杆菌肽锌制造技术

本发明专利技术的目的在于提供一种高纯度和高含量的杆菌肽锌，该杆菌肽锌的制备方法包括如下步骤：S1、将杆菌肽粉、粘合剂混合，加水稀释并调节pH至5-8，于10-25℃下造粒、-20℃-5℃干燥、过筛，喷涂上微透水膜，得到杆菌肽微囊；S2、调节无机锌水溶液的pH至8-11，逐渐加入上述制备的杆菌肽微囊，待成盐完全后用无机酸调节pH=5-7，搅拌并静置；S3、分离、干燥、粉碎，即成。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种杆菌肽盐，更具体地说，它涉及一种杆菌肽锌。
技术介绍
杆菌肽(Bacitracin)是一种有效的窄谱多肽抗菌素，其抗菌谱与青霉素类似，对革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌、螺旋体、放线菌有效。在实际应用中，杆菌肽不仅作为抗生素药物，也是畜禽抗生素饲料添加剂。杆菌肽(Bacitracin)，又名枯草菌素、枯草菌肽，其为白色粉末，在水、乙醇、吡啶中易溶。研究发现，杆菌肽为多种氨基酸结合而成的不稳定的多肽，含A、A1、B、C…G等多种组分，且其以杆菌肽A为主。目前公认杆菌肽A、B1和B2组分最具有生物活性，其含有约杆菌肽混合物95％的生物活性。杆菌肽A的分子式为C66H103N17O16S，其为一个十二肽，含有一个七元环。杆菌肽A含有一个由带-SH异亮氨酸的羧酸和半胖氨酸的-NH2缩合形成的不寻常的噻唑邻环，一个在赖氨酸的ε-NH2侧链和天门酰胺的C-端之间连接形成的环状七肽结构，以及四个D-氨基酸包括D-谷氨酸、D-鸟氨酸、D-苯丙氨酸和D-天门冬氨酸，其结构式如式I所示：式I中，Phe为苯丙氨酸，His为组氨酸，Asp为天门冬氨酸，Asn为天门酰胺，Lys为赖氨酸，Orn为鸟氨酸，Ile为异亮氨酸，Glu为谷氨酸，Leu为亮氨酸。研究发现，酸性或中性的杆菌肽水溶液相对较稳定，pH值5-7的溶液可稳定4周，pH大于9的溶液在室温下迅速降解。杆菌肽可与多种金属离子如铜、镍、钴、锌和锰等生成络合物，并在干燥状态下较稳定。研究发现，以锌盐形式存在的杆菌肽要稳定的多，Zn2+结合杆菌肽是通过组氨酸咪唑基的δ-N、噻唑啉环的硫原子和谷氨酸的羧酸酯。公开号为CN102161693A的中国专利公开了一种杆菌肽锌的制备方法，其步骤如下：在杆菌肽溶液中加入碱性溶液，调节pH＝8-11，加入无机锌成盐，用无机酸调节pH＝5-7，搅拌1-2小时，静置5-10小时，然后通过分离、干燥、粉碎、筛分、检验、成品。这种制备方法虽然也可以制备杆菌肽锌，但由于杆菌肽在pH＝8-11极不稳定，因此在pH＝8-11加入无机锌成盐时杆菌肽容易发生分解而造成产品的纯度和含量降低。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种高纯度和高含量的杆菌肽锌，其制备方法包括如下步骤：S1、将杆菌肽粉、粘合剂混合，加水稀释并调节pH至5-8，于10-25℃下造粒、-20℃-5℃干燥、过筛，喷涂上微透水膜，得到杆菌肽微囊；S2、调节无机锌水溶液的pH至8-11，逐渐加入上述制备的杆菌肽微囊，待成盐完全后调节pH＝5-7，搅拌并静置；S3、分离、干燥、粉碎，即成。