一种提取大豆种子DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种大豆种子中高质量DNA的提取方法，解决了大豆种子基因组总DNA提取多糖去除不彻底、难提取的问题。步骤为：取适量大豆种子，粉碎成粉末状；取0.1g大豆样品粉末，加入20％SDS溶液100μl、500μlCTAB提取缓冲液和4μl蛋白酶K，65℃恒温水浴消化60min，每10min颠倒混匀一次；加入36μl?5mol/L?KAC，混匀，冰浴30min，离心；取上清，加等体积氯仿/异戊醇，混匀10min，离心；取上清，沿管壁缓慢旋转加入等体积预冷的异丙醇，室温下沉淀，离心；弃上清，70％乙醇洗涤沉淀3次；自然晾干，70μl?TE缓冲液溶解沉淀，-20℃冰箱保存。这种方法操作简单、快速，提取的基因组DNA条带清晰，完整性好，纯度最高，杂质含量少，可用于PCR检测，PCR特异性产物明显，重复性好，可以满足许多分子生物学实验需要。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提取大豆种子DNA的方法。
技术介绍
基因组DNA提取是PCR检测、限制性酶切、分子杂交等一切分子生物学研究的基础技术，大豆高质量基因组DNA提取的成功与否关键在于组织材料的来源以及酚类、多糖类等杂质的去除是否彻底。有些情况下，组织材料的来源、部位、形态等外在性质的不同以及化学成分、组织结构等内在特点的差异，在提取基因组DNA时需要选择不同的方法或做一些特殊的处理。传统CTAB方法目前在植物DNA提取中较为常用，且一般选用尽可能新鲜、 幼嫩的组织材料或幼苗，对于大豆而言，若以幼苗为材料，就必须经过浸种催芽、幼苗培养、 液氮研磨等过程，所以，大部分时间耗费在了实验材料的准备中。而传统的SDS法不能有效去除多糖等物质，提取的DNA不纯，含杂质较多。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术提供了一种提取大豆种子DNA的方法，本方法操作简单，可快速的提取大豆种子基因组DNA，提取的DNA条带清晰，完整性好，纯度高，杂质含量少，可用于PCR检测，PCR特异性产物明显，而且重复性好，可以满足许多分子生物学实验需要。本专利技术是通过以下技术方案实现的一种提取大豆种子DNA的方本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种提取大豆种子ＤＮＡ的方法，其特征在于，步骤如下：（１）取适量大豆种子，粉碎，待用；（２）取０．１ｇ上述粉末，置于１．５ｍｌ离心管中，加入１００ｕｌ　２０％的ＳＤＳ溶液、５００ｕｌ　ＣＴＡＢ提取缓冲液和４ｕｌ蛋白酶Ｋ，充分混匀后，放入６０～６５℃恒温水浴锅中消化６０ｍｉｎ，期间每１０ｍｉｎ颠倒混匀一次；（３）加入３６ｕｌ　５ｍｏｌ／Ｌ的ＫＡＣ，混匀，冰浴３０ｍｉｎ，１００００～１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ；（４）取上述离心后的上清液，置于另一离心管中，加入等体积的氯仿／异戊醇，轻柔颠倒混匀１０ｍｉｎ，１００００～１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ；（５）取上述离心后的上清液，沿管壁...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王存芳，刘天明，
申请(专利权)人：山东轻工业学院，
类型：发明
国别省市：88