一种负载生长因子的明胶缓释微球及其制备方法技术

本发明专利技术一种负载生长因子的明胶缓释微球及其制备方法，其以血小板复合生长因子为包裹对象，以明胶微球为载体，浸润膨胀后冷冻干燥制备所得。本发明专利技术制备的负载生长因子的明胶缓释微球能有效的应用复合生长因子，能在局部达到缓慢释放且作用长效的效果，能保持较持久的生物活性，更好的促进组织再生和创伤愈合，为初步实现载血小板复合生长因子明胶缓释微球冻干制品的研制提供参考。本发明专利技术提供的制备方法简单，操作方便，整个反应过程条件温和，市场前景广阔。

Sustained release gelatin microsphere with load growth factor and preparation method thereof

The present invention relates to a gelatin sustained release microsphere loaded with growth factor and a preparation method thereof, wherein, the platelet composite growth factor is used as a wrapping object, and the gelatin microsphere is used as a carrier to prepare and obtain the swelling after freeze drying. Gelatin microspheres load growth factor prepared by the invention can be used compound growth factor effectively, can achieve the effect of slow release and long effect in local, to maintain a lasting biological activity, promote tissue regeneration and wound healing, for the initial realization of platelet growth factor loaded composite gelatin microspheres of freeze-dried products the development of reference. The preparation method has the advantages of simple preparation, convenient operation, mild reaction condition and wide market prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种负载生长因子的明胶缓释微球及其制备方法
本专利技术涉及医药
，具体涉及一种负载生长因子的明胶缓释微球及其制备方法。
技术介绍
难愈性创面是指在期望的时间内不能正常愈合，是与部位和宿主有关的一类创面。难愈性创面的特点与修复难点在于创面局部缺乏良好的血供，难以生成新鲜血管，而且周围组织长期反复炎症刺激，造成纤维组织增生，瘢痕组织形成。由于创面长期不能愈合，皮肤组织缺损易液化感染甚至坏死，常常给患者造成了很大的心理压力和经济损失，严重影响了患者的身体健康及生活质量。近年来，使用单一生长因子或者复合生长因子进行治疗并制成缓释微球或制剂的常有报道，但是只针对某种疾病或创面进行愈合，使用范围局限，难以推广应用。富血小板血浆(plateletrichinplasma，PRP)在创伤修复领域的表现出色，其富含血小板源性生长因子(platelet-derivedgrowthfactor，PDGF)、转化生长因子β(transforminggrowthfactorbeta，TGF-β)、血管内皮生长因子(vascularepithelialgrowthfactor，VEGF)、表皮生长因子(epithe-lialgrowthfactor，EGF)、胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor，IGF)等促进创面愈合的生长因子。在PRP中加入凝血酶和钙离子后可形成血小板凝胶(PG)。PG具有与PRP相同的生长因子，且由血小板和纤维蛋白多聚体构成，其中的血小板激活后，可使血小板脱颗粒释放α颗粒内丰富的生长因子，分别和相互协同促进组织再生、对创面进行修复。传统PG降解快，支架不稳定；其包含的生长因子半衰期短、易变性、易酶解，在体内应用时局部扩散快、降解快，从而导致其有效浓度下降，有效作用时间缩短。缓释制剂是将药物赋予一定的载体，通过载体缓慢非恒速释放药物的一种制剂。明胶是动物骨或皮中胶原蛋白部分水解的产物，系由18种氨基酸与多肽交联形成的直链聚合物，是一种制备微球的良好的天然聚合物材料，在医学、化工等领域应用广泛。明胶微球可作为多种药物的载体，提高药物的稳定性、控制药物释放、靶向给药、掩盖药物的不良气味，其用放射性元素或荧光物质标记后可注入体内用于医学显影、示踪研究。由于明胶自身具有溶胶-凝胶特性，因而明胶微球还可作为制备其他材料微球的模板，但目前国内尚无成熟的明胶微球制品。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供一种缓释效果好、成本低、无毒副作用、具有安全性和实用性、能克服血小板凝胶的相关缺陷的负载生长因子的明胶缓释微球，进一步提供操作简单、成本低的制备负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法。为解决上述问题，采用的技术方案如下：一方面，本专利技术提供的一种负载生长因子的明胶缓释微球，其以血小板复合生长因子为包裹对象，以明胶微球为载体，浸润膨胀后冷冻干燥制备所得。进一步地，本专利技术提供的一种负载生长因子的明胶缓释微球，其中负载的所述生长因子包括但不限于PDGF-BB、TGF-β、VEGF。进一步地，本专利技术提供的一种负载生长因子的明胶缓释微球，其中负载的所述生长因子包括但不限于PDGF-BB、TGF-β、VEGF、IGF-1、bFGF、EGF等。进一步地，本专利技术提供的一种负载生长因子的明胶缓释微球，所述明胶缓释微球的平均粒径为15.95±3.79μm，微球粒径分布于7～20.5μm。另一方面，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，包括如下步骤：1)制备空白明胶微球：向盛有液体石蜡的容器中加入Span80，搅拌均匀后加热搅拌；再向容器中滴加明胶溶液，搅拌至乳化形成油包水型乳剂；将反应容器转入冰水浴中，待反应体系完全降温后，加入戊二醛预固化；预固化完成后，再补加戊二醛并于冰箱中静置；从冰箱中取出并倾倒出上层清液后，残余物进行后处理得到空白明胶微球；2)制备血小板复合生长因子：取静脉全血，经离心后得PRP，向PRP中加入激活剂，混匀，离心取上层清液得血小板复合生长因子，保存备用；3)制备明胶缓释微球：经步骤2)所得血小板复合生长因子加入装有步骤1)所得空白明胶微球的EP管中，充分浸润膨胀后进行冷冻干燥即得负载生长因子的明胶缓释微球。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)向容器中滴加明胶溶液时的搅拌速度为750～825r/min。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)中反应体系完全降温至0～5℃后，维持0～5℃继续搅拌；优选为4℃。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)中加入戊二醛预固化的时间为5～10min，优选5min；再补加戊二醛并于冰箱中静置12～36h，优选为24h。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)中明胶溶液的制备过程如下：取固体明胶，溶于40～60℃的蒸馏水中，搅拌溶解，配成质量分数为13％的明胶溶液，置于40～60℃的水浴箱中备用。更进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)中明胶溶液的制备过程如下：取固体明胶，溶于50℃的蒸馏水中，搅拌溶解，配成质量分数为13％的明胶溶液，置于50℃的水浴箱中备用。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)中液体石蜡与Span80的体积比为200:3。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)中液体石蜡的体积与明胶溶液的体积比为5:1。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)中预固化所用戊二醛和补加戊二醛的体积比为1:400。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)中所述戊二醛的质量分数为25％。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)中所述补加的戊二醛与液体石蜡的体积比为1:1。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，步骤1)中所述后处理是指向残余物中加入异丙醇脱水，然后用丙酮、异丙醇、石油醚三种溶剂依次洗涤，循环1～5次，经洗涤后的产物用抽滤机进行抽滤后，置于50～70℃的干燥箱中进行干燥，过20μm孔径筛后，装瓶储备待用。优选地，循环3次，在60℃干燥箱中干燥。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，步骤2)中经离心后所得PRP中血小板计数为1000×109/L。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，步骤2)中激活剂为含有100U/mL凝血酶的10％葡萄糖酸钙溶液。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，步骤2)中PRP与激活剂的体积比为10:1。进一步地，本专利技术提供一种如上所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，步骤2)中静脉全血离心是指采用两步离心法离心(两步本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种负载生长因子的明胶缓释微球，其特征在于，以血小板复合生长因子为包裹对象，以明胶微球为载体，经浸润膨胀后冷冻干燥制备所得；所述负载生长因子包括PDGF‑BB、TGF‑β、VEGF。

