结合EGFR的抗原结合分子，编码它的载体，及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗原结合分子(ABMs)。在特定的实施方案中，本发明专利技术涉及重组单克隆抗体，包括特异于人EGFR的嵌合的、灵长类化或人源化的抗体。此外，本发明专利技术涉及编码这些ABMs的核酸分子，和包括这些核酸分子的载体和宿主细胞。本发明专利技术还涉及用于产生本发明专利技术的ABMs的方法，并且涉及使用这些ABMs治疗疾病的方法。此外，本发明专利技术涉及具有修饰的糖基化的ABMs，所述ABMs具有改善的治疗性质，包括具有增加的Fc受体结合和增加的效应子功能的抗体。

【技术实现步骤摘要】
本申请是国际申请号为PCT/IB2006/000238，国际申请日为2006年月7日，中国申请号为200680004310.4，进入中国国家阶段日期为2007年8月7日，专利技术名称为“结合EGFR的抗原结合分子，编码它的咋提及其应用”的分案申请。  专利技术背景  专利
本专利技术涉及抗原结合分子(ABMs)。在特别的实施方案中，本专利技术涉及重组单克隆抗体，包括特异于人表皮生长因子受体(EGFR)的嵌合的、灵长类化(primatized)或人源化的抗体。此外，本专利技术涉及编码这些ABMs的核酸分子，和包括这些核酸分子的载体和宿主细胞。本专利技术还涉及产生本专利技术的ABMs的方法，和将这些ABMs用在治疗疾病中的方法。此外，本专利技术涉及具有修饰的糖基化作用和具有改善的治疗特性的ABMs，包括具有增加的Fc受体结合和增加的效应子功能的抗体。 
技术介绍
EGFR和抗-EGFR抗体  人表皮生长因子受体(也已知为HER-1或Erb-B1，并且在本文中称作″EGFR\)是170kDa的跨膜受体，其由c-erbB原癌基因编码，并且显示固有的酪氨酸激酶活性(Modjtahedi et al.，Br.J.Cancer73：228-235(1996)；Herbst和Shin，Cancer94：1593-1611(2002))。SwissProt数据库登录号P00533提供了EGFR的序列。还存在EGFR的同种型和变体(例如，可变RNA转录物，截短形式，多态性等)，包括但不限于Swissprot数据库登录号P00533-1，P00533-2，P00533-3，和P00533-4确定的那些。已知EGFR结合包括以下各项的配体：表皮生长因子(EGF)，转化生长因子-α()，双调蛋白，肝素结合EGF(hb-EGF)，β动物纤维素，和epiregulin(Herbst和Shin，Cancer94：1593-1611(2002)；Mendelsohn和Baselga，Oncogene19：6550-6565(2000))。EGFR经由酪氨酸激酶介导的信号转导途径调节许多细胞过程，包括但不限于激活控制细胞增殖、分化、细胞存活、程序性细胞死亡、血管发生、有丝分裂发生和转移的信号转导途径(Atalay et al.， Ann.Oncology14：1346-1363(2003)；Tsao和Herbst，Signal4：4-9(2003)；Herbst和Shin，Cancer94：1593-1611(2002)；Modjtahedi et al.，Br.J.Cancer73：228-235(1996))。  EGFR的过表达已经在许多人类恶性病症中报道，包括膀胱癌、脑癌、头和颈癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌和肾癌。(Atalay et al.，Ann.Oncology14：1346-1363(2003)；Herbst和Shin，Cancer94：1593-1611(2002)Modjtahedi et al.，Br.J.Cancer73：228-235(1996))。在这些病症的许多中，EGFR的过表达与患者的差的预后相关或关联。(Herbst和Shin，Cancer94：1593-1611(2002)Modjtahedi et al.，Br.J.Cancer73：228-235(1996))。EGFR也在正常组织的细胞中表达，特别是皮肤、肝脏和胃肠道的上皮组织，尽管通常水平比在恶性细胞中低(Herbst和Shin，Cancer94：1593-1611(2002))。  未缀合的单克隆抗体(mAbs)可以是用于治疗癌症的药，如由美国食品和药物管理局(U.S.Food and Drug Administration)所批准的下列药物所证明：用于治疗晚期乳腺癌的曲妥单抗(HerceptinTM；Genentech Inc，)(Grillo-Lopez，A.-J.，et al.，Semin.Oncol.26：66-73(1999)；Goldenberg，M.M.，Clin.Ther.21：309-18(1999))，用于治疗CD20阳性B细胞，低级或滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤的利妥昔单抗(RituxanTM；IDEC Pharmaceuticals，San Diego，CA，和Genentech Inc.，San Francisco，CA)，用于治疗复发性急性骨髓白血病的吉姆单抗(MylotargTM，Celltech/Wyeth-Ayerst)，和用于治疗B细胞慢性淋巴细胞白血病的阿仑单抗(CAMPATHTM，Millenium Pharmaceuticals/Schering AG)。这些产品的成功不仅依赖于它们的功效，还依赖于它们突出的安全模式(Grillo-Lopez，A.-J.，et al.，Semin.Oncol.26：66-73(1999)；Goldenberg，M.M.，Clin.Ther.21：309-18(1999))。尽管在这些药物上所取得的成就，目前在获得更高特异性抗体活性方面存在巨大的兴趣，所述特异性活性比典型地由未缀合的mAb疗法所提供的要高。  许多研究的结果显示Fc-受体依赖性机制相当大地有利于对针对肿瘤的细胞毒性抗体的作用，并且指示针对肿瘤的最佳抗体将优先结合激活Fc受体，并且与抑制性配偶体FcγRIIB结合程度最小。(Clynes，R.A.，et al.，Nature Medicine6(4)：443-446(2000)；Kalergis，A.M.，和Ravetch，J.V.，J. Exp.Med.195(12)：1653-1659(2002年6月)。例如，至少一项研究的结果显示FcγRIIIa受体中的多态性特别地与抗体疗法的功效紧密相关(Cartron，G.，et al.，Blood99(3)：754-757(2002年2月))。该研究显示对于FcγRIIIa是纯合的患者，与对于FcγRIIIa是杂合的患者相比，具有更好的针对利妥昔单抗的应答。作者得出结论为更优的应答是由于抗体与FcγRIIIa的更好的体内结合，其导致了针对淋巴瘤细胞的更好的ADCC活性(Cartron，G.，et al.，Blood99(3)：754-757(2002年2月))。  已经报道了靶向EGFR和阻断EGFR信号传导途径的各种策略。小分子酪氨酸激酶抑制剂如gefitinib，erlotinib和CI-1033在胞内酪氨酸激酶区域内阻断EGFR的自磷酸化，由此抑制下游信号传导事件(Tsao和Herbst，Signal4：4-9(2003))。另一方面，单克隆抗体，靶向EGFR的胞外部分，导致阻断配体结合并由此抑制下游事件如细胞增殖(Tsao和Herbst，Signal4：4-9(2003))。  已经产生了几种鼠单克隆抗体，其获得这种体外阻断并且已经在小鼠异种移植模型中评估它们影响肿瘤生长的能力(Masui，et本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多核苷酸，编码作为人源化抗EGFR抗原结合分子的部分特异性结合人EGFR的多肽，所述多肽包含重链可变区或轻链可变区，或其组合，其中所述重链可变区包含：(a)选自由SEQ ID NO：53，SEQ ID NO：59，SEQ ID NO：63，SEQ ID NO：65，SEQ ID NO：73，SEQ ID NO：123，和SEQ ID NO：125组成的组的重链互补决定区1(CDR1)；和(b)SEQ ID NO：79的重链CDR2；和(c)SEQ ID NO：107的重链CDR3；和其中所述轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO：113的轻链CDR1；和(e)SEQ ID NO：115的轻链CDR2；和(f)SEQ ID NO：117的轻链CDR3；和其中所述抗原结合分子包含所述重链可变区和所述轻链可变区。