先将杆菌肽粉制备成杆菌肽微囊，使杆菌肽粉和外环境隔绝且杆菌肽微囊在pH＝8-11的环境中形成一个缓释的体系；杆菌肽粉通过微透水膜缓慢释放至无机锌水溶液中并快速与无机锌反应，过程中杆菌肽粉被高pH破坏的可能性极小或几乎不发生分解，能保证成锌盐的过程中杂质的低生成或几乎不生成；且通过调节无机锌水溶液的pH和成盐后的pH，能保证成盐完全并除去未成盐的物质。作为优选，以重量计，所述杆菌肽粉和粘合剂的用量比为1∶0.1-0.5，所述杆菌肽粉和水的用量比为1∶2-5；所述粘合剂为水溶性粘合剂，其选自甘油、蔗糖和水溶性聚乙二醇中的至少一种；以重量计，所述杆菌肽粉和微透水膜的用量比为1∶0.3-0.8，所述微透水膜为环氧树脂和聚酰胺的混合物；微透水膜中，以重量计，所述环氧树脂和聚酰胺的用量比为1∶0.5-2。粘合剂为水溶性粘合剂，微透水膜为环氧树脂和聚酰胺的混合物，其均在水中有一定的溶解度，而杆菌肽锌在水中几乎不溶，可以通过溶解度的差异来进行提纯，同时这些添加的物质均为药用，无毒无害。作为优选，所述无机锌选自氧化锌、氯化锌、硫酸锌中的至少一种；以重量计，所述杆菌肽粉和无机锌的用量比为15-30∶1。氧化锌、氯化锌、硫酸锌均为可溶性锌盐，其具有较好的溶解度，而杆菌肽锌在水中几乎不溶，因此成盐的现象明显，其提纯或分离较为明显。作为优选，所述杆菌肽粉的制备方法包括如下步骤：SA，取杆菌肽发酵液进行酸化，经陶瓷膜过滤，得到陶瓷膜透出液；SB，将SA的陶瓷膜透出液经阳离子交换层析，收集阳离子交换层析上柱液；SC，将SB的阳离子交换层析上柱液经阴离子交换，收集阴离子交换上柱液；SD，将SC的阴离子交换上柱液经金属螯合，收集金属螯合柱液；SE，将SD的金属螯合柱液经纳滤处理，得到末次纳滤产品液；SF，将SE的末次纳滤产品液溶解，并将溶解的末次纳滤产品液过滤处理，取其滤液进行干燥、粉碎处理，即得医药级杆菌肽；其中，SA中的杆菌肽发酵液可用低含量的杆菌肽溶液代替；所述末次纳滤处理的纳滤膜的截留分子量为300Da-500Da。杆菌肽发酵液或低含量的杆菌肽溶液中含有目标杆菌肽、其他多肽类物质、糖类、色素和多种代谢产物等，其混合物中杂质较多较难分离。将杆菌肽发酵液或低含量的杆菌肽溶液，先经酸化处理，除了能保证杆菌肽的正常活性，还能除去一些碱性菌，同时能将体系内的杆菌肽的物质完全溶解在发酵液的溶液中；将经酸化的杆菌肽发酵液或低含量的杆菌肽溶液通过陶瓷膜过滤，一方面能除去一些大颗粒的物质，同时陶瓷膜的分离作用有利于将部分大分子的多肽或其他大分子物和杆菌肽分离，陶瓷膜还能吸附发酵液中的色素，有利于对杆菌肽发酵液或低含量的杆菌肽溶液进行初步的提纯，同时还能保护后续过程中的色谱柱；将陶瓷膜透出液依次进行阳离子交换层析、阴离子交换，有利于提高杆菌肽A这类两性化合物的纯度和含量；将阴离子交换上柱液经金属螯合再经纳滤处理，有利于除去发酵液中的重金属含量，有利于保证产品的安全性，使之符合药用标准；将末次纳滤产品液溶解，并将溶解的末次纳滤产品液过滤处理，重结晶再次除杂；通过上述多重的除杂过程，其起到了较好的提纯的组合效果，得到的杆菌肽符合药用标准，且其不受发酵液来源的限制，其具有较好的大生产化价值。作为优选，所述SA中，陶瓷膜为活性氧化铝或氧化锆；所述陶瓷膜的孔径为0.1-1.0μm。