【技术特征摘要】
1.一种负载生长因子的明胶缓释微球，其特征在于，以血小板复合生长因子为包裹对象，以明胶微球为载体，经浸润膨胀后冷冻干燥制备所得；所述负载生长因子包括PDGF-BB、TGF-β、VEGF。2.如权利要求1所述的负载生长因子的明胶缓释微球，所述明胶缓释微球的平均粒径为15.95±3.79μm，微球粒径分布于7～20.5μm。3.一种如权利要求1～2所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，包括如下步骤：1)制备空白明胶微球：向盛有液体石蜡的容器中加入Span80，搅拌均匀后加热搅拌；再向容器中滴加明胶溶液，搅拌至乳化形成油包水型乳剂；将反应容器转入冰水浴中，待反应体系完全降温后，加入戊二醛预固化；预固化完成后，再补加戊二醛并于冰箱中静置；从冰箱中取出并倾倒出上层清液后，残余物进行后处理得到空白明胶微球；2)制备血小板复合生长因子：取静脉全血，经离心后得PRP，向PRP中加入激活剂，混匀，离心取上层清液得血小板复合生长因子，保存备用；3)制备明胶缓释微球：经步骤2)所得血小板复合生长因子加入装有步骤1)所得空白明胶微球的EP管中，充分浸润膨胀后进行冷冻干燥即得负载生长因子的明胶缓释微球。4.如权利要求3所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)中明胶溶液的制备过程如下：取固体明胶，溶于40～60℃的蒸馏水中，搅拌溶解，配成质量分数为15％的明胶溶液，置于40～60℃的水浴箱中备用。5.如权利要求3所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)向容器中滴加明胶溶液时的搅拌速度为750～825r/min；所述步骤1)中反应体系完全降温至0～5℃后，维持0～5℃继续搅拌；所述步骤1)中加入戊二醛预固化的时...

【专利技术属性】
技术研发人员：单桂秋，林放，施琳颖，周谋，王玲，
申请(专利权)人：广州军区广州总医院，
类型：发明
国别省市：广东,44