自一种裂解连接肽、一种非裂解连接肽、一种分支连接肽所构成的组。在某些实施例中，修饰过的抗体进一步包含一种检测基团。在一个具体的实施例中，该检测基团是一种诊断试剂。在一个优选的实施例中，本专利技术所述的修饰过的抗体进一步包含一种与AB结合的试剂，在一方面，该试剂是一种治疗药物，例如一种抗肿瘤药。在这中实施例中试剂与AB的以个碳水化合物基团结合，其中碳水化合物基团位于AB的抗原结合地区的外部。或者试剂与AB的巯基结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.01.12 US 61/144,105;2009.01.12 US 61/144,110;1.一种可激活抗体(AA)包括：一种抗体或其抗原结合片段(AB)，其与一种具有离解常数(Kd)不超过100nM的EGFR特异性结合；一种掩蔽基团(MM)，其可抑制在未裂解状态的可激活抗体的AB与EGFR的结合，其特征在于：(A)所述MM是一种多肽，(B)MM对AB的离解常数(Kd)大于AB对EGFR的离解常数(Kd)，(C)所述MM的多肽序列与EGFR的不同，并且(D)在未裂解状态的可激活抗体的所述MM不干扰或不竞争AB与EGFR结合；一种可裂解基团，其中，所述可裂解基团是一种多肽，其对蛋白酶起一种底物的作用，当可激活抗体暴露于蛋白酶中时，所述蛋白酶裂解在可激活抗体中的可裂解基团，所述蛋白酶在一种组织中与EGFR共存，其中所述可裂解基团是位于可激活抗体从而在未裂解状态下，可激活抗体到靶点上的结合被降低，并且反之在裂解状态下，AB能够连接在靶点存在下的靶点分子；并且一种第一连接肽L1将MM耦合到可裂解基团，并且一种第二连接肽L2将可裂解基团耦合到AB，其中所述第一连接肽是一种1到20个氨基酸长度的肽，其中所述第二连接肽是一种1到20个氨基酸长度的肽，并且其中所述第一连接肽和所述第二连接肽并不需要彼此相同；其中，在未裂解状态的可激活抗体(MM)-L1-(可裂解基团)-L2-(AB)或(AB)-L2-(可裂解基团)-L1-(MM)的从N-端到C-端的结构排列，并且其中对比没有耦合MM的AB与EGFR的结合能力，MM耦合到AB可降低至少90％的耦合了MM的AB与EGFR的结合能力。2.根据权利要求1所述的可激活抗体，其特征在于：所述抗原结合片段选自Fab片段、F(ab′)2片段、scFv、dAb、一种单域重链抗体和一种单域轻链抗体所构成组中的片段。3.根据权利要求1所述的可激活抗体，其特征在于：所述抗体是一种全尺寸的抗体。4.根据权利要求1所述的可激活抗体，其特征在于：AB是或是衍生于西妥昔单抗或帕尼单抗。5.根据权利要求1所述的可激活抗体，其特征在于：所述可裂解基团是一种对于选自uPA、天冬酰胺内肽酶、纤溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9、MT1-MMP、组织蛋白酶、凋亡酶、人类中性粒细胞弹性蛋白酶、β-分泌酶、PSA以及在表3中的酶所构成的组中的酶的底物。6.根据权利要求1所述的可激活抗体，其特征在于：所述可裂解基团是选自uPA、蛋白裂解酶、半胱氨酸蛋白酶和MMP的酶的底物。7.根据权利要求1所述的可激活抗体，其特征在于：所述MM不含有大于25％的与AB的天然结合配体相同的氨基酸序列。8.根据权利要求1所述的可激活抗体，其特征在于：所述MM多肽序列与AB的天然结合配体不大于10％的相同。9.根据权利要求1或权利要求4所述的可激活抗体，其中所述MM含有选自CISPRGCPDGPYVMY、CISPRGCPDGPYVM、CISPRGCEPGTYVPT、CISPRGCPGQIWHPP、CISPRGC、C(N/P)H(HVF)(Y/T)(F/W/T/L)(Y/G/T/S)(T/S/Y/H)CGCISPRGCG、在表42中记载的MM以及在表43中列出的MM所组成的组中的一种共有序列。10.根据权利要求1所述的可激活抗体，其特征在于：与可激活抗体与EGFR在健康组织中结合的亲和力相比，可激活抗体与EGFR在病变组织中结合的亲和力较高。11.根据权利要求10所述的可激活抗体，其特征在于：所述病变组织是乳腺癌组织、头部组织、颈部组织、肺组织、胰腺组织、神经系统组织、肝脏组织、前列腺组织、泌尿生殖系统组织或宫颈组织。12.根据权利要求1所述的可激活抗体，其特征在于：所述可裂解基团至少通过第一蛋白酶和第二蛋白酶被裂解。13.权利要求1所述的可激活抗体还包含至少下述组成中的一种：(i)一个第二AB，其特征在于：所述第二AB的靶点选自Notch1，EGFR、TNFalpha、CD11a、CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF、CD40、CD20、Notch2、Notch3、Notch4、Jagged1、Jagged2、CD52、MUC1、IGF1R、转铁蛋白、gp130、VCAM-1、CD44、DLL4、IL4和表1中的靶点所构成的组；或者(ii)一个第二可裂解基团，从而可激活抗体包括至少一个第一可裂解基团和一个第二可裂解基团，其特征在于：在靶点组织中所述第一可裂解基团是可被第一裂解剂所裂解的，并且其中，在靶...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·E·斯坦格莉安奥，J·W·威斯特，K·卡姆斯，P·H·贝塞特，F·格鲁克，J·萨格特，P·道格尔迪，
申请(专利权)人：希托马克斯医疗有限责任公司，
类型：发明
国别省市：