活性氧化铝或氧化锆均成非对称膜结构，当杆菌肽发酵液通过其时，其能通过其非对称膜结构进行提纯，有利于杆菌肽(杆菌肽A的分子量为1000-2000)这类低分子物质的通过而阻止高分子量多肽等的通过。作为优选，所述SB中，阳离子交换层析中使用的阳离子交换层析柱为BPG100/500，其阳离子交换层析的柱填料为CaptoSpimpres，所述洗脱液为0.1-2.5M的NaCl水溶液和pH＝3.0-5.5的NaAc-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杆菌肽锌，其特征在于，其制备方法包括如下步骤：S1、将杆菌肽粉、粘合剂混合，加水稀释并调节pH至5‑8，于10‑25℃下造粒、‑20℃‑5℃干燥、过筛，喷涂上微透水膜，得到杆菌肽微囊；S2、调节无机锌水溶液的pH至8‑11，逐渐加入上述制备的杆菌肽微囊，待成盐完全后调节pH=5‑7，搅拌并静置；S3、分离、干燥、粉碎，即成。

【技术特征摘要】
1.一种杆菌肽锌，其特征在于，其制备方法包括如下步骤：
S1、将杆菌肽粉、粘合剂混合，加水稀释并调节pH至5-8，于10-25℃下造粒、-20℃-5℃干燥、过筛，喷涂上微透水膜，得到杆菌肽微囊；
S2、调节无机锌水溶液的pH至8-11，逐渐加入上述制备的杆菌肽微囊，待成盐完全后调节pH=5-7，搅拌并静置；
S3、分离、干燥、粉碎，即成。
2.根据权利要求1所述的杆菌肽锌，其特征在于，
以重量计，所述杆菌肽粉和粘合剂的用量比为1:0.1-0.5，所述杆菌肽粉和水的用量比为1:2-5；所述粘合剂为水溶性粘合剂，其选自甘油、蔗糖和水溶性聚乙二醇中的至少一种；
以重量计，所述杆菌肽粉和微透水膜的用量比为1:0.3-0.8，所述微透水膜为环氧树脂和聚酰胺的混合物；微透水膜中，以重量计，所述环氧树脂和聚酰胺的用量比为1:0.5-2。
3.根据权利要求1所述的杆菌肽锌，其特征在于，所述无机锌选自氧化锌、氯化锌、硫酸锌中的至少一种；
以重量计，所述杆菌肽粉和无机锌的用量比为15-30:1。
4.根据权利要求1所述的杆菌肽锌，其特征在于，所述杆菌肽粉的制备方法包括如下步骤：
SA，取杆菌肽发酵液进行酸化，经陶瓷膜过滤，得到陶瓷膜透出液；
SB，将SA的陶瓷膜透出液经阳离子交换层析，收集阳离子交换层析上柱液；
SC，将SB的阳离子交换层析上柱液经阴离子交换，收集阴离子交换上柱液；
SD，将SC的阴离子交换上柱液经金属螯合，收集金属螯合柱液；
SE，将SD的金属螯合柱液经纳滤处理，得到末次纳滤产品液；
SF，将SE的末次纳滤产品液溶解，并将溶解的末次纳滤产品液过滤处理，取其滤液进行干燥、粉碎处理，即得医药级杆菌肽；
其中，SA中的杆菌肽发酵液可用低含量的杆菌肽溶液代替；
所述末次纳滤处理的纳滤膜的截留分子量为300Da-500Da。
5.根据权利要求4所述的杆菌肽锌，其特征在于，所述SA中，陶瓷膜为活性氧化铝或氧化锆；所述陶瓷膜的孔径为0.1-1.0μm。
6.根据权利要求4所述的杆菌肽锌，其特征在于，
所述SB中，阳离子交换层析中使用的阳离子交换...

【专利技术属性】
技术研发人员：芦琦，陈晓静，
申请(专利权)人：雅赛利台州制药有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33