【技术特征摘要】
2005.02.07 US 60/650,1151.一种分离的多核苷酸，编码作为人源化抗EGFR抗原结合分子的部
分特异性结合人EGFR的多肽，所述多肽包含重链可变区或轻链可变区，
或其组合，
其中所述重链可变区包含：
(a)选自由SEQ ID NO：53，SEQ ID NO：59，SEQ ID NO：63，SEQ ID 
NO：65，SEQ ID NO：73，SEQ ID NO：123，和SEQ ID NO：125组成的组的重
链互补决定区1(CDR1)；和
(b)SEQ ID NO：79的重链CDR2；和
(c)SEQ ID NO：107的重链CDR3；和
其中所述轻链可变区包含：
(d)SEQ ID NO：113的轻链CDR1；和
(e)SEQ ID NO：115的轻链CDR2；和
(f)SEQ ID NO：117的轻链CDR3；和
其中所述抗原结合分子包含所述重链可变区和所述轻链可变区。
2.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述分离的多核苷酸编码包含
重链可变区的多肽，和其中：
(a)重链CDR1选自由SEQ ID NO：53，SEQ ID NO：59和SEQ ID 
NO：65组成的组；和
(b)重链CDR2是SEQ ID NO：79；和
(c)重链CDR3是SEQ ID NO：107。
3.权利要求2的分离的多核苷酸，其中：
(a)重链CDR1是SEQ ID NO：53；和
(b)重链CDR2是SEQ ID NO：79；和
(c)重链CDR3是SEQ ID NO：107。
4.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述分离的多核苷酸编码包含
重链可变区的多肽，其中：
(a)重链CDR1由选自由下列各项组成的组的序列编码：SEQ ID 

