本发明专利技术涉及修饰的抗原结合分子(ABMs)。在具体的实施方案中，本发明专利技术涉及重组单克隆抗体或片段，包括嵌合的，灵长类化或人源化的抗体或片段，其具有改变的由靶抗原介导细胞信号传导活性的能力，和/或改变的介导一个或多个靶抗原交联的能力。另外，本发明专利技术涉及编码所述修饰的ABM的核酸分子，以及包含所述核酸分子的载体和宿主细胞。本发明专利技术进一步涉及用于产生本发明专利技术修饰的ABM的方法，以及在治疗疾病中应用这些修饰的ABM的方法。另外，本发明专利技术涉及具有改善的治疗特性的具有修饰的糖基化的修饰ABM，所述修饰的ABM包括具有增强的Fc受体结合和增加的效应子功能的抗体。
Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
The present invention relates to modified antigen binding molecules (ABMs). In particular embodiments, the present invention relates to recombinant monoclonal antibodies or fragments, including chimeric, primatized or humanized antibodies or fragments, with its ability to change from the target antigen mediated cell signaling activity, ability and / or change mediated by one or more target antigen crosslinking the. In addition, the present invention relates to nucleic acid molecules encoding the modified ABM, and vectors and host cells comprising said nucleic acid molecules. The invention further relates to a method for producing the modified ABM of the present invention, and to a method for applying these modified ABM in the treatment of diseases. In addition, the present invention relates to modified glycosylation modified ABM having improved therapeutic properties, the modified ABM comprising antibodies with enhanced Fc receptor binding and increased effector functions.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗原结合分子(ABMs)。在具体的实施方案中，本专利技术涉及重组单克隆抗体或片段，包括嵌合的，灵长类化(primatized)的或人源化的抗体或片段，其具有改变的介导祀抗原的细胞信号传导(signaling)活性的能力,和/或改变的介导一个或多个革巴抗原交联的能力。另外，本专利技术涉及编码所述ABMs的核酸分子，以及包含所述核酸分子的载体和宿主细胞。本专利技术进一步涉及用于产生本专利技术的ABMs的方法，以及在疾病治疗中利用这些ABMs的方法。另外，本专利技术涉及具有提高的治疗特性的具有修饰的糖基化的ABMs，其包括具有增加的Fe受体结合和增加的效应子功能的抗体。
技术介绍
抗体，也称为免疫球蛋白，其具有包括四条多肽链的基本结构:两条相同的重(H)链，与之成对的两条相同的轻(L)链。每条重链和轻链包括可变区(分别地，VH和VL)和恒定区(分别地，CH和CL)。CH区域具有3个结构域(CH1，CH2，和CH3)，而较小的CL区域仅具有I个结构域(简单地称为CL)。每个VH和VL区域包括3个互补决定区(⑶Rs)，其侧邻处于下列顺序的四个构架区域:FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。CDRs是V区域最可变的部分，并且决定抗体的抗原特异性。总之，一对VH和VL形成抗原结合位点，并且二价抗体具有两个这样的抗原结合位点。应该注意的是该基本抗体结构可以通过多种方法修饰(例如，通过产生该结构的片段)，而仍然保持或甚至改善所需的功能和/或抗原结合活性。VH和CHl结构域之间的界面包含保守的氨基酸。可以将该接触区域描述为“分子球窝关节”。该关节决定了 “肘运`动”以及还有所谓的VH和VL区域相对于CHl和CL区域的“肘角度”，并且防止在V和C区域间形成刚性接触(Lesk和Chothia,自然(Nature)(1988)335(8):188_190))。所述球窝关节的窝通过VH构架区中的氨基酸残基，特别是在位置11，110和112的那些形成(按照Kabat等，(1987)免疫性靶标的蛋白质的序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest),第4版(公共健康服务部(PublicHealth Services), NIH,华盛顿(Washington), DC)的编号系统)。