磷脂蛋白质微粒复合微球及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种磷脂蛋白质微粒复合微球及其制备方法。该制备方法包括如下步骤：将蛋白质或多肽类水溶性药物以及冻干保护剂的水溶液与磷脂的醇溶液搅拌混合，得到磷脂蛋白质的脂质囊泡混悬液；冷冻干燥除去溶媒，得到磷脂蛋白质微粒；将磷脂蛋白质微粒均匀分散于高分子载体材料的有机溶液中，再加入含有乳化剂的水溶液，高速剪切制备成S/O/W的乳液；再经过溶剂挥发、微球固化等过程形成磷脂蛋白质微粒复合微球。用本发明专利技术所述方法制备的磷脂蛋白质微粒复合微球，药物包封率高，突释率低(首日释放率为9％-15％)，释放速率稳定持久，制剂缓释期可达20-60天，微球中药物的生物活性高，具备临床应用的实际价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物制剂领域，特别是涉及一种磷脂蛋白质微粒复合微球及其制备方法。
技术介绍
随着基因组学、蛋白质组学和生物技术的高速发展，蛋白质和多肽药物的开发工作已经成为医药研发领域的热点之一。作为生物体内具备各种代谢功能的活性物质，蛋白质多肽药物涉及到激素、神经、细胞生长和生殖等各个领域。与小分子化学药物相比，蛋白质药物由于具备高活性和高选择性，往往疗效更为显著，且不良反应更少，安全性更高。因此，蛋白质药物已经成为治疗内分泌类、传染类、代谢类和疼痛缓解等多种疾病的一线药物。蛋白类药物在临床上主要以注射液和冻干粉针的剂型为主，为了达到疗效常常需要频繁地注射给药，严重影响患者的顺应性。因此，为了减少注射给药的次数而达到长效用药的目的，开发蛋白质药物的制剂就成为一个亟待解决的问题。在众多解决方法中，开发长效微球所取得的成果是最引人瞩目的。到目前为止，通过FDA批准的关于蛋白质多肽类药物的微球包括益普生公司的曲普瑞林微球、安万特公司的布舍瑞林微球、武田公司的亮丙瑞林微球等。聚乳酸(PLA)和聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)是最常用的微球载体材料。作为合成高分子材料，PLA和PLGA具备良好的生物相容性和生物降解性，最终均可降解为二氧化碳和水，在体内不会引起毒副反应，已经被广泛应用于生物制药和医用工程领域。在以往的研究中，一般常用W/O/W复乳法制备装载蛋白质药物的微球制剂。该法将水溶性蛋白质药物溶解于内水相中，加入溶解高分子材料的有机相中，通过超声或搅拌的方法制成O/W初乳，而后将初乳加入外水相搅拌形成W/O/W复乳，最后溶剂挥发干燥形成固化微球。但是W/O/W复乳法在制备过程中，由于内水相的蛋白药物容易渗漏至外水相，容易使得蛋白药物聚集在微球表层造成突释。另一方面，作为结构较为脆弱的生物活性试剂，蛋白质药物在W/O/W复乳法制备微球的过程中也会不可避免地与有机溶剂接触，从而导致蛋白质药物的活性下降。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种磷脂蛋白质微粒复合微球的制备方法，以提高微球制剂的包封率、降低其突释率，减少蛋白质药物在制备过程中与有机溶剂的直接接触，从而保持蛋白质药物的生物活性。具体技术方案如下。一种磷脂蛋白质微粒复合微球的制备方法，包括如下步骤：(1)将蛋白质或多肽类水溶性药物和冻干保护剂溶于水，得到的水溶液A与磷脂的醇溶液在温度为30-45℃的条件下搅拌混合，得到磷脂蛋白质的脂质囊泡混悬液；(2)将磷脂蛋白质的脂质囊泡混悬液冷冻干燥除去溶媒，得到磷脂蛋白质微粒；(3)将磷脂蛋白质微粒均匀分散于高分子载体材料的有机溶液中，再加入含有乳化剂的水溶液B，高速剪切制备成S/O/W乳液；(4)将S/O/W乳液置于含氯化钠或聚乙烯醇的水溶液C中，搅拌，挥发有机溶剂、固化微球；(5)离心收集微球，用超纯水洗涤微球，冷冻干燥，即得所述磷脂蛋白质微粒复合微球。在其中一些实施例中，步骤(1)所述的磷脂选自大豆磷脂酰胆碱、蛋黄磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、磷脂酸中的一种或几种。在其中一些实施例中，步骤(1)所述的磷脂选自大豆磷脂酰胆碱和/或蛋黄磷脂酰胆碱。在其中一些实施例中，步骤(1)所述的蛋白质或多肽类水溶性药物选自牛血清白蛋白、胸腺五肽、鲑鱼降钙素、胰岛素、艾塞那肽、促红细胞生成素、干扰素、生长激素、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、转化生长因子、胰岛素样生长因子、血管内皮细胞生长因子、血小板生长因子、内皮生长因子、神经生长因子、骨衍生性生长因子、重组人粒细胞集落刺激因子、凝血因子中的一种或几种。在其中一些实施例中，步骤(1)所述的蛋白质或多肽类水溶性药物选自牛血清白蛋白、胸腺五肽、鲑鱼降钙素、艾塞那肽、干扰素或表皮生长因子中的一种或几种。在其中一些实施例中，步骤(1)所述的冻干保护剂选自硫酸钠、乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠等盐类，蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等糖类，山梨醇、甘露醇、木糖醇、甘油等醇类，柠檬酸、酒石酸、乙二胺四乙酸等酸碱类，葡聚糖、聚乙二醇、聚维酮、明胶等聚合物，牛血清白蛋白、人血清白蛋白等蛋白质中的一种或几种。