\tNO：54，SEQ ID NO：60，SEQ ID NO：64，SEQ ID NO：66，SEQ ID NO：74，SEQ 
ID NO：122，和SEQ ID NO：124；和
(b)重链CDR2由SEQ ID NO：80编码；和
(c)重链CDR3由SEQ ID NO：108编码。
5.权利要求4的分离的多核苷酸，其中
(a)重链CDR1由选自由下列各项组成的组的序列编码：SEQ ID 
NO：54，SEQ ID NO：60和SEQ ID NO：66；和
(b)重链CDR2由SEQ ID NO：80编码；和
(c)重链CDR3由SEQ ID NO：108编码。
6.权利要求5的分离的多核苷酸，其中：
(a)重链CDR1由SEQ ID NO：54编码；和
(b)重链CDR2由SEQ ID NO：80编码；和
(c)重链CDR3由SEQ ID NO：108编码。
7.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述分离的多核苷酸编码包含
轻链可变区的多肽，和其中：
(a)轻链CDR1是SEQ ID NO：113；和
(b)轻链CDR2是SEQ ID NO：115；和
(c)轻链CDR3是SEQ ID NO：117。
8.权利要求7的分离的多核苷酸，其中：
(a)轻链CDR1由SEQ ID NO：114编码；和
(b)轻链CDR2由SEQ ID NO：116或SEQ ID NO：118编码；和
(c)轻链CDR3由SEQ ID NO：119编码。
9.权利要求8的分离的多核苷酸，其中：
(a)轻链CDR1由SEQ ID NO：114编码；和
(b)轻链CDR2由SEQ ID NO：118编码；和
(c)轻链CDR3由SEQ ID NO：119编码。
10.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述分离的多核苷酸编码包
含重链可变区的多肽和包含轻链可变区的多肽，和其中：
(a)重链可变区由选自由下列各项组成的组的序列编码：SEQ ID 
No：6；SEQ ID No：12；SEQ ID No：16；SEQ ID No：18；SEQ ID No：38和SEQ 

\tID NO：40；和
(b)轻链可变区由序列SEQ ID NO：46或SEQ ID NO：50编码。
11.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码包含重链
可变区的多肽，和其中所述重链可变区由选自由下列各项组成的组的序列
编码：SEQ ID No：6；SEQ ID No：12；SEQ ID No：16；SEQ ID No：18；SEQ ID 
No：38；和SEQ ID No：40。
12.权利要求10或权利要求11的分离的多核苷酸，其中所述重链可
变区由SEQ ID NO：16编码。
13.根据权利要求10或权利要求11的分离的多核苷酸，其中所述重链
可变区由SEQ ID NO：38编码。
14.根据权利要求10或权利要求11的分离的多核苷酸，其中所述重链
可变区由SEQ ID NO：40编码。
15.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述分离的多核苷酸编码包
含轻链可变区的多肽，和其中所述轻链可变区由SEQ ID No：46或SEQ ID 
No：50编码。
16.根据权利要求10或权利要求15的分离的多核苷酸，其中所述轻链
可变区由SEQ ID NO：46编码。
17.根据权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码包含
重链可变区的多肽，其中所述重链可变区由与选自由下列各项组成的组的
序列至少95％相同的序列编码：SEQ ID No：6；SEQ ID No：12；SEQ ID No：16；
SEQ ID No：18；SEQ ID No：38和SEQ ID NO：40。
18.根据权利要求17的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸与选自由
下列各项组成的组的序列至少99％相同：SEQ ID No：6；SEQ ID No：12；SEQ 
ID No：16；SEQ ID No：18；SEQ ID No：38和SEQ ID NO：40。
19.根据权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码包含
轻链可变区的多肽，和其中所述轻链可变区由与序列SEQ ID NO：46或
SEQ ID NO：50至少95％相同的序列编码。
20.根据权利要求19的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸与序列
SEQ ID NO：46或SEQ ID NO：50至少99％相同。
21.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述分离的多核苷酸编码：
(a)多肽，其包含重链可变区，所述重链可变区选自由下列各项组成
的组：SEQ ID No：5；SEQ ID No：11；SEQ ID No：15；SEQ ID No：17；SEQ ID 
No：37和SEQ ID No：39；和
(b)多肽，其包含来自除大鼠以外的物种的抗体Fc区域的序列。
22.根据权利要求21的分离的多核苷酸，其中所述抗体Fc区域是抗
体恒定区的部分。
23.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述分离的多核苷酸编码：
(a)包含SEQ ID No：45或SEQ ID NO：49的轻链可变区的多肽；和
(b)多肽，其包含来自除大鼠以外的物种的抗体轻链恒定区的序列。
24.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述分离的多核苷酸编码包
含重链可变区的多肽，所述重链可变区选自由下列各项组成的组：SEQ ID 
No：5；SEQ ID No：11；SEQ ID No：15；SEQ ID No：17；SEQ ID No：37和SEQ 
ID No：39。
25.权利要求24的分离的多核苷酸，其中所述重链可变区是SEQ ID 
NO：15。
26.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述分...

【专利技术属性】
技术研发人员：巴勃罗·乌马纳，埃克哈德·默斯纳，
申请(专利权)人：罗氏格黎卡特股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH