联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球及其制备方法和应用，涉及医药技术领域。本发明专利技术提供的联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球，具有抑制癌细胞增殖，促进骨组织再生的作用。另外，本发明专利技术还提供了联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球的制备方法，成功将骨膜去细胞支架和阿霉素明胶微球进行交联。本发明专利技术提供的联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球，体现了阿霉素明胶微球和骨膜的优点，在保障了药物缓释特性、抑制成骨细胞增殖效果的同时，也有利于骨组织的再生，为骨肉瘤的治疗提供了新的方法和思路。

Adriamycin gelatin microsphere combined with periosteum acellular scaffold and preparation method and application thereof

The present invention provides a adriamycin gelatin microsphere combined with periosteum acellular scaffold and its preparation method and application, and relates to the field of medical technology. The adriamycin gelatin microsphere combined with the periosteum acellular scaffold has the function of inhibiting the proliferation of cancer cells and promoting the regeneration of bone tissue. In addition, the invention also provides a preparation method of adriamycin gelatin microspheres combined with the periosteum acellular scaffold, and successfully cross-linked the periosteum acellular scaffold and the adriamycin gelatin microsphere. The invention provides a combined with adriamycin gelatin microspheres in periosteum acellular scaffold, embodies the advantages of adriamycin gelatin microspheres and periosteum, in the protection of the drug release characteristics, inhibit osteoblast proliferation effect at the same time, also favor the regeneration of bone tissue, provides new methods and ideas for the treatment of osteosarcoma.