(参见 Lesk 和 Chothia，自然(Nature) (1988)335(8) =188-190.)所述球窝关节的“球”在CHl结构域中，并且主要通过位置148和149的两个氨基酸形成(参见Landolfi等，免疫学杂志(J.1mmunol.)(2001) 166:1748-1754 ;Lesk 和 Chothia,自然(Nature) (1988)335(8):188-190)(其中将形成所述“球”的CHl残基分别编号为149和150))。这些位置的氨基酸的区别可以指示在V和C区域间形成的肘角度，以及由此的VH-VL 二聚体的方向(参见Lesk和Chothia，自然(Nature) (1988)335(8):188-190)。占据这些VH位置的氨基酸残基在全免疫球蛋白序列上是高度保守(参见，例如Lesk和Chothia，自然(Nature) (1988)335(8):188-190)。该关节中所涉及的所有残基(例如，位置11，110，112，148，和149)都位于构架区(例如，残基11，110，和112)或恒定结构域(例如，按照Landolfi等，148和149 ;按照Lesk和Chothia，149和150)中，并且似乎不直接涉及于抗原结合中。Landolfi等,免疫学杂志(J.1mmunol.)(2001)166:1748-1754。除介导效应子功能，如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)外，单克隆抗体可以通过诱导或抑制细胞信号传导途径调节细胞功能。例如，已显示出单克隆抗体介导抗原交联，激活死亡受体(例如，通过促进受体的低聚作用或模仿配体的结合)，并阻断细胞生长分化和/或增殖途径中配体介导的细胞信号传导(参见，例如 Ludwig 等，致 癌基因(Oncogene) (2003)22:9097-9106)。程序性细胞死亡(Apoptosis或programmed cell death)可以通过若干不同的机制触发。例如，通过细胞膜结合的“死亡受体”，例如肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员的信号传导途径活化可以导致程序性细胞死亡的诱发。同样地，表面抗原，例如CD20的二聚作用或交联也可以诱导程序性细胞死亡(参见，例如，Ludwig等,致癌基因(Oncogene)(2003)22:9097-9106)。仍旧存在对增强的靶向与细胞信号传导有关的抗原的治疗方法的需要，以治疗灵长类动物包括，但不限于，人的疾病，所述细胞信号传导包括，但不限于，程序性细胞死亡的诱导。专利技术简述认识到修饰的抗原结合分子(ABMs)巨大的治疗潜力，所述ABMs具有改变的介导靶抗原的细胞信号传导活性的能力，和/或改变的介导一个或多个靶抗原交联的能力，本专利技术人开发了所述ABMs，以及产生所述ABMs的方法。此外，该方法还涉及产生重组、嵌合抗体或其嵌合片段。这些修饰的ABMs的功效进一步通过改造抗体Fe区域的糖基化模式来增强。因此，在一个方面。本专利技术涉及包括重链或轻链可变区的修饰抗原结合分子，所述重链或轻链可变区与母体抗原结合分子的重链或轻链的可变区相比较，在所述重链或轻链的可变区的至少一个构架区中包括至少一个氨基酸残基的替换，其中当所述修饰的抗原结合分子与所述靶抗原复合时，所述替换导致靶抗原改变的细胞信号传导活性。在具体实施方案中，所述改变的细胞信号传导活性是程序性细胞死亡。在一个实施方案中，修饰的抗原结合分子具有增强的诱导程序性细胞死亡的能力。在另一个实施方案中，修饰的抗原结合分子具有降低的诱导程序性细胞死亡的能力。在另一个方面，本专利技术涉及包括重链或轻链可变区的修饰抗原结合分子，所述重链或轻链可变区与母体抗原结合分子的重链或轻链的可变区相比较，在所述重链或轻链可变区的至少一个构架区中包括至少一个氨基酸残基的替换，其中作为所述替换的结果，所述修饰的抗原结合分子具有改变的介导一个或多个靶抗原交联的能力。在一个实施方案中，本专利技术修饰的抗原结合分子包括重链可变区的FRl中的替换。在另一个实施方案中，所述替换包括选自由至少2，至少3或至少4个氨基酸组成的组中的取代。在一个实施方案中，所述替换包括重链可变区的整个FRl的取代。在进一步的实施方案中，所述整个FRl被种系VH FRl所取代。在具体的实施方案中，所述种系VH FRl包括Kabat位置8-13的氨基酸序列，其选自由下列各项组成的组:SEQ ID NO:63,SEQ ID NO:64，SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69, SEQ IDNO:70, SEQ ID NO:71，SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:75, SEQID NO:76, SE本文档来自技高网...
【技术保护点】
包含重链或轻链可变区的修饰的抗原结合分子，所述重链或轻链可变区与母体抗原结合分子的重链或轻链可变区相比，在所述重链或轻链可变区的至少一个构架区中包含至少一个氨基酸残基置换，其中当所述修饰的抗原结合分子与靶抗原复合时，所述置换导致所述靶抗原改变的细胞信号传导活性。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：巴勃罗·乌马纳，埃克哈德·默斯纳，
申请(专利权)人：罗氏格黎卡特股份公司，
类型：发明
国别省市：
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