本发明专利技术涉及三价、双特异性抗体，用于制备其的方法，包含所述抗体的药物组合物及其应用。本发明专利技术的三价、双特异性抗体包含全长抗体，所述全长抗体特异性结合于第一抗原并且由两条抗体重链和两条抗体轻链组成，和融合于所述重链的一条的Ｃ－端的ＶＨ结构域，和融合于另一条所述重链的Ｃ－端的ＶＬ结构域，其中所述ＶＨ结构域和所述ＶＬ结构域在一起形成特异性结合于第二抗原的抗原结合位点。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】三价、双特异性抗体本专利技术涉及三价、双特异性抗体，用于制备它们的方法，包含所述抗体的药物组合物，及其应用。
技术介绍
最近已经开发了广泛多样的多特异性重组抗体形式，例如通过例如将IgG抗体形式和单链结构域进行融合形成的四价双特异性抗体(见，例如Coloma，Μ. J.，等，Nature Biotech (自然生物技术)15 (1997) 159-163 ；WO 2001/077342 ；和 Morrison, S. L.，Nature Biotech (自然生物技术)25 (2007) 1233-1234)。还开发了能够结合两种以上的抗原的一些其它新的形式，其中抗体核心结构 (IgA, IgD, IgE, IgG或IgM)不再被保持，诸如双抗体(diabodies)、三链抗体或四链抗体(tetrabodies)、微型抗体(minibodies)、一些单链形式(scFv，双-scFv) (Holliger, P.，等，Nature Biotech (自然生物技术)23 (2005) 1126-1136 ；Fischer, N.，和 L6ger，0.， Pathobiology(病理生物学)74(2007)3-14 ；Shen, J.，等，Journal of Immunological Methods (免疫学方法杂志)318 0007)65-74 ;mi，C.，等，Nature Biotech.(自然生物技术)25(2007)1290-1297)。所有这些形式使用接头来将抗体核心(IgA，IgD, IgE, IgG或IgM)融合于其它的结合蛋白(例如scFv)，或融合例如两个Fab片段或scFvs (Fischer，N.，和L6ger，0.， Pathobiology (病理生物学)74 (2007) 3-14)。要注意的是，可能技术人员想通过维持与天然存在的抗体的高度类似性来保持通过Fc受体结合介导的效应子功能，如例如补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。在WO 2007/024715中，报道了双重可变的结构域免疫球蛋白作为改造的多价和多特异性结合蛋白。在US 6，897，044中报道了具有生物活性的抗体二聚体的制备方法。在 US 7，129，330中报道了具有至少四个彼此通过肽接头连接的可变结构域的多价Fv抗体构建体。在US 2005/0079170中报道了二聚体和多聚体抗原结合结构。在US 6，511，663中报道了三价或四价单特异性抗原结合蛋白，其包含通过连接结构彼此共价结合的三个或四个Fab片段，所述蛋白不是天然免疫球蛋白。在WO 2006/020258中报道了这样的四价双特异性抗体，其可以在原核细胞和真核细胞中有效表达，并且用于治疗和诊断方法中。在US 2005/0163782中报道了在包含两种类型的多肽二聚体的混合物中将通过至少一个链间二硫键连接的二聚体与不通过至少一个链间二硫键连接的二聚体分离或优先合成通过至少一个链间二硫键连接的二聚体的方法。在US 5，959，083中报道了双特异性四价受体。在 WO 2001/077342中报道了具有三个或多个功能性抗原结合位点的改造的抗体。在WO 1997/001580中报道了多特异性和多价抗原结合多肽。WO 1992/004053报道了同型缀合物(homoconjugates)，其典型地由结合相同抗原决定簇的IgG类的单克隆抗体制备，通过合成交联共价连接。在WO 1991/06305中报道了对于抗原具有高亲和力的低聚单克隆抗体，其中分泌典型地是IgG类的低聚物，其具有两种以上的免疫球蛋白单体，所述免疫球蛋白单体缔合在一起形成四价或六价IgG分子。在US 6，350，860中报道了绵羊来源的抗体和改造的抗体构建体，其可以用于治疗其中干扰素Y活性是致病性的疾病。在US 2005/0100543中，报道了可靶向的构建体，所述构建体是双特异性抗体的多价载体，即可靶向的构建体的每个分子可以作为两种以上双特异性抗体的载体。在WO 1995/009917 中报道了遗传改造的双特异性四价抗体。在WO 2007/1092M中，报道了由稳定的scFv组成或包含稳定的scFv的稳定的结合分子。专利技术简述本专利技术的第一个方面是三价、双特异性抗体，其包括a)全长抗体，其特异性结合于第一抗原并且由两条抗体重链和两条抗体轻链组成；b)多肽，其由下述组成ba)抗体重链可变结构域(VH)；或bb)抗体重链可变结构域(VH)和抗体恒定结构域1 (CHl)，其中所述多肽的VH结构域的N-端通过肽连接体(connector)融合于所述全长抗体的两条重链的一条的C-端；c)多肽，其由下述组成ca)抗体轻链可变结构域(VL)，或cb)抗体轻链可变结构域(VL)和抗体轻链恒定结构域(CL)，其中所述多肽的VL结构域的N-端通过肽连接体融合于所述全长抗体的两条重链的另一条的C-端；并且其中在b)中的多肽的抗体重链可变结构域(VH)和在C)中的多肽的抗体轻链可变结构域(VL)在一起形成特异性结合于第二抗原的抗原结合位点。本专利技术的另一个方面是编码根据本专利技术所述的三价、双特异性抗体的核酸分子。本专利技术的又一个方面是包含所述三价、双特异性抗体的药物组合物。根据本专利技术所述的三价、双特异性抗体在一方面显示由于它们与不同抗原结合所导致的新的性质，并且在另一方面由于它们的稳定性、低聚集性和药物动力学性质和生物学性质而适合于生产和药物配制。由于它们的Ig核心，它们仍旧保持天然抗体的性质如 ADCC 禾口 CDC0专利技术详述本专利技术的一个方面是三价、双特异性抗体，其包括a)全长抗体，其特异性结合于第一抗原并且由两条抗体重链和两条抗体轻链组成；b)多肽，其由下述组成ba)抗体重链可变结构域(VH)；或bb)抗体重链可变结构域(VH)和抗体恒定结构域1 (CHl)，其中所述多肽的VH结构域的N-端通过肽连接体(connector)融合于所述全长抗体的两条重链的一条的C-端；c)多肽，其由下述组成 ca)抗体轻链可变结构域(VL)，或cb)抗体轻链可变结构域(VL)和抗体轻链恒定结构域(CL)， 其中所述多肽的VL结构域的N-端通过肽连接体融合于所述全长抗体的两条重链5的另一条的C-端；并且其中在b)中的多肽的抗体重链可变结构域(VH)和在C)中的多肽的抗体轻链可变结构域(VL)在一起形成特异性结合于第二抗原的抗原结合位点。任选地，在b)中的多肽的抗体重链可变结构域(VH)和在C)中的多肽的抗体轻链可变结构域(VL)通过在下述位置之间引入二硫键而通过链间二硫化物桥(disulfide bridge)连接并且稳定i)重链可变结构域位置44到轻链可变结构域位置100，ii)重链可变结构域位置105到轻链可变结构域位置43，或iii)重链可变结构域位置101到轻链可变结构域位置100 (总是根据Kabat的EU 索引编号)。引入非天然的二硫化物桥进行稳定的技术例如描述在WO 94/029350, Rajagopal, V.，等，Prot. Engin. (1997) 1453-59 ；Kobayashi，H.，等；核药物和生物学(Nuclear Medicine&Biology)，卷 25，本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．三价、双特异性抗体，所述抗体包括：ａ）全长抗体，所述全长抗体特异性结合于第一抗原并且由两条抗体重链和两条抗体轻链组成；ｂ）多肽，所述多肽由下述组成：ｂａ）抗体重链可变结构域（ＶＨ）；或ｂｂ）抗体重链可变结构域（ＶＨ）和抗体恒定结构域１（ＣＨ１），其中所述多肽的ＶＨ结构域的Ｎ－端通过肽连接体融合于所述全长抗体的两条重链的一条的Ｃ－端；ｃ）多肽，所述多肽由下述组成：ｃａ）抗体轻链可变结构域（ＶＬ），或ｃｂ）抗体轻链可变结构域（ＶＬ）和抗体轻链恒定结构域（ＣＬ），其中所述多肽的ＶＬ结构域的Ｎ－端通过肽连接体融合于所述全长抗体的两条重链的另一条的Ｃ－端；并且其中在ｂ）中的多肽的抗体重链可变结构域（ＶＨ）和在ｃ）中的多肽的抗体轻链可变结构域（ＶＬ）在一起形成特异性结合于第二抗原的抗原结合位点。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：乌尔里希·布林克曼，
申请(专利权)人：罗氏格黎卡特股份公司，
类型：发明
国别省市：CH
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