【技术实现步骤摘要】
联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球及其制备方法和应用
本专利技术涉及医药
，尤其是涉及一种联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球及其制备方法和应用。
技术介绍
骨肉瘤是常见的骨骼系统原发恶性肿瘤之一，起源于骨间叶细胞，其特征为增殖的肿瘤细胞直接形成未成熟骨或骨样组织。典型的骨肉瘤比较罕见，其发病率约为百万分之0.3，其中包括0.2％的恶性肿瘤和15％的原发性骨肿瘤。典型的骨肉瘤好发于8-25岁的男性，好发部位为长骨，最常见于股骨远端或胫骨近端，其次为肱骨近端，其他部位少见，其血行转移发生早且发生率高。1970年之前，骨肉瘤的标准治疗方法为截肢，然而80％的患者在确诊时已经发生了转移。从外科治疗到出现肺转移的平均时间为8个月，5年生存率较低，大部分患者于确诊后1年内死亡。近年来，随着化疗的开展、手术技术的改进，骨骼重建以及其他的治疗方法的引进，骨肉瘤保肢治疗已逐渐取代截肢治疗，80％的患者更愿意接受保肢治疗，患者的5年生存率也从20％左右提高到了55％～75％。20世纪70年代至今，化疗始终在骨肉瘤治疗过程中占据重要地位，现今，常常将化疗与手术切除联合应用以治疗骨肉瘤。在骨肉瘤的化疗中，阿霉素的治疗具有显著的作用，其治疗的机理在于其能够插入细胞DNA，引发拓扑异构酶II介导的DNA单链以及双链结构的断裂。虽然阿霉素是治疗骨肉瘤非常有效的化疗药物，但其副作用也是显而易见的，阿霉素最显著的副作用在于它的心脏毒性和骨髓抑制作用，当使用剂量过大时，将会导致不可逆的心力衰竭，阿霉素的以上副作用大大限制了其在骨肉瘤治疗中的应用。此外，骨肉瘤的治疗可能会导致大范围的骨缺损，即使骨肉瘤疾病被治愈也会严重影响到患者的生活质量，较常用的填充骨间隙的方法为骨移植或者使用替代性骨材料。目前，人们已经认识到骨膜是植骨愈合与重建起始的关键，因此，也逐渐加大了对骨膜相似材料的研究。因此，如何将骨膜与药物化疗相结合，以治疗骨肉瘤疾病，并保证治疗的效果，具有重要的研究意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球，以缓解骨肉瘤治疗中出现的严重骨缺损的问题。本专利技术提供了一种联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球。进一步的，所述联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球的载药量为6.0-6.4μg/mg。本专利技术的第二个目的在于提供联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球的制备方法。本专利技术提供了一种联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球的制备方法，该方法包括：将所述阿霉素明胶微球与所述骨膜去细胞支架用交联剂进行交联。进一步的，所述骨膜去细胞支架由骨膜经过物理冻融操作和去污剂洗脱操作获得。进一步的，所述物理冻融操作的温度为-80℃，所述物理冻融操作的时间为1-2h。进一步的，所述去污剂包括tritonX-100和SDS。进一步的，所述骨膜去细胞支架的具体制备步骤如下：步骤(a)，取骨膜于-80℃放置2h，取出后于20℃下用PBS溶液震荡去血，得到去血的骨膜；步骤(b)，将所述去血的骨膜在摇床上依次用1％tritonX-100震荡6h，2.4％SDS震荡12h，重复操作1-2次，然后用去离子水震荡24h，得到所述骨膜去细胞支架，所述震荡的频率为100r/min。进一步的，所述阿霉素明胶微球的具体制备步骤如下：步骤(a)，用蒸馏水配制含有1mg/mL阿霉素以及0.05g/mL明胶的溶液，作为水相；步骤(b)，取Tween-80、Span-80和液体石蜡混匀，作为油相，所述油相中Tween-80、Span-80和液体石蜡的体积比为0.24:0.96:25；步骤(c)，在搅拌下，将所述水相缓慢加入到所述油相中，乳化形成W/O型乳剂，所述水相与所述油相的体积比为5:13；步骤(d)，将所述W/O型乳剂迅速冷却至5℃以下；步骤(e)，向所述W/O型乳剂中滴加交联剂，进行固化，得到所述阿霉素明胶微球。进一步的，所述交联剂包括戊二醛。另外，本专利技术还提供了联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球在制备治疗骨肉瘤药物中的应用。本专利技术提供的联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球，其制备方法为将阿霉素与骨膜去细胞支架交联，所制得的联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球的载药量为6.0-6.4μg/m。本专利技术提供的联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球，体现了阿霉素明胶微球和骨膜的优点，在保障了药物缓释特性、抑制成骨细胞增殖效果的同时，也有利于骨组织的再生，为骨肉瘤的治疗提供了新的方法和思路。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为D-periosteum的照片图；图2A1为N-periosteum经HE染色后的显微图；图2A2为N-periosteum经HE染色后的显微图；图2B1为D-periosteum经HE染色后的显微图；图2B2为D-periosteum经HE染色后的显微图；图3A1为N-periosteum的Fibrous层的电镜图；图3A2为N-periosteum的Fibrous层的电镜图；图3B1为N-periosteum的Cambium层的电镜图；图3B2为N-periosteum的Cambium层的电镜图；图3C1为D-periosteum的Fibrous层的电镜图；图3C2为D-periosteum的Fibrous层的电镜图；图3D1为D-periosteum的Cambium层的电镜图；图3D2为D-periosteum的Cambium层的电镜图；图3E为ADM-GMS的电镜图；图3F1为ADM-GMSD-periosteum的电镜图；图3F2为ADM-GMSD-periosteum的电镜图；图4为D-periosteum和N-periosteum的DNA含量分析数据图；图5为N-periosteum、D-periosteum和ADM-GMSD-periosteum的吸水性测定数据图；图6为ADM浓度-吸光度标准曲线图；图7为ADM、ADM-GMS和ADM-GMSD-periosteum的药物体外释放曲线图；图8为D-periosteum细胞毒性检测数据；图9为ADM-GMSD-periosteum细胞毒性检测数据；图10为ADM、ADM-GMS和ADM-GMSD-periosteum抑制细胞增殖率曲线图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供了一种联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球，是将骨膜进行脱细胞处理后形成骨膜去细胞支架，并制备阿霉素明胶微球，然后将阿霉素明胶微球交联于骨膜去细胞支架上。其中，阿霉素明胶微球的平均直径为20.13μm。为了有助于更清楚的理解本专利技术的内容，现结合具体的实施例对本专利技术的内容进行详细的介绍。需要注意的是，如未明确指出，说明书中涉及的操作方法为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球。

【技术特征摘要】
1.一种联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球。2.根据权利要求1所述的联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球，其特征在于，所述联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球的载药量为6.0-6.4μg/mg。3.权利要求1或2所述的联合于骨膜去细胞支架的阿霉素明胶微球的制备方法，其特征在于，该方法包括：将所述阿霉素明胶微球与所述骨膜去细胞支架用交联剂进行交联。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述骨膜去细胞支架由骨膜经过物理冻融操作和去污剂洗脱操作获得。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述物理冻融操作的温度为-80℃，所述物理冻融操作的时间为1-2h。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述去污剂包括tritonX-100和SDS。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述骨膜去细胞支架的具体制备步骤如下：步骤(a)，取骨膜于-80℃放置2h，取出后于20℃下用PBS溶液震荡去血，得到去血的骨膜；步骤(b)，将所述去血的骨膜在摇床上依次用1％tri...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅劲，陈川，余雅玲，王欣，章伟文，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33