在其中一些实施例中，步骤(1)所述的冻干保护剂选自海藻糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇中的一种或几种，其质量为蛋白质或多肽类水溶性药物的40％-60％。在其中一些实施例中，步骤(1)所述的冻干保护剂选自海藻糖或甘露醇，其质量为蛋白质或多肽类水溶性药物的45-55％。在其中一些实施例中，步骤(1)所述醇为乙醇、正丙醇、异丙醇、叔丁醇中的一种或几种，所述水溶液A中蛋白质或多肽类水溶性药物的浓度为0.2-5mg/mL，醇溶液中磷脂的浓度为40-60mg/mL，醇溶液与水溶液A的体积比为1：3-7。在其中一些实施例中，步骤(1)所述醇为叔丁醇，所述水溶液A中蛋白质或多肽类水溶性药物的浓度为1.5-2.5mg/mL，醇溶液中磷脂的浓度为48-52mg/mL，醇溶液与水溶液A的体积比为1：4-6。在其中一些实施例中，步骤(3)所述的高分子载体材料选自聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物中的一种或两种，其分子量为10000-50000；所述高分子载体材料的有机溶液中的有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮或者碳酸二甲酯中的一种或几种，高分子载体材料的浓度为40-160mg/mL。在其中一些实施例中，步骤(3)所述的高分子载体材料选自聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物中的一种或两种，其分子量为35000-45000；所述高分子载体材料的有机溶液中的有机溶剂为二氯甲烷和/或碳酸二甲酯中，高分子载体材料的浓度为90-110mg/mL。在其中一些实施例中，步骤(3)所述乳化剂为聚乙烯醇、吐温-60或者吐温-80中的一种或几种，所述含有乳化剂的水溶液B中乳化剂的浓度为10-70mg/mL。在其中一些实施例中，步骤(3)所述乳化剂为聚乙烯醇，所述含有乳化剂的水溶液B中乳化剂的浓度为45-55mg/mL。在其中一些实施例中，步骤(3)所述磷脂蛋白质微粒与高分子载体材料的有机溶液的质量体积比为4-10mg/mL，高分子载体材料的有机溶液与含有乳化剂的水溶液B的体积比为1：3-18。在其中一些实施例中，步骤(3)所述磷脂蛋白质微粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种磷脂蛋白质微粒复合微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将蛋白质或多肽类水溶性药物和冻干保护剂溶于水，得到的水溶液A与磷脂的醇溶液在温度为30‑45℃的条件下搅拌混合，得到磷脂蛋白质的脂质囊泡混悬液；(2)将磷脂蛋白质的脂质囊泡混悬液冷冻干燥除去溶媒，得到磷脂蛋白质微粒；(3)将磷脂蛋白质微粒均匀分散于高分子载体材料的有机溶液中，再加入含有乳化剂的水溶液B，高速剪切制备成S/O/W乳液；(4)将S/O/W乳液置于含氯化钠或聚乙烯醇的水溶液C中，搅拌，挥发有机溶剂、固化微球；(5)离心收集微球，用超纯水洗涤微球，冷冻干燥，即得所述磷脂蛋白质微粒复合微球。

【技术特征摘要】
1.一种磷脂蛋白质微粒复合微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将蛋白质或多肽类水溶性药物和冻干保护剂溶于水，得到的水溶液A
与磷脂的醇溶液在温度为30-45℃的条件下搅拌混合，得到磷脂蛋白质的脂质囊
泡混悬液；
(2)将磷脂蛋白质的脂质囊泡混悬液冷冻干燥除去溶媒，得到磷脂蛋白质
微粒；
(3)将磷脂蛋白质微粒均匀分散于高分子载体材料的有机溶液中，再加入
含有乳化剂的水溶液B，高速剪切制备成S/O/W乳液；
(4)将S/O/W乳液置于含氯化钠或聚乙烯醇的水溶液C中，搅拌，挥发
有机溶剂、固化微球；
(5)离心收集微球，用超纯水洗涤微球，冷冻干燥，即得所述磷脂蛋白质
微粒复合微球。
2.根据权利要求1所述的磷脂蛋白质微粒复合微球的制备方法，其特征在
于，步骤(1)所述的磷脂选自大豆磷脂酰胆碱、蛋黄磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷
脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、鞘
磷脂、磷脂酸中的一种或几种。
3.根据权利要求2所述的磷脂蛋白质微粒复合微球的制备方法，其特征在
于，步骤(1)所述的磷脂选自大豆磷脂酰胆碱和/或蛋黄磷脂酰胆碱。
4.根据权利要求1-3任一项所述的磷脂蛋白质微粒复合微球的制备方法，
其特征在于，步骤(1)所述的蛋白质或多肽类水溶性药物选自牛血清白蛋白、
胸腺五肽、鲑鱼降钙素、艾塞那肽、干扰素或表皮生长因子中的一种或几种。
5.根据权利要求1-3任一项所述的磷脂蛋白质微粒复合微球的制备方法，
其特征在于，步骤(1)所述的冻干保护剂选自海藻糖、蔗糖、乳糖、麦芽...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘昕，陈龙楷，冯地桑，黄莹，吴涵，吴